金芩藍(lán)口服液對雞風(fēng)熱犯肺證的療效研究

鄧銳涵，周紫沖，楊艷艷，吳雪旖，馮靜，張露萍，李亦奇，冉蓉，陳洪亮，徐美榮，王林*

(1.濟(jì)南億民動(dòng)物藥業(yè)有限公司，濟(jì)南 250105；2.萊州市畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺 261400)

雞風(fēng)熱犯肺證屬溫?zé)岵》懂牐且驓鉁伢E變、季節(jié)交替，再加之流感、低致病性新城疫、傳支、傳喉等病毒混合感染細(xì)菌、支原體或寄生蟲等復(fù)雜因素所造成的病證[1-3]。證見發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹、眼睛變形結(jié)膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、扎堆、口渴等；本證在三焦辨證中屬上焦病證，在衛(wèi)氣營血辨證中則屬衛(wèi)分證；本證為肺失宣清所致，因此治療原則為清熱解毒、涼血利咽。

金芩藍(lán)口服液是以金銀花、連翹這經(jīng)典藥對共為君藥，有加強(qiáng)清熱解毒、疏散風(fēng)熱之功效[4-5]；黃芩、板藍(lán)根二者共為臣藥：黃芩常作清熱解毒之用，有瀉肺火、解肌熱之功[6-7]，板藍(lán)根清熱降火、涼血利咽，善于治療風(fēng)熱上攻所致咽喉腫痛、口舌生瘡[6,9-10]，二者既能起到?jīng)鲅獮a火、消腫止痛的功效，又能加強(qiáng)君藥透熱降溫的效果；諸藥共奏清熱解毒、涼血利咽之功效，用于治療和預(yù)防風(fēng)熱之毒侵襲機(jī)體引起的雞風(fēng)熱犯肺證。本研究旨在考察金芩藍(lán)口服液對雞風(fēng)熱犯肺證的療效，為本品臨床用藥推廣提供有效依據(jù)，為因此證造成的養(yǎng)禽業(yè)產(chǎn)肉率和產(chǎn)蛋率下降提供新的解決方案。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡白羽肉雞，飼養(yǎng)于控溫控濕半封閉動(dòng)物房中，專人飼養(yǎng)管理至14日齡，飼喂小雞全價(jià)糧。山東某蛋雞場中自然發(fā)病的蛋雞，本場標(biāo)準(zhǔn)免疫程序及飼養(yǎng)管理，飼喂產(chǎn)蛋期雞飼料，200日齡相繼發(fā)病。

1.1.2 受試藥物 金芩藍(lán)口服液，批號：20051001，由濟(jì)南億民動(dòng)物藥業(yè)有限公司提供；雙黃連口服液，批號：20052801，由濟(jì)南億民動(dòng)物藥業(yè)有限公司提供。

1.1.3 主要試劑和毒株 H9N2AIV(EID=10E-6.5,0.1 mL)，編號：HNAU0037，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；脂多糖(LPS標(biāo)準(zhǔn)品)，編號：L8880，購于SOLARBIO 公司。

1.2 方法

1.2.1 金芩藍(lán)口服液對人工雞感染風(fēng)熱犯肺證的治療試驗(yàn)

1.2.1.1 動(dòng)物模型的建立 將60只14日齡的健康雞隨機(jī)分為3組，分別為模型A組、模型B組和模型C組；模型A組用0.1 mL H9N2AIV液點(diǎn)眼滴鼻，模型B組腹腔注射80 μg/kg LPS，模型C組采用0.1 mL H9N2AIV點(diǎn)眼滴鼻和腹腔注射80 μg/kg LPS混合感染的方法進(jìn)行攻毒，將各組一同轉(zhuǎn)移至溫度10±2 ℃的密閉房間內(nèi)，持續(xù)冷風(fēng)吹4 h，隨后再轉(zhuǎn)移至42±2 ℃的密閉房間內(nèi)，持續(xù)熱風(fēng)吹4 h，然后移入標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)環(huán)境中；8 h后按上述步驟重復(fù)操作一次后，觀察記錄發(fā)病情況并進(jìn)行中獸醫(yī)辨證診斷。

