口腔扁平苔蘚患者血清長鏈非編碼RNA MIR155HG的表達(dá)及臨床意義

黎煒，路麗，辛越紅，郭明

口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)主要發(fā)生于口腔黏膜，50～70歲中年女性常患此病，發(fā)病率為0.5%～4%[1]。OLP發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前已有許多相關(guān)研究表明，OLP是一種慢性自身免疫性炎性紊亂性疾病，但是目前OLP具體病因不清，主要認(rèn)為是由T細(xì)胞介導(dǎo)的基底細(xì)胞液化變性和溶解的免疫反應(yīng)所導(dǎo)致，淋巴細(xì)胞浸潤導(dǎo)致基底細(xì)胞液化及上皮角化是該病的主要組織病理特征[2]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是一類功能性RNA，長度超過200個(gè)核苷酸，參與基因表達(dá)調(diào)控，與微小RNA(microRNA，miRNA)、信使核糖核酸(mRNA)或蛋白質(zhì)結(jié)合發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控作用[3-4]。近幾年研究表明，LncRNA參與許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程[5-6]，韓虎魁等[7]發(fā)現(xiàn)LncRNA MIR155HG可能參與慢性心力衰竭疾病的發(fā)生發(fā)展過程。唐敏等[8]發(fā)現(xiàn)LncRNA MIR155HG與系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病發(fā)生有關(guān)，然而LncRNA MIR155HG在OLP疾病中暫未見相關(guān)報(bào)道?，F(xiàn)觀察OLP患者血清LncRNA MIR155HG表達(dá)水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化，并分析LncRNA MIR155HG與口腔扁平苔蘚的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月—2020年4月中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院口腔科診治OLP患者43例(病例組)，均經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷。其中男11例，女32例，年齡26～59(48.13±7.28)歲；病程1～36(20.17±4.92)個(gè)月；依據(jù)患者病損基部黏膜狀況不同，分為非糜爛型亞組23例(病損灶呈灰白色、白色線狀花紋狀，未見糜爛及充血癥狀)和糜爛型亞組20例(病損區(qū)出現(xiàn)周圍黏膜充血、潰瘍或糜爛)。選取同期健康體檢者43例作為健康對照組，男13例，女30例，年齡25～59(47.51±7.12)歲。2組性別、年齡比較，以及非糜爛型亞組與糜爛型亞組病程比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者和家屬均知情同意并簽署知情同意書。

表1 2組臨床資料比較

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①無系統(tǒng)性疾病和免疫系統(tǒng)疾病史；②無吸煙史；③1年內(nèi)未進(jìn)行過口腔相關(guān)疾病手術(shù)治療及藥物治療。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝腎功能不全、自身免疫性疾病或惡性腫瘤患者；②近2周內(nèi)有嚴(yán)重感染或有長期感染性疾病的患者；③近90 d有服用抗生素、非甾體抗炎藥、免疫調(diào)節(jié)藥等可能影響免疫功能的藥物患者；④哺乳期及妊娠期婦女。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 血清LncRNA MIR155HG水平檢測：2組對象均于入院時(shí)抽取肘靜脈血樣本5 ml，離心獲取血清，冷凍保存待測。采用RNA提取試劑盒(北京天根生化有限公司生產(chǎn))提取血清總RNA 10 ml，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄(北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn))獲得cDNA，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)儀(美國Bio-Rad公司，型號7500)進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。AceQ qPCR SYBR?Green Mix熒光定量PCR試劑盒(南京諾唯贊生物科技有限公司生產(chǎn))。反應(yīng)體系共10 μl：miScript SYBR?Green Mix 5 μl，cDNA(50 ng/μl)1 μl，正反引物(10 μmol/L)各0.5 μl，ddH2O 3 μl。反應(yīng)條件：95 ℃ 90 s， 95 ℃ 30 s,63 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s,共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)標(biāo)本設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔，反應(yīng)結(jié)束收集數(shù)據(jù)，以2-△△CT法計(jì)算血清LncRNA MIR155HG相對表達(dá)量。LncRNA MIR155HG及其內(nèi)參GAPDH引物序列見表2。引物由北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司合成。

1.3.2 血清T細(xì)胞亞群檢測：取上述血清樣本10 μl與抗體20 μl混合、搖勻，染色15 min，添加溶血素FACS 450 μl，搖勻后室溫下避光約15 min，采用流式細(xì)胞儀(美國貝克曼庫爾特公司，型號DxFLEX)檢測OLP患者血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞亞群百分比。

2 結(jié) 果

2.1 各組血清LncRNA MIR155HG表達(dá)比較 健康對照組血清LncRNA MIR155HG表達(dá)為(1.18±0.21)，病例組為(7.26±1.76)，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t/P=25.859/0.000);糜爛型亞組(8.24±1.98)高于非糜爛型亞組(6.27±1.53)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t/P=3.676/0.001)。

2.2 各組T淋巴細(xì)胞亞群比較 與健康對照組比較，病例組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞亞群比例降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);糜爛型亞組CD4+、CD8+低于非糜爛型亞組(P<0.05)，見表3。

