病毒定量檢測(cè)新技術(shù)研究進(jìn)展

韓 瑞，楊艷麗，師偉偉，郝成武，賀 筍

（天康生物制藥有限公司，新疆 烏魯木齊 830032）

病毒類產(chǎn)品已經(jīng)越來(lái)越多的應(yīng)用于疫苗、基因治療、癌癥治療等領(lǐng)域。由于其尺寸大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、穩(wěn)定性差的特殊結(jié)構(gòu)特征，病毒類生物制品的制備過(guò)程相比單體蛋白更具有挑戰(zhàn)性。在病毒類生物制品開發(fā)的過(guò)程中，病毒的準(zhǔn)確定量至關(guān)重要。病毒的定量方法可以分為四類：（1）測(cè)定病毒的感染水平；（2）檢測(cè)病毒功能性的結(jié)構(gòu)蛋白；（3）檢測(cè)病毒基因組核酸或標(biāo)記核酸；4）對(duì)病毒顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)。測(cè)定病毒感染水平是傳統(tǒng)的病毒定量方法，例如空斑形成單位（PFU）、50%組織細(xì)胞感染量（TCID50）、以及流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率等。然而這類檢測(cè)方法往往檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，且只能對(duì)具有感染活性的病毒進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)法滿足滅活后病毒的測(cè)定需要。抗體技術(shù)的發(fā)展使得病毒測(cè)定的特異性和靈敏度都有顯著提升。但酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）無(wú)法區(qū)分完整病毒與降解產(chǎn)物，且是否有合適的抗體是ELISA方法準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和基于結(jié)構(gòu)蛋白的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)大大提高了病毒的檢測(cè)速度和準(zhǔn)確性。近年來(lái)，逐漸出現(xiàn)了一些新的技術(shù)，已經(jīng)開始應(yīng)用于病毒的分析和定量檢測(cè)中。這些技術(shù)檢測(cè)速度快，并提供更多的病毒信息。本文就近年來(lái)出現(xiàn)的病毒定量檢測(cè)新技術(shù)，尤其是基于分離和病毒顆粒計(jì)數(shù)定量的新技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)行介紹，并對(duì)這些新技術(shù)在獸用疫苗開發(fā)中的應(yīng)用作了進(jìn)一步展望。……