桃金娘果實的化學成分研究

于 歡，胡雪純，張冬麗，李 敏，許 嶸，唐生安*

1.天津醫科大學藥學院，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津 300070

2.泉州醫學高等專科學校藥學院，福建 泉州 362011

桃金娘Rhodomyrtus tomentosa(Ait.) Hassk 是桃金娘科（Myrtaceae）桃金娘屬Rhodomyrtus(DC.)Reich 的常青灌木，別名豆稔、山稔、稔子樹、崗稔等，廣泛分布于南亞、東南亞地區，在我國廣東、廣西以及云南等地均有分布[1-2]。桃金娘的利用價值極高，其根、葉、果均可入藥，有收斂止瀉、祛瘀止血、安胎之功效[3]，其果實常作為一種滋補藥來增強免疫力，且具有極強的抗氧化活性[4]。研究表明桃金娘主要化學成分有間苯三酚類[5]、黃酮類、鞣酸類、多糖類以及三萜類[6]等，這些化合物大多具有較好的生物活性，如抗腫瘤[7]、抗炎[8]、抗菌[9]、抗氧化[10]以及保肝[11]等。

近年來對于桃金娘的研究主要集中在葉、根等部位，對果實的研究相對較少。為了進一步明確桃金娘的主要活性成分，以及便于桃金娘的進一步研究和開發利用，本實驗采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20 凝膠柱色譜及半制備高效液相色譜等色譜分離方法分離純化得到單體化合物，采用核磁共振波譜和質譜等波譜學方法鑒定單體化合物的結構。從桃金娘果實中分離得到9 個化合物（圖1），分別鑒定為桃金娘酚A（tomentosene A，1）、piceatannol 4′-O-(6″-O-galloyl)-β-D-glucopyranoside（2）、白皮杉醇（piceatannol，3）、piceatannol glucoside（4）、scirpusin B（5）、楊梅素（myricetin，6）、楊梅苷（myricitrin，7）、楊梅素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷（myricetin-3-O-α-L-furanoarabinoside，8）、沒食子酸（gallic acid，9）。其中，化合物1 為新化合物，化合物2、5 首次從該植物中分離得到。

圖1 化合物1～9 的結構Fig.1 Structures of compounds 1—9

1 儀器與材料

Bruker AVANCE III-400M 型核磁共振儀（德國布魯克公司）；Varian 7.0 T ESI-MS（Varian Inc.，CA，USA）；LC3000 型高效液相色譜儀；YMC-Pack ODS-A 制備型HPLC 色譜柱（250 mm×20 mm，5 μm，12 nm）；旋轉蒸發器RE-52AA 系列（上海亞榮生化儀器廠）；TDL-80-2B 離心機（上海安亭科學儀器廠）；Sephadex LH-20 由GE 公司生產，柱色譜硅膠（100～200、200～300、300～400 目）和薄層板色譜硅膠GF254均為青島海洋化工有限公司產品；實驗所用試劑均為分析純有機試劑，為天津市津東天正精細化學試劑廠產品；氘代試劑均為美國Cambridge Isotope Laboratories,Inc.生產。

桃金娘購于河北安國藥材批發市場，產地為廣西，由天津醫科大學唐生安副教授鑒定為桃金娘R.tomentosa(Ait.) Hassk 的干燥成熟果實，標本編號為T20171011，現存放于天津醫科大學藥學院天然藥化實驗室。

2 提取與分離

將桃金娘果實（干質量500 g）粉碎，95%乙醇浸漬，每次浸漬3 d，共浸漬3 次，浸漬液合并濃縮，得總浸膏（74.2 g）。總浸膏用水混懸，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚萃取物（7.0 g）、醋酸乙酯萃取物（7.0 g）、正丁醇萃取物（16.0 g）。

醋酸乙酯萃取物（7.0 g）用反相硅膠（ODS）柱進行色譜分離，甲醇-水（80∶20）洗脫，得到7個組分Fr.1～7。Fr.2（4.5 g）經Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離得到13 個組分Fr.2.1～2.13。Fr.2.6（570.6 mg）經重結晶后得化合物9（238.2 mg）；Fr.2.8（490.8 mg）經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜、反相半制備型HPLC 色譜[甲醇-水-冰醋酸（4∶6∶0.003）]分離純化，得到化合物4（22.8 mg）、7（7.0 mg）、8（5.8 mg）；Fr.2.9（313.8 mg）經反相半制備型HPLC 色譜分離，以甲醇-水-冰醋酸（1∶1∶0.003）洗脫，得到化合物3（28.9 mg）。