2.3 糜爛型OLP患者血清LncRNA MIR155HG水平與CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的相關(guān)性分析 Pearson法分析結(jié)果顯示，糜爛型OLP患者血清LncRNA MIR155HG水平與T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均呈負(fù)相關(guān)(r/P=-0.716/0.000、-0.667/0.001、-0.741/0.000、-0.566/0.000)。

2.4 血清LncRNA MIR155HG水平對糜爛型OLP的診斷價(jià)值 血清LncRNA MIR155HG水平診斷糜爛型OLP的曲線下面積為0.842(95%CI0.713～ 0.971，P<0.05)，截?cái)嘀禐?.632，敏感度和特異度分別為85.7%和86.4%，約登指數(shù)為0.721，見圖1。

圖1 血清LncRNA MIR155HG水平診斷糜爛型OLP的ROC曲線

3 討 論

OLP是一種較常見的T細(xì)胞介導(dǎo)的慢性自身免疫口腔黏膜性疾病，具有發(fā)病慢、病程長、不易治療等特點(diǎn)，對人們的身心健康造成嚴(yán)重威脅?？谇火つこ蕦ΨQ性白色、灰白色小丘疹組成的線狀、環(huán)狀病損等是OLP的主要臨床病理特征，且常伴有萎縮糜爛等病理特征。1978年，世界衛(wèi)生組織將OLP列為癌前狀態(tài)，而后將其歸為一種口腔黏膜潛在惡性病變[9]。相關(guān)研究表明，OLP癌變率達(dá)1.09%～1.14%[10]。如果不采取積極有效的控制措施，其癌變率有可能繼續(xù)升高，因此，尋找有效的生物標(biāo)志物對于早期發(fā)現(xiàn)OLP具有十分重要的意義。

表3 各組T淋巴細(xì)胞亞群比較

LncRNA是一類長鏈非編碼功能性RNA分子，主要位于細(xì)胞核內(nèi)或胞漿內(nèi)，只在真核細(xì)胞內(nèi)被轉(zhuǎn)錄，很少具有蛋白質(zhì)編碼功能[11]。LncRNA可通過多種途徑參與細(xì)胞生命活動(dòng)[12-14]。近年來，關(guān)于MIR155HG在結(jié)直腸癌、喉癌及心力衰竭等多種腫瘤疾病中的研究已有較多相關(guān)報(bào)道[15-18]。但是有關(guān)LncRNA MIR155HG在OLP中表達(dá)情況未曾報(bào)道，本研究通過對43例OLP患者血清中LncRNA MIR155HG表達(dá)量進(jìn)行檢測分析，旨在探討其在OLP中的變化及意義。研究結(jié)果顯示，與健康對照組比較，病例組血清LncRNA MIR155HG表達(dá)水平均顯著升高，且糜爛型亞組顯著高于非糜爛型亞組，表明LncRNA MIR155HG作為參與細(xì)胞生命活動(dòng)的重要因子，在OLP的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，且其水平變化與疾病嚴(yán)重程度存在一定關(guān)系，血清LncRNA MIR155HG表達(dá)水平隨病情加重而呈現(xiàn)明顯升高趨勢，但其參與OLP的具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

OLP發(fā)病因素復(fù)雜，較多研究表明T淋巴細(xì)胞浸潤導(dǎo)致基底細(xì)胞液化及上皮角化是OLP發(fā)生的可能原因。CD4+/CD8+反映機(jī)體中CD4+T淋巴細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞的平衡狀態(tài)，為機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的一項(xiàng)指標(biāo)，正常值1.4～2.0，若其比值>2.0 或<1.4，表明細(xì)胞免疫功能紊亂[19]。本研究通過對43例OLP患者T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測分析，結(jié)果顯示，與健康對照組比較，病例組CD4+、CD8+及CD4+/CD8+T細(xì)胞亞群比例均顯著降低，且糜爛型亞組顯著低于非糜爛型亞組，提示OLP患者T淋巴細(xì)胞亞群處于紊亂狀態(tài)，免疫水平較低。有研究報(bào)道，LncRNA能夠參與免疫細(xì)胞的分化和激活，在先天性和獲得性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[20-21]。本研究進(jìn)一步經(jīng)Pearson法分析結(jié)果顯示，糜爛型OLP患者血清LncRNA MIR155HG水平與T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值均呈負(fù)相關(guān)，推測可能是由于LncRNA MIR155HG表達(dá)水平降低導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)受到破壞，T淋巴細(xì)胞亞群失衡，使機(jī)體易受毒害因子侵襲，導(dǎo)致機(jī)體患病。進(jìn)一步經(jīng)ROC曲線分析結(jié)果顯示，LncRNA MIR155HG對糜爛型OLP診斷的AUC為0.842，由此也進(jìn)一步提示通過檢測血清LncRNA MIR155HG水平可能對糜爛型OLP具有一定臨床診斷價(jià)值。

綜上所述，LncRNA MIR155HG在OLP患者血清中表達(dá)上調(diào)，可能通過影響T淋巴亞群平衡參與調(diào)控OLP疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，但其具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探索研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

黎煒：課題設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過程，論文撰寫；路麗：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；辛越紅：實(shí)施研究過程，資料搜集整理，論文修改；郭明：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析