1.2.1.2 藥物治療試驗(yàn)

1.2.1.2.1 病例納入標(biāo)準(zhǔn) (1)主癥：發(fā)熱，咳嗽，甩鼻，咽喉腫脹。(2)次癥：眼睛變形結(jié)膜充血，腹瀉，精神沉郁，食欲減退，扎堆，口渴。(3)符合2～3項(xiàng)主癥，1～2項(xiàng)次癥的病雞，可用于進(jìn)行雞風(fēng)熱犯肺證療效試驗(yàn)的評價(jià)。

1.2.1.2.2 分組及給藥方案 選取建模成功的病雞100只，隨機(jī)分為5組，分別為金芩藍(lán)高劑量組、金芩藍(lán)中劑量組、金芩藍(lán)低劑量組、藥物對照組、模型對照組；再隨機(jī)選取20只健康雞設(shè)立健康對照組，單獨(dú)專人飼養(yǎng)。具體給藥方案見表1；試驗(yàn)期給藥5 d，停藥觀察7 d，共12 d；每天測定肛溫并觀察記錄雞只情況，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算治愈率、有效率和無效率。

表1 分組及給藥方案

1.2.1.2.3 療效評價(jià) (1)治愈：用藥后主癥、次癥消失，且不復(fù)發(fā)判為治愈，計(jì)算治愈率。(2)有效：用藥后主要癥狀有所改善，精神食欲明顯改善，判為有效計(jì)算有效率。總有效率 = 治愈率 + 有效率。(3)無效：在用藥后病證無改善或加重、死亡或在停藥觀察期內(nèi)復(fù)發(fā)，判為無效。

1.2.2 金芩藍(lán)口服液對自然發(fā)病的雞風(fēng)熱犯肺證的臨床治療試驗(yàn)

1.2.2.1 病例確診 山東某蛋雞養(yǎng)殖場蛋雞群于200日齡左右開始陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹、眼睛變形結(jié)膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、被毛粗亂、口渴等癥狀；剖檢可見喉頭彌漫性出血，氣管環(huán)狀出血，氣管內(nèi)黃色干酪樣分泌物或黃紅色粘稠分泌物；治療前死亡率達(dá)到5%，整體產(chǎn)蛋率下降18%左右。經(jīng)中獸醫(yī)辨證為風(fēng)熱之毒引起的的風(fēng)熱犯肺證，故采用金芩藍(lán)口服液進(jìn)行臨床治療試驗(yàn)。

1.2.2.2 病例納入標(biāo)準(zhǔn) 同本文“1.2.1.2.1”。

1.2.2.3 分組及處理方案 根據(jù)“1.2.2.2”中的納入標(biāo)準(zhǔn)，選取600只病雞單獨(dú)飼養(yǎng)于另一消毒后的雞舍，隨機(jī)分為兩組，每組300只，金芩藍(lán)口服液組和雙黃連口服液組。根據(jù)推薦劑量，金芩藍(lán)口服液組用量按2 mL/L水，混飲，連用5 d；雙黃連口服液組用量按2.5 mL/L水，混飲，連用5 d。試驗(yàn)期給藥5 d，用藥結(jié)束后觀察7 d；試驗(yàn)期內(nèi)觀察記錄病程發(fā)展及死亡情況，試驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)治愈率、有效率和無效率。

1.2.2.4 療效評價(jià) 同本文“1.2.1.2.3”。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 利用spss22.0軟件進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 金芩藍(lán)口服液對人工感染雞風(fēng)熱犯肺證的治療試驗(yàn)

2.1.1 雞風(fēng)熱犯肺證模型的建立

2.1.1.1 臨床發(fā)病情況及剖檢變化 由表2可知，模型A組試驗(yàn)期發(fā)病率為50%，無死亡情況；模型B組試驗(yàn)期發(fā)病率為70%，死亡率為5%；模型C組試驗(yàn)期內(nèi)發(fā)病率為85%，死亡率為10%。病雞主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹、眼睛變形結(jié)膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、扎堆、口渴等癥狀，具體見表3。試驗(yàn)結(jié)束后剖檢處死病雞及病死雞均可見喉頭彌漫性出血，氣管環(huán)狀出血，氣管內(nèi)黃色干酪樣分泌物或黃紅色粘稠分泌物，如圖1所示。

