口腔扁平苔蘚患者血清長鏈非編碼RNA MIR155HG的表達及臨床意義

黎煒，路麗，辛越紅，郭明

口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)主要發生于口腔黏膜，50～70歲中年女性常患此病，發病率為0.5%～4%[1]。OLP發病機制較為復雜，目前已有許多相關研究表明，OLP是一種慢性自身免疫性炎性紊亂性疾病，但是目前OLP具體病因不清，主要認為是由T細胞介導的基底細胞液化變性和溶解的免疫反應所導致，淋巴細胞浸潤導致基底細胞液化及上皮角化是該病的主要組織病理特征[2]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是一類功能性RNA，長度超過200個核苷酸，參與基因表達調控，與微小RNA(microRNA，miRNA)、信使核糖核酸(mRNA)或蛋白質結合發揮轉錄后水平調控作用[3-4]。近幾年研究表明，LncRNA參與許多疾病的發生發展過程[5-6]，韓虎魁等[7]發現LncRNA MIR155HG可能參與慢性心力衰竭疾病的發生發展過程。唐敏等[8]發現LncRNA MIR155HG與系統性紅斑狼瘡疾病發生有關，然而LncRNA MIR155HG在OLP疾病中暫未見相關報道。現觀察OLP患者血清LncRNA MIR155HG表達水平及T淋巴細胞亞群變化，并分析LncRNA MIR155HG與口腔扁平苔蘚的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月—2020年4月中國中醫科學院西苑醫院口腔科診治OLP患者43例(病例組)，均經病理學檢查明確診斷。其中男11例，女32例，年齡26～59(48.13±7.28)歲；病程1～36(20.17±4.92)個月；依據患者病損基部黏膜狀況不同，分為非糜爛型亞組23例(病損灶呈灰白色、白色線狀花紋狀，未見糜爛及充血癥狀)和糜爛型亞組20例(病損區出現周圍黏膜充血、潰瘍或糜爛)。選取同期健康體檢者43例作為健康對照組，男13例，女30例，年齡25～59(47.51±7.12)歲。2組性別、年齡比較，以及非糜爛型亞組與糜爛型亞組病程比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究通過醫院倫理委員會批準，受試者和家屬均知情同意并簽署知情同意書。

表1 2組臨床資料比較

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①無系統性疾病和免疫系統疾病史；②無吸煙史；③1年內未進行過口腔相關疾病手術治療及藥物治療。(2)排除標準：①合并肝腎功能不全、自身免疫性疾病或惡性腫瘤患者；②近2周內有嚴重感染或有長期感染性疾病的患者；③近90 d有服用抗生素、非甾體抗炎藥、免疫調節藥等可能影響免疫功能的藥物患者；④哺乳期及妊娠期婦女。

1.3 觀察指標與方法

1.3.1 血清LncRNA MIR155HG水平檢測：2組對象均于入院時抽取肘靜脈血樣本5 ml，離心獲取血清，冷凍保存待測。采用RNA提取試劑盒(北京天根生化有限公司生產)提取血清總RNA 10 ml，經反轉錄(北京百奧萊博科技有限公司生產)獲得cDNA，使用實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)儀(美國Bio-Rad公司，型號7500)進行qRT-PCR反應。AceQ qPCR SYBR?Green Mix熒光定量PCR試劑盒(南京諾唯贊生物科技有限公司生產)。反應體系共10 μl：miScript SYBR?Green Mix 5 μl，cDNA(50 ng/μl)1 μl，正反引物(10 μmol/L)各0.5 μl，ddH2O 3 μl。反應條件：95 ℃ 90 s， 95 ℃ 30 s,63 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s,共40個循環。每個標本設置3個重復孔，反應結束收集數據，以2-△△CT法計算血清LncRNA MIR155HG相對表達量。LncRNA MIR155HG及其內參GAPDH引物序列見表2。引物由北京擎科新業生物技術有限公司合成。

1.3.2 血清T細胞亞群檢測：取上述血清樣本10 μl與抗體20 μl混合、搖勻，染色15 min，添加溶血素FACS 450 μl，搖勻后室溫下避光約15 min，采用流式細胞儀(美國貝克曼庫爾特公司，型號DxFLEX)檢測OLP患者血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴細胞亞群百分比。

2 結 果

2.1 各組血清LncRNA MIR155HG表達比較 健康對照組血清LncRNA MIR155HG表達為(1.18±0.21)，病例組為(7.26±1.76)，2組比較差異有統計學意義(t/P=25.859/0.000);糜爛型亞組(8.24±1.98)高于非糜爛型亞組(6.27±1.53)，差異有統計學意義(t/P=3.676/0.001)。