Fr.2.11（174.5 mg）經反相半制備型HPLC 色譜分離，以甲醇-水-冰醋酸（1∶1∶0.003）洗脫，得到7 個組分Fr.2.11.1～2.11.7。通過重結晶從Fr.2.11.4 中獲得化合物6（38.8 mg）。將Fr.2.11.1 用反相半制備HPLC 進行色譜分離[甲醇-水-冰醋酸（4∶6∶0.003）]得到 10 個組分 Fr.2.11.1.1～2.11.1.10。Fr.2.11.1.8 鑒定為化合物5（4.8 mg）。將Fr.2.11.1.7 通過反相HPLC[甲醇-水-冰醋酸（38∶62∶0.003）]純化，得到化合物1（2.6 mg）、2（3.2 mg）。

3 酸水解實驗

依據相關文獻報道進行新化合物的酸水解實驗[12]。將化合物1（2.6 mg）溶解于5 mL 濃度為2 mol/L 的鹽酸溶液中，95 ℃下加熱2 h，然后用5 mL氯仿萃取3 次。水層溶液用氮吹儀濃縮干燥，后用2 mL 無水吡啶溶解，再加入2.5 mgL-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽。混合物溶液在60 ℃下加熱2 h 后加入醋酸酐，然后在90 ℃下繼續加熱0.5 h，溶液隨后用氮吹儀吹干得供試品。供試品用安捷倫HP-5MS 毛細管電泳儀進行分析。進樣溫度為100 ℃，以10 ℃/min 的速度升溫至150 ℃，再以15 ℃/min 的速度升溫至280 ℃。以氦氣為載氣，體積流量為1.0 mL/min，入口溫度為260 ℃，電離源溫度為230 ℃。

4 結構鑒定

分析1H-1H COSY 譜（圖2），發現4 組自旋偶合系統，分別為H-2/H-4/H-6、H-7/H-8、H-5′/H-6′/H-2′、H-1′′/H-2′′/H-3′′/H-4′′/H-5′′/H-6′′；分析HMBC譜，發現存在H-7/C-1,C-2,C-6、H-8/C-2′、H-2′/C-3′、H-5′/C-3′,C-4′、H-2′′′,H-6′′′/C-1′′′,C-3′′′,C-4′′′,C-5′′′,C-7′′′等5 組遠程H-C 相關信號。綜合上述2D NMR 信號確定了化合物1 二苯乙烯部分的結構；化合物1 的酸水解實驗結果發現，其單糖乙酰化衍生物的保留時間（tR＝13.028 min），與標準品D-葡萄糖的乙酰化物的保留時間（tR＝13.056 min）基本一致，結合分析2D NMR 譜的相關信號確定了1 的糖基為β-D-葡萄糖；HMBC 譜（圖2）中，糖的端基質子 (δH4.69) 與δC146.8 (C-4′) 遠程相關，表明葡萄糖與C-4′連接。分析NOE 差譜（圖3）發現H-2′′′ (δH7.09) 同H-4、H-6 具有NOE 效應，據此確定了沒食子酰基應連接在C-5 位。綜上所述，化合物1 為新化合物，命名為桃金娘酚A。

表1 化合物1 的1H-HMR (400 MHz,CD3OD) 和13C-NMR (100 MHz,CD3OD) 數據Table 1 1H-NMR (400 MHz,CD3OD) and 13C-NMR (100 MHz,CD3OD) spectral data of compound 1

圖2 化合物1 主要的HMBC 及1H-1H COSY 相關Fig.2 Key HMBC and 1H-1H COSY correlations of compound 1

