麝香不同成熟階段化學成分變化規律

竭 航，張承露，曾德軍，趙貴軍，封孝蘭，雷美艷

（重慶市藥物種植研究所，重慶市道地藥材規范化生產工程技術研究中心，重慶 408435）

麝香主要由我國一級重點保護瀕危野生藥用動物林麝Moschus berezovskiiFlerov 雄性個體分泌。據2020 年版《中國藥典》 記載，麝香具有開竅醒神、活血通經、消腫止痛的功效［1］。現代研究表明，麝香有抗腫瘤［2-3］、抗炎［4-5］的作用，并對心腦血管系統［6-7］、中樞神經系統［8］等均有顯著的影響。麝香的化學成分復雜，但其主要藥用成分為大環酮類（麝香酮、降麝香酮等）、吡啶類（麝香吡啶、羥基麝香吡啶等）、甾體類（膽甾醇等）［9］。因此，麝香中化學成分的含量決定了其藥用、經濟價值。為了探索林麝麝香最佳的采收年限，李碩等［10］采用GC-MS 法探索不同年齡段林麝麝香酮變化規律，結果表明，3 歲林麝麝香質量最高，達2.71%。此外，前人還比較了產地和品種對麝香品質的影響，結果顯示，林麝麝香中麝香酮相對含量高于馬麝（P＜0.01），而在林麝麝香中以陜西麝香酮含量最高［11］。而在同一年中，隨著麝香的成熟，麝香化學成分變化規律尚不得而知。

林麝分泌麝香分為2 個階段，第一階段在每年5 月下旬前后，林麝睪丸、香腺開始腫大，繼而香腺細胞分泌的初香液順著導管流入香囊中，大致經過4 周時間，隨著初香液越積越多，林麝睪丸和香腺的腫脹逐漸消退，林麝完成泌香反應，此時香囊中為乳白色極具腥臭味的液體。第二階段為初香液在香囊中經過水分的重吸收等生理生化反應，轉化為具有濃烈香氣的成熟麝香［12］。鑒于林麝分泌的初香液呈腥臭味，而無麝香特有的香味，提示，在林麝分泌麝香的過程中，麝香中成分種類及含量應該發生了顯著的變化。

本研究首次通過“活麝取香”法采集不同成熟階段麝香，通過GC-MS 法檢測其成分的含量，以期為林麝產香機制研究提供理論基礎，也對其品質分級和質量的提高起重要作用。

1 材料

1.1 儀器 QP 2010 plus 型氣相色譜儀-QP 5000型質譜聯用儀（日本島津公司）；5415R 型冷凍離心機（德國Eppendorf 公司）；BSA124S 型電子分析天平（萬分之一，德國Sartorius 公司）；JP-100 型超聲波清洗儀（深圳市潔盟清洗設備有限公司）。

1.2 動物 6 頭健康成年雄性林麝（3～5 歲）來源于重慶市藥物種植研究所林麝養殖基地（海拔678 m），平均體質量6.9 kg。林麝的飼養采用精飼料和青綠飼料相結合的方式，青綠飼料采用西南地區常見的紅薯藤Ipomoea batatas和光葉海桐嫩葉Pittosporum glabratum，自由采食；精飼料包括玉米、豆粕、麥麩、食鹽、維生素、礦物質等，2 種飼料混合后于每天17：30 飼喂。每天早上清洗水槽，并注滿干凈飲用水。

1.3 樣品 2016 年6 月28 日（陰）早上7：30，通過活麝取香法采集6 頭成年雄性林麝少許初香液，-80 ℃下保存，用于主要成分含量測定。同法分別獲取8 月26 日、10 月31 日6 頭林麝成熟中、已成熟的麝香，最低采集量為1.0 g。

2 方法

2.1 樣品干燥 對18 份樣品含水量進行檢測，每份精密稱量300 mg，置于五氧化二磷干燥器中干燥，每隔30 min 精密稱定1 次，直至質量恒定。

2.2 樣品提取 對18 份樣品進行提取，每份精密稱量100 mg，分別溶于2.5 mL 無水乙醇（純度＞99.7%）、2.5 mL 乙醚（純度＞99.5%）中，超聲振蕩提取2 h，13 000 r／min 冷凍離心5 min，上清液用于上機檢測。

2.3 色譜條件 DB5-MS 石英毛細管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；載氣高純度氦氣（純度≥99.99%）；柱壓49.5 kPa；體積流量0.9 mL／min；進樣量1.0 μL；乙醚、乙醇提取物分流比5∶1、10∶ 1；進樣口溫度280 ℃；接口溫度290 ℃；程序升溫（柱溫60 ℃保持5 min，10 ℃／min 升至150 ℃并保持5 min，5 ℃／min 升至280 ℃）。

2.4 質譜條件 EI 電離源；電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；四級桿溫度150 ℃；掃描范圍m／z35～1 000。

2.5 數據分析 通過儀器所配置的NIST 08.LIB譜庫進行自動檢索，結合相似度并參考有關文獻色譜保留指數，進行定性。采用Chroma TOF4.3X 軟件（LECO Corporation）和LECO-Fiehn Rtx5 數據庫分析處理峰圖，各物質相對含量為其峰面積與總峰面積的比值。采用SPSS 22.0 軟件中的ANOVA過程，進行差異顯著性分析。

