泰地羅新注射液治療豬呼吸道疾病臨床療效試驗

李龍飛，孔 梅，鄭 莉，馮言言，常 雪，崔 進，吳連勇*，劉義明

（1．齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250100；2．中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所，北京 100081）

近年來，豬呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率逐漸上升，成為影響我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，豬呼吸道疾病的發(fā)病率在30%～80%，死亡率在30%以上。豬呼吸道疾病常呈多病原混合感染，是養(yǎng)豬疫病防治的難題[1]。豬呼吸道疾病可對各個日齡段的哺乳仔豬、育肥豬、母豬造成嚴重的危害。豬呼吸道疾病可使仔豬成活率降低，嚴重時保育豬死亡率可達60%以上；育肥豬生長緩慢，飼料利用率下降，出欄時間延長；母豬流產(chǎn)死胎，配種率降低[2-3]。引起豬呼吸道疾病的常見細菌包括豬胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血波氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌等，導致的細菌性疾病主要有豬喘氣病、豬傳染性胸膜肺炎、豬鏈球菌病、豬肺疫、副豬嗜血桿菌病等，成為豬養(yǎng)殖過程中亟待解決的問題[4]。

泰地羅新為新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。2011年，泰地羅新無菌注射液（商品名為Zuprevo）獲得歐盟獸用藥品委員會（CVMP）批準上市[5]，用于豬、牛由敏感菌引起的呼吸系統(tǒng)疾病的治療。泰地羅新產(chǎn)品特點：藥動學特性良好，能夠快速地從注射部位吸收，血漿濃度較高、分布廣泛，在靶組織肺中的有效作用濃度持續(xù)時間較長；肌內(nèi)注射能夠使給藥劑量更加準確，便于臨床使用。本研究以豬為研究對象，以常用治療藥物氟苯尼考注射液為對照藥物，按肌注給藥方式，進一步客觀、科學地評價泰地羅新注射液對細菌性感染引起的豬呼吸道疾病的臨床療效和臨床安全性，為泰地羅新注射液在國內(nèi)的臨床使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥品

受試藥物泰地羅新注射液：規(guī)格為50 mL、2 g，生產(chǎn)批號1303001；對照藥物氟苯尼考注射液：規(guī)格為100 mL、30 g，生產(chǎn)批號1401001。兩種藥品生產(chǎn)企業(yè)均為齊魯動物保健品有限公司。

1.2 試驗動物

山東六和平度市崔家集合作農(nóng)戶育肥廠，存欄規(guī)模2 000余頭。2014年12月底新進的一批育肥豬，新進育肥豬品系為長白、大白、杜洛克三元雜交，日齡40～45 d，體重14.5～18.6 kg。冬季爆發(fā)以呼吸急促和腹式呼吸、高熱、病豬精神沉郁等典型呼吸道癥狀為主要臨床癥狀的呼吸道疾病。通過發(fā)病過程、臨床癥狀、病理剖檢、致病菌的分離培養(yǎng)和鑒定選擇已表現(xiàn)典型呼吸道癥狀的病例豬130頭為試驗豬，其余豬按照豬場常規(guī)管理方法進行治療。

1.3 試驗設計

1.3.1 致病菌的分離培養(yǎng)和鑒定

受試豬在給藥治療前，從大群中選取部分病死豬或疑似發(fā)病豬采集心臟、肝臟、脾、肺及腸等組織樣本，并進行病原菌的分離培養(yǎng)和鑒定。

1.3.2 動物入選和剔除標準

入選標準：精神狀態(tài)評分≥2（不活躍，可能斜倚，但能站立，瘦弱，可能脫水），呼吸評分（呼吸頻率增加，有些出現(xiàn)腹式呼吸）≥2，并且體溫≥40 ℃。

剔除標準：已患病或與豬呼吸道無關(guān)的疾病（如腸道疾病、跛行等），體重范圍超標、外形發(fā)育不良、結(jié)構(gòu)異常或任何抗生素治療史，包括飼喂抗炎藥，或在研究開始前14 d內(nèi)接受過抗生素治療的動物。

試驗期間動物剔除標準：表現(xiàn)與呼吸道疾病無關(guān)的其他疾病癥狀的動物；表現(xiàn)嚴重不良反應的動物；試驗期間死亡并經(jīng)適當?shù)奈⑸飳W診斷確認與呼吸道疾病無關(guān)的動物。

1.3.3 動物分組與給藥

所選擇的具有典型臨床癥狀的130頭豬隨機分成2組，每組65頭，立即進行隔離治療、分別給予泰地羅新注射液與氟苯尼考注射液，給藥方案見表1。

表1 給藥方案Tab.1 Dosage regimen

1.3.4 臨床療效和觀察指標

用藥后每天8：00、18：00觀察各組豬的臨床癥狀，停止給藥后觀察10 d，詳細記錄試驗開始后、給藥前、給藥后和停藥后受試藥物組和對照藥物組的一般臨床特征和特殊癥狀的臨床表現(xiàn)以及癥狀的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸和消失情況。對癥狀進行記分，對給藥前后的精神狀態(tài)、體溫、體重、呼吸等進行監(jiān)測。