圖3 化合物1 中H-2′′′的NOE 差譜Fig.3 NOE difference spectrum of H-2′′′ in compound 1

化合物2：黃棕色粉末。ESI-MSm/z:559 [M＋H]+，分子式為 C27H26O13。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.38 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.07 (1H,t,J=2.0 Hz H-4),6.38 (2H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.68(1H,d,J=16.4 Hz,H-7),6.76 (1H,d,J=16.4 Hz,H-8),6.87 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),6.98 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.63 (1H,dd,J=8.4,2.0 Hz,H-6′),4.67 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1″),3.43 (1H,m,H-2″),3.36 (1H,m,H-3″),3.34 (1H,m,H-4″),3.68 (1H,m,H-5″),4.53 (1H,dd,J=2.0,10.0 Hz,H-6″a),4.35(1H,dd,J=7.6,10.0 Hz,H-6″b),7.05 (2H,s,H-2′′′,6′′′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:141.0 (C-1),106.0 (C-2),159.7 (C-3),102.9 (C-4),159.7 (C-5),106.0 (C-6),128.9 (C-7),129.0 (C-8),134.5 (C-1′),114.6 (C-2′),148.0 (C-3′),146.3 (C-4′),118.4 (C-5′),119.8 (C-6′),103.9 (C-1″),74.9 (C-2″),77.5 (C-3″),72.0(C-4″),75.9 (C-5″),64.9 (C-6″),121.4 (C-1′′),110.3(C-2′′),146.6 (C-3′′),140.0 (C-4′′),146.6 (C-5′′),110.3(C-6′′),168.2 (C-7′′′)。上述波譜數據與文獻對照基本一致[13-14]，故鑒定化合物2 為piceatannol 4′-O-(6″-O-galloyl)-β-D-glucopyranoside。

化合物3：淺棕黃色片狀結晶（甲醇）。mp 232.0～233.5 ℃，ESI-MSm/z:245 [M＋H]+，分子式為C14H12O4。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.46(2H,d,J=2.0 Hz,H-2,6),6.18 (1H,t,J=4.0 Hz,H-4),6.74 (1H,d,J=16.5 Hz,H-7),6.93 (1H,d,J=16.5 Hz,H-8),7.00 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.84(1H,d,J=2.0 Hz,H-5′),6.86 (1H,dd,J=8.1,1.9 Hz,H-6′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:141.3(C-1),105.8 (C-2),159.6 (C-3),102.6 (C-4),159.6(C-5),105.8 (C-6),129.7 (C-7),127.0 (C-8),131.1(C-1′),116.5 (C-2′),146.5 (C-3′),146.4 (C-4′),113.8(C-5′),120.3 (C-6′)。以上數據與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物3 為白皮杉醇。

化合物4：黃褐色固體。ESI-MSm/z:405 [MH]?，分子式為 C20H22O9。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.48 (2H,br,H-2,6),6.19 (1H,br s,H-4),6.87 (1H,d,J=16.0 Hz,H-7),6.95 (1H,d,J=16.0 Hz,H-8),7.05 (1H,d,J=1.9 Hz,H-2′),6.93 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),7.19 (1H,brd,J=8.4 Hz,H-6′) ,4.80 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1″),3.34～3.58 (4H,m,H-2″～5″),3.91 (1H,brd,J=12.0 Hz,H-6″a),3.73(1H,dd,J=12.0,5.6 Hz,H-6″b)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:139.5 (C-1),104.6 (C-2),158.3(C-3),102.7 (C-4),158.3 (C-5),104.6 (C-6),127.5(C-7),127.6 (C-8),133.2 (C-1′),113.1 (C-2′),145.1(C-3′),147.0 (C-4′),117.2 (C-5′),118.5 (C-6′),101.6(C-1″),73.5 (C-2″),76.9 (C-3″),69.9 (C-4″),76.2(C-5″),61.0 (C-6″)。上述數據與文獻的波譜數據基本一致[16-17]，故鑒定化合物 4 為 piceatannol glucoside