3 結果

3.1 樣品采集 通過人工活麝取香的方法共無菌采集到18 份樣品，6 月底呈白色或乳白色豆腐渣狀，并散發出腥臭（酸臭／尿騷）味，取香時稍用力可被擠出香囊（初香麝香）；8 月底已變為深棕色固體，多呈塊狀，散發濃郁香氣（成熟過程中的麝香）；10 月底為棕褐色固體，主要呈粉末狀，也見部分當門子、塊狀、銀皮，油性較重，亦散發濃郁香氣（成熟品）。

3.2 含水量 6 月底采集的白香平均含水量為55.921%，8 月底、10 月底分別為 46.856%、36.029%，見表1。方差分析表明，6 月底麝香含水量高于10 月底（P＜0.05）與8 月底比較差異無統計學意義（P＞0.05）；8 月底與10 月底比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 不同成熟階段麝香含水量（，%）Tab.1 Moisture of musk harvested at different maturity stages（，%）

表1 不同成熟階段麝香含水量（，%）Tab.1 Moisture of musk harvested at different maturity stages（，%）

注：不同小寫字母之間代表差異有統計學意義（P＜0.05）。

3.3 成分數量 GC-MS 數據下機后，通過NIST 08.LIB 譜庫進行自動檢索。結果表明，6 月底采集的白香中檢測到55 種成分，8 月底、10 月底分別有83.67、69.67 種，見圖1。方差分析表明，隨著麝香的成熟，其成分種類呈先升后降的趨勢，其中8 月底高于6 月底（P＜0.05），而6 月底與8 月底比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

圖1 不同成熟階段麝香化學成分數量Fig.1 Chemical constituent quantities of musk harvested at different maturity stages

3.4 成分相對含量 6 月底、8 月底、10 月底麝香成分相對含量前20 位的分別占73.92%、85.58%、81.82%，對其作進一步整理分析，結果見表2。由此可知，不同成熟階段麝香成分變化較大，僅檢測到1 種同時存在于3 個階段中，為2，2′-亞甲基雙-（4-甲基-6-叔丁基苯酚）；只在10 月底檢測到的成分有11 種，其中烷烴類有8 種；只在6 月底檢測到的成分有17 種，包括酯類、酸類等。作為麝香標志性物質的麝香酮，在6 月底麝香中沒有檢測到，而在8 月底、10 月底其相對含量分別為1.39%、1.21%。此外，在6 月底麝香中沒有檢測到8-環十六烯-1-酮，而在8 月底、10 月底其相對含量分別達到48.93%、31.87%。

3.5 成分類別 圖2 顯示，麝香成分主要包括酮類、烷烴類、酯類、酚類、酸類、醇類；6 月底分布較為均衡，8 月底麝香酮類占大多數，10 月底烷烴類、酮類較多；6 月底僅檢測到1.75%的酮類，低于8 月底的62.44%、10 月底的38.24%（P＜0.01）；10 月底烷烴類成分相對含量為31.69%，高于6 月底的9.85%、8 月底的11.81%；酯類、酸類、醇類成分相對含量隨著時間的推移而降低。

圖2 不同成熟階段麝香中前20 位化學成分類別Fig.2 Categories of top twenty chemical constituents in musk harvested at different maturity stages

4 討論

麝香中的含水量受遺傳、環境及生理階段的影響較大。根據泌香的生理過程，在泌香期水分含量應最大，隨著水分的重吸收及麝香的發酵，到秋冬季節麝香應為最干燥的時間［13］。本研究中3～5 歲

林麝10 月底麝香的平均含水量為36.03%，基本達到2020 年版《中國藥典》 對麝香含水量的要求，且遠遠低于文獻［14］的研究結果，由于文獻中麝香樣品來源于陜西鳳縣，本研究麝香樣品來源于重慶南川，這與課題組前期觀察比較發現的陜西鳳縣麝香通常較濕的現象一致。本研究結果表明隨著時間的推移，麝香含水量逐漸下降，這與林麝的泌香生理過程相吻合。

表2 不同成熟階段麝香中前20 位化學成分相對含量Tab.2 Relative contents of top twenty chemical constituents in musk harvested at different maturity stages

麝香名字的由來為“香氣如射”，在雄性林麝交配期起到吸引異性和標記領域的作用［15-16］，主要成分包括大環酮類、甾體類、多肽類、酸類、酯類等，其中麝香酮為其重要活性成分及香氣來源［17-18］。據惠岑懌［19］的檢測結果表明，相對于成熟馬麝麝香1.31% 的麝香酮含量而言，未成熟馬麝麝香中麝香酮含量只有0.76%，這個結果與麝類的泌香規律相符合。課題組推測，麝香酮及8-環十六烯-1-酮的生成很有可能是在林麝分泌香液后的成熟過程中產生，也就是這個原因，造成了在初香液并不具備麝香特有的香味，而是具有濃烈的腥臭味。

由于林麝屬于國家一級保護野生動物，生性膽小，應激性很強，本研究只采集了6 頭林麝的麝香樣品，且試驗林麝無法避免在遺傳上的差異性，再加之麝香樣品具有一定的黏滯性，不能完全混合均勻，這對樣品的代表性具有一定的影響。另外，麝香成分復雜，6 月份麝香中的化學成分是通過哪些代謝通路最后變成成熟麝香，在初香液分泌后，是否還有其他化學成分分泌，有待進一步深入研究。