參照《抗菌藥物II、III期臨床藥效評價試驗指導原則》[6]]對給藥后試驗動物的臨床指標（呼吸和精神狀態(tài)）進行評定，并按評價標準計算出給藥后受試藥物和對照藥物的有效率、治愈率和死亡率。

1.3.4.1 有效率

試驗期間，根據(jù)以下的有效標準判定療效為有效，計算有效率。

有效標準：（1）活躍；（2）T＜40 ℃；（3）呼吸分值 =1 或 0；（4）精神狀態(tài)分值=1或0。

有效率=每組動物中的有效數(shù)/動物數(shù)×100% （1）

1.3.4.2 治愈率

試驗期間，根據(jù)以下的治愈標準判定療效為治愈，并計算治愈率。

治愈標準：（1）活躍；（2）T＜40 ℃；（3）呼吸分值=0；（4）精神狀態(tài)分值=0。

治愈率=每組動物中的治愈數(shù)/動物數(shù)×100% （2）

1.3.4.3 死亡率

在試驗期間，給藥后依舊死亡，并進行尸體剖檢有特征性病變；確定為死亡。根據(jù)死亡豬的數(shù)量計算死亡率。

死亡率=死亡的動物數(shù)量/試驗動物數(shù)×100% （3）

1.4 病理剖檢

試驗過程中，對死亡的動物進行病例剖檢，同時采集樣品進行組織病理學檢查。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

用SPSS 16.0統(tǒng)計方法進行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗，其中死亡率、有效率、治愈率均采用卡方檢驗，體重、體溫等數(shù)據(jù)采用t檢驗，結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗動物入選情況

2.1.1 臨床癥狀

病豬表現(xiàn)為發(fā)熱、體溫40.5 ℃以上、精神沉郁、食欲下降、呼吸困難、腹式呼吸，部分豬表現(xiàn)皮膚發(fā)紅或蒼白、皮膚和黏膜出現(xiàn)逆散形青紫色、耳梢發(fā)紫、眼瞼皮下水腫、口鼻排出血色泡沫；耳根、腹側(cè)、四肢內(nèi)側(cè)皮膚有紅斑，持續(xù)咳嗽；大部分病豬行走緩慢或不愿站立，跗關(guān)節(jié)有腫大現(xiàn)象，已死亡豬臨死前側(cè)臥或四肢呈劃水樣等。

2.1.2 實驗室的分離培養(yǎng)

試驗前期，通過對死亡豬和疑似病豬的心臟、肝臟、脾、肺及腸等進行細菌分離，分別用加血清的TSB培養(yǎng)基和含NAD、血清的TSB培養(yǎng)基，分離細菌并純化、培養(yǎng)，觀察細菌形態(tài)，并對分離細菌、組織樣品進行革蘭氏、亞甲基藍染色和鏡檢鑒定。 經(jīng)鑒定，所分離細菌為副豬嗜血桿菌和胸膜肺炎放線桿菌（見圖1、圖2）。

從臨床分離的豬呼吸道細菌分布情況看，引起豬呼吸道疾病的主要致病菌為胸膜肺炎放線桿菌和副豬嗜血桿菌。部分豬可同時分離出兩種病原菌，入選動物的細菌學分離培養(yǎng)結(jié)果見表2。本試驗也分離出一些擬桿菌，如豬鏈球菌等。通過豬場發(fā)病史、病豬的臨床癥狀、病理解剖、實驗室分離培養(yǎng)確定山東六和平度市崔家集合作農(nóng)戶育肥廠此次所爆發(fā)的疾病為胸膜肺炎放線桿菌和副豬嗜血桿菌等引起的豬呼吸道疾病，滿足試驗要求。

表2 給藥前細菌分離結(jié)果Tab.2 Results of bacterial isolation before administration 單位：頭

2.2 試驗性治療結(jié)果

2.2.1 給藥前及試驗結(jié)束后豬的體重變化（見表3）

表3 給藥前及試驗結(jié)束后豬的體重變化Tab.3 Pig weight change before dosing and after the test（n=65） 單位 ：kg

由表3可知，給藥前、試驗結(jié)束后受試組和對照組10 d豬的體重變化基本一致，無顯著差異。

2.2.2 給藥前和試驗結(jié)束后豬體溫、呼吸和精神狀態(tài)評分

在整個試驗過程中，對豬的體溫進行監(jiān)測，每天測定2次，監(jiān)測5 d，給藥前后豬的平均體溫變化見表4。呼吸和精神狀態(tài)觀察至給藥后10 d，結(jié)果見表5、表6。

表4 給藥前和試驗結(jié)束后豬平均體溫Tab.4 Average temperature of the pig before administration and after the test