表2 發(fā)病率、死亡率情況

表3 臨床發(fā)病癥狀

A 喉頭彌漫性出血；B 氣管環(huán)狀出血；C1 黃色干酪樣分泌物；C2 黃紅色粘稠分泌物。

2.1.1.2 中獸醫(yī)辨證及模型的確立 在《獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編》的指導(dǎo)下，確定以模型C組的方法建立模型，并根據(jù)剖檢變化和其主要癥狀(表3)經(jīng)中獸醫(yī)辨證符合風(fēng)熱犯肺證癥狀，此方法建立模型可供評價(jià)金芩藍(lán)口服液藥效試驗(yàn)用。

2.1.2 藥物治療試驗(yàn) 由圖2可知，給藥期間，金芩藍(lán)高、中劑量組解熱效果優(yōu)于金芩藍(lán)低劑量組和藥物對照組；觀察期內(nèi)，金芩藍(lán)高、中、低劑量組和藥物對照組解熱效果皆為良好。

圖2 試驗(yàn)期間雞肛溫變化情況折線圖(n=20)

由表4可知，金芩藍(lán)高劑量組治愈率為90%；金芩藍(lán)中劑量組治愈率為85%；金芩藍(lán)低劑量組治愈率為75%；藥物對照組治愈率為80%。金芩藍(lán)高、中、低劑量組和藥物對照組與模型對照組相比，治愈率差異極顯著(P<0.01)；金芩藍(lán)高、中劑量組與模型對照組相比，總有效率差異極顯著(P<0.01)；金芩藍(lán)低劑量組和藥物對照組與模型對照組相比，總有效率差異顯著(P<0.05)。結(jié)果表明，金芩藍(lán)高劑量組治愈率最高；金芩藍(lán)高、中劑量組總體療效要優(yōu)于金芩藍(lán)低劑量組和藥物對照組。

表4 藥物對雞風(fēng)熱犯肺證的治療效果

2.2 金芩藍(lán)口服液對自然發(fā)病的雞風(fēng)熱犯肺證的治療試驗(yàn) 由圖3可知，經(jīng)過治療，金芩藍(lán)口服液組的食欲恢復(fù)情況要優(yōu)于雙黃連口服液組。由圖4可知，給藥期內(nèi)，金芩藍(lán)口服液組與雙黃連口服液組的產(chǎn)蛋率都在穩(wěn)定恢復(fù)；觀察期內(nèi)，金芩藍(lán)口服液組產(chǎn)蛋能力恢復(fù)優(yōu)于雙黃連口服液組。

圖3 試驗(yàn)期間兩組雞日均采食量情況折線圖(n=300)

圖4 試驗(yàn)期間兩組雞日產(chǎn)蛋率情況折線圖(n=300)

由表5、表6可知，金芩藍(lán)口服液組治愈率為89%，總有效率為96.3%，死亡率為3%；雙黃連口服液組治愈率為86.7%，總有效率為94.4%，死亡率為5%。結(jié)果表明，金芩藍(lán)口服液與雙黃連口服液相比，具有更好的治療效果。

表5 藥物對自然感染雞風(fēng)熱犯肺證的治療效果

3 討論與結(jié)論

3.1 雞風(fēng)熱犯肺證模型的建立 中獸醫(yī)認(rèn)為，新城疫病毒、流感病毒、傳染性支氣管炎病毒、傳染性喉氣管炎病毒等為“疫氣”，也就是古文資料中所指的“瘟疫”，其皆屬于“熱毒”范疇；風(fēng)熱之毒可侵犯各日齡的肉雞、蛋雞，造成雞的風(fēng)熱犯肺證；多發(fā)于季節(jié)交替和溫度驟變期，而相關(guān)的研究報(bào)道多是理論研究或人用中藥研究[1-2]，或者采用自然發(fā)病雞只進(jìn)行試驗(yàn)[11]，尚未見雞風(fēng)熱犯肺證模型的有關(guān)報(bào)道；因此，本研究旨在建立雞風(fēng)熱犯肺證模型，以期可評價(jià)藥物療效。