化合物5：淡黃棕色粉末。ESI-MSm/z:485 [MH]?，分子式為 C28H22O8。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.51 (1H,d,J=2.2 Hz,H-2),6.59 (1H,d,J=1.6 Hz,H-4),6.46 (1H,d,J=16.4 Hz,H-7),6.68(1H,d,J=16.4 Hz,H-8),6.65 (1H,d,J=1.6 Hz,H-2′),6.62 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5′),6.54 (1H,dd,J=2.0,8.0 Hz,H-6′),5.18 (1H,d,J=6.0 Hz,H-7′),4.23(1H,d,J=5.6 Hz,H-8′),6.15 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2″),6.52 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5″),6.48 (1H,dd,J=2.2,8.5 Hz,H-6″),6.04 (2H,d,J=2.0 Hz,H-2′′′,H-6′′′),6.06 (1H,d,J=2.0 Hz,H-4′′′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:136.0 (C-1),103.3 (C-2),158.7(C-3),95.8 (C-4),161.8 (C-5),118.8 (C-6),122.7(C-7),129.9 (C-8),131.0 (C-1′),112.7(C-2′),146.6(C-3′),146.5 (C-4′),115.4 (C-5′),118.5 (C-6′),94.9(C-7′),56.1 (C-8′),135.0 (C-1″),114.1 (C-2″),146.4(C-3″),146.3 (C-4″),116.3 (C-5″),120.0 (C-6″),146.7 (C-1′′′),106.4 (C-2′′′),158.9 (C-3′′′) ,102.3(C-4′′′),158.9 (C-5′′′),106.4 (C-6′′′)。以上數據與文獻對照基本一致[18-19]，故鑒定化合物5 為scirpusin B。

化合物6：褐色粉末。ESI-MSm/z:317 [M－H]?，分子式為C15H10O8。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.27 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.07 (1H,d,J=2.4 Hz,H-8),7.24 (2H,s,H-2′,6′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:148.0 (C-2),137.4 (C-3),177.3 (C-4),162.5 (C-5),99.2 (C-6),165.6 (C-7),94.4 (C-8),158.2(C-9),104.5 (C-10),123.1 (C-1′),108.5 (C-2′),146.7(C-3′),136.9 (C-4′),146.7 (C-5′),108.5 (C-6′)。以上數據與文獻對照基本一致[20]，故鑒定化合物6 為楊梅素。

化合物7：淡黃色片狀結晶（甲醇）。mp 181.5～183.5 ℃。ESI-MSm/z:465 [M＋H]+，分子式為C21H20O12。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.38 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6) ,6.22 (1H,J=2.0 Hz,H-8),6.97(2H,s,H-2′,6′),5.33 (1H,brs,H-1″),3.56 (1H,brs,H-2″),3.38 (1H,dd,J=9.4,2.9 Hz,H-3″),3.15 (1H,t,J=9.5 Hz,H-4″),3.82 (1H,brs,H-5″),0.97 (3H,d,J=5.6 Hz,H-6″)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:157.1 (C-2),134.5 (C-3),178.2 (C-4),161.8 (C-5),98.4 (C-6),164.6 (C-7),93.3 (C-8),158.0 (C-9),104.4(C-10),121.0 (C-1′),108.1 (C-2′),145.5 (C-3′),134.9(C-4′),145.5 (C-5′),108.1(C-6′),102.2 (C-1″),70.7(C-2″),70.6 (C-3″),71.9 (C-4″),70.5 (C-5″),16.3(C-6″)。以上數據與文獻報道一致[21]，故鑒定化合物7 為楊梅苷。

化合物8：黃色粉末。ESI-MSm/z:451 [M＋H]+，分子式為C20H18O12。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.40 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.21 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),7.15 (2H,s,H-2′,6′),5.48 (1H,brs,H-1″),4.36(1H,brs,H-2″),3.95 (2H,brs,H-3″,4″),3.57 (2H,m,H-5″)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:158.6 (C-2),134.9 (C-3),180.0 (C-4),166.0 (C-5),99.9 (C-6),166.2 (C-7),94.8 (C-8),159.4 (C-9),105.5 (C-10),122.0 (C-1′),109.4 (C-2′),146.9 (C-3′),136.3 (C-4′),146.9 (C-5′),109.4 (C-6′),109.6 (C-1″),88.1(C-2″),78.8 (C-3″),83.3 (C-4″),62.6 (C-5″)。以上數據與文獻報道對照基本一致[22]，故鑒定化合物8 為楊梅素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷。

化合物9：白色針晶（甲醇）。mp 237.0～238.0 ℃，ESI-MSm/z:171 [M＋H]+，分子式為C7H6O5。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:7.07 (2H,s,H-2,6)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:122.1 (C-1),110.4 (C-2,6),146.5 (C-3,5),139.8 (C-4),170.9(C-7)。以上數據與文獻報道對照基本一致[23]，故鑒定化合物9 為沒食子酸。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突