由表4可知，給藥后，豬的體溫均呈現(xiàn)下降趨勢，給藥2 d時降至40 ℃以下，且受試藥物組與對照藥物組的體溫變化基本相同，差異不明顯。

表5 給藥前和試驗結(jié)束后豬的呼吸評分Tab.5 Comparison of pig's respiratory score before administration and after the test

表6 給藥前和試驗結(jié)束后豬的精神狀態(tài)評分Tab.6 Comparison of the mental state score of pigs before administration and after the test

由表5、表6可知，給藥后受試組和對照組病豬的呼吸和精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)。受試組和對照藥物組病豬分別在第4 d和第5 d呼吸精神狀態(tài)評分達到有效標準，給藥后第5 d和受試藥物組病豬達到治愈的標準；對照組的病豬治愈速度略慢于受試組。

2.2.3 治療效果

根據(jù)療效判定標準，在試驗結(jié)束后，對受試藥物組與對照藥物組的有效率、治愈率、死亡率進行生物統(tǒng)計學分析（X2檢驗），用藥后各組的治療效果見表7。

表7 各組治療效果Tab.7 Comparison of the treatment effect of each group（n=65） 單位 ：%

由表7可知，在試驗期間，受試藥物組與對照藥物組給藥后均起到明顯的治療效果，受試藥物組與對照藥物組的有效率和治愈率均達到75%以上，表明受試藥物與對照藥物對豬自然感染胸膜肺炎放線桿菌和副豬嗜血桿菌均具有良好的治療效果。

以有效率為評價指標：受試藥物組與對照藥物組的有效率分別為86.15%、78.46%，治愈率分別為83.08%、75.38%，死亡率分別為10.77%、16.92%。有效率、治愈率、死亡率結(jié)果經(jīng)卡方檢驗，雖無顯著差異，但泰地羅新注射液對于豬呼吸系統(tǒng)疾病效果明顯強于氟苯尼考注射液。

2.2.4 病理剖檢結(jié)果

試驗過程中，對死亡豬和疑似病豬進行剖檢，發(fā)現(xiàn)死亡豬胸膜炎、腹腔炎及關(guān)節(jié)炎明顯，以漿液性、纖維素性滲出為炎癥，腹腔有豆腐渣樣特征。肺有間質(zhì)水腫、壞死，心包積液、粗糙、增厚，腹腔積液，肝脾腫大、與腹腔有粘連，關(guān)節(jié)病變亦相似，表現(xiàn)為典型的細菌性豬呼吸系統(tǒng)疾病特征。部分剖檢結(jié)果見圖3～圖6。

3 討論

豬呼吸系統(tǒng)疾病主要由多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、肺炎支原體、副豬嗜血桿菌等感染引起，目前主要用于預防或治療該適應證的藥物是延胡索酸泰妙菌素預混劑、替米考星預混劑、氟苯尼考粉等。通常采用混飼或飲水，達到預防或治療的效果，需多天重復給藥。雖然效果良好，但隨著使用時間的延長，在很多地區(qū)出現(xiàn)不同程度的耐藥現(xiàn)象，治療效果逐步降低。

泰地羅新注射液單劑量肌內(nèi)注射給藥，用于治療豬呼吸系統(tǒng)疾病的藥效均強于泰樂菌素、替米考星和氟苯尼考等市場上廣泛使用的抗菌藥物。一次給藥、肌內(nèi)注射給藥方便、消除半衰期、生物利用度高、不易產(chǎn)生耐藥性，具有較好的優(yōu)勢。

泰地羅新的作用機理同其他大環(huán)內(nèi)酯類藥物，能與敏感菌的核糖體50S亞基結(jié)合，抑制肽鏈的合成和延長，影響細菌蛋白質(zhì)的合成，進而起到抑菌和殺菌作用[7]。泰地羅新特殊的三元結(jié)構(gòu)使其有更多的位點與細菌核糖體蛋白結(jié)合，起到抑菌和殺菌的作用，從而延長其在肺組織和支氣管液中的有效濃度時間[8]。

本試驗將出現(xiàn)臨床呼吸道疾病癥狀的豬隨機分為2組，分別肌內(nèi)注射泰地羅新注射液和氟苯尼考注射液。結(jié)果表明，泰地羅新注射液的治愈率為83.08%，氟苯尼考注射液的治愈率為75.38%。病原微生物分離鑒定結(jié)果表明，引起豬呼吸道癥狀的病原菌主要為胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌。進一步驗證泰地羅新注射液的臨床推薦給藥方案為：按照4 mg/kg體重劑量單次肌內(nèi)注射給藥。此外，按照說明書給藥，整個試驗中未見豬不良反應，說明該藥的安全性良好。

4 結(jié)論

泰地羅新注射液用于防治對泰地羅新敏感的豬胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌引起的呼吸道疾病，按照推薦劑量使用，臨床療效顯著。在臨床使用安全性方面，嚴格按照每個注射位點不超過5 mL給藥，不會引起豬的不良反應。