周萌等人[12]發(fā)現(xiàn)，采用低致病性的H9亞型AIV對SPF雞攻毒時(shí)，發(fā)病癥狀非常輕微，臨床上表現(xiàn)不出明顯的癥狀；采用高致病性H5亞型AIV攻毒時(shí)，由于毒力過強(qiáng)，發(fā)病雞幾乎100%死亡。郭群等人[13]發(fā)現(xiàn)，利用LPS誘導(dǎo)可穩(wěn)定建立雞發(fā)熱模型。因此，本研究采用人工模擬熱應(yīng)激環(huán)境配合病毒以及內(nèi)毒素感染，綜合考察雞風(fēng)熱犯肺證模型。

根據(jù)《獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編》的指導(dǎo)，人工建立病理動(dòng)物模型的標(biāo)準(zhǔn)是發(fā)病率80%以上，有一定死亡率，病雞具有一定采食和飲水能力，能保證給藥的正常進(jìn)行。據(jù)此，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用AI H9V與LPS混合感染配合熱應(yīng)激的方式進(jìn)行建模時(shí)，試驗(yàn)雞發(fā)病率為85%、死亡率為10%且病雞發(fā)病期可進(jìn)行采食飲水，符合《獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編》相關(guān)要求。因此，研究成功建立雞風(fēng)熱犯肺證的動(dòng)物模型。

3.2 金芩藍(lán)口服液對人工感染雞風(fēng)熱犯肺證的治療試驗(yàn) 金芩藍(lán)口服液具有清熱解毒、涼血利咽之功效，金銀花、連翹二者配合具有良好的清表熱作用[4-5]；加之黃芩、板藍(lán)根二味藥材組方而成，亦具有良好的清里熱作用[6-10]；因此，金芩藍(lán)口服液對于風(fēng)熱犯肺證具有良好的治療效果。

試驗(yàn)結(jié)果表明，金芩藍(lán)高、中、低劑量組以及藥物對照組對于人工誘導(dǎo)的雞風(fēng)熱犯肺證具有良好的療效，且治愈率與模型對照組相比，均具有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而金芩藍(lán)高、中劑量組的綜合療效均優(yōu)于雙黃連口服液且具有良好的解熱作用。

因此，金芩藍(lán)口服液可臨床上用于雞的風(fēng)熱犯肺證，其推薦用量為2 mL/L水，混飲，連用5 d。

3.2 金芩藍(lán)口服液對自然發(fā)病的雞風(fēng)熱犯肺證的臨床療效試驗(yàn) 在自然發(fā)病的雞風(fēng)熱犯肺證治療試驗(yàn)中，通過《獸藥研究指導(dǎo)原則匯編》、《獸用中藥、天然藥物臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的指導(dǎo)，經(jīng)中獸醫(yī)辨證，選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的病雞進(jìn)行試驗(yàn)；結(jié)果表明，金芩藍(lán)口服液可有效的恢復(fù)病雞日采食量和日產(chǎn)蛋率，并且可有效的控制死亡率，其總有效率達(dá)到96.3%；因此，金芩藍(lán)口服液在推薦劑量下可有效的控制雞風(fēng)熱犯肺證。

3.3 結(jié)論 中獸醫(yī)辨證雞風(fēng)熱犯肺證制約著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，如不加以控制，發(fā)展到溫?zé)岵I、血分證，將會(huì)給養(yǎng)殖戶造成重大經(jīng)濟(jì)損失。研究通過人工建立動(dòng)物模型以及自然發(fā)病病例考察了金芩藍(lán)口服液的治療效果，結(jié)果顯示，金芩藍(lán)口服液可有效的治療雞風(fēng)熱犯肺證，推薦使用劑量為2 mL/L水，混飲，連用5 d。