2.2 各組T淋巴細胞亞群比較 與健康對照組比較，病例組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴細胞亞群比例降低，差異有統計學意義(P<0.01);糜爛型亞組CD4+、CD8+低于非糜爛型亞組(P<0.05)，見表3。

2.3 糜爛型OLP患者血清LncRNA MIR155HG水平與CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的相關性分析 Pearson法分析結果顯示，糜爛型OLP患者血清LncRNA MIR155HG水平與T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均呈負相關(r/P=-0.716/0.000、-0.667/0.001、-0.741/0.000、-0.566/0.000)。

2.4 血清LncRNA MIR155HG水平對糜爛型OLP的診斷價值 血清LncRNA MIR155HG水平診斷糜爛型OLP的曲線下面積為0.842(95%CI0.713～ 0.971，P<0.05)，截斷值為7.632，敏感度和特異度分別為85.7%和86.4%，約登指數為0.721，見圖1。

圖1 血清LncRNA MIR155HG水平診斷糜爛型OLP的ROC曲線

3 討 論

OLP是一種較常見的T細胞介導的慢性自身免疫口腔黏膜性疾病，具有發病慢、病程長、不易治療等特點，對人們的身心健康造成嚴重威脅。口腔黏膜呈對稱性白色、灰白色小丘疹組成的線狀、環狀病損等是OLP的主要臨床病理特征，且常伴有萎縮糜爛等病理特征。1978年，世界衛生組織將OLP列為癌前狀態，而后將其歸為一種口腔黏膜潛在惡性病變[9]。相關研究表明，OLP癌變率達1.09%～1.14%[10]。如果不采取積極有效的控制措施，其癌變率有可能繼續升高，因此，尋找有效的生物標志物對于早期發現OLP具有十分重要的意義。

表3 各組T淋巴細胞亞群比較

LncRNA是一類長鏈非編碼功能性RNA分子，主要位于細胞核內或胞漿內，只在真核細胞內被轉錄，很少具有蛋白質編碼功能[11]。LncRNA可通過多種途徑參與細胞生命活動[12-14]。近年來，關于MIR155HG在結直腸癌、喉癌及心力衰竭等多種腫瘤疾病中的研究已有較多相關報道[15-18]。但是有關LncRNA MIR155HG在OLP中表達情況未曾報道，本研究通過對43例OLP患者血清中LncRNA MIR155HG表達量進行檢測分析，旨在探討其在OLP中的變化及意義。研究結果顯示，與健康對照組比較，病例組血清LncRNA MIR155HG表達水平均顯著升高，且糜爛型亞組顯著高于非糜爛型亞組，表明LncRNA MIR155HG作為參與細胞生命活動的重要因子，在OLP的發生發展中起著重要作用，且其水平變化與疾病嚴重程度存在一定關系，血清LncRNA MIR155HG表達水平隨病情加重而呈現明顯升高趨勢，但其參與OLP的具體作用機制仍需進一步研究。

OLP發病因素復雜，較多研究表明T淋巴細胞浸潤導致基底細胞液化及上皮角化是OLP發生的可能原因。CD4+/CD8+反映機體中CD4+T淋巴細胞與CD8+T淋巴細胞的平衡狀態，為機體免疫調節的一項指標，正常值1.4～2.0，若其比值>2.0 或<1.4，表明細胞免疫功能紊亂[19]。本研究通過對43例OLP患者T淋巴細胞亞群進行檢測分析，結果顯示，與健康對照組比較，病例組CD4+、CD8+及CD4+/CD8+T細胞亞群比例均顯著降低，且糜爛型亞組顯著低于非糜爛型亞組，提示OLP患者T淋巴細胞亞群處于紊亂狀態，免疫水平較低。有研究報道，LncRNA能夠參與免疫細胞的分化和激活，在先天性和獲得性免疫系統中發揮重要作用[20-21]。本研究進一步經Pearson法分析結果顯示，糜爛型OLP患者血清LncRNA MIR155HG水平與T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值均呈負相關，推測可能是由于LncRNA MIR155HG表達水平降低導致機體免疫系統受到破壞，T淋巴細胞亞群失衡，使機體易受毒害因子侵襲，導致機體患病。進一步經ROC曲線分析結果顯示，LncRNA MIR155HG對糜爛型OLP診斷的AUC為0.842，由此也進一步提示通過檢測血清LncRNA MIR155HG水平可能對糜爛型OLP具有一定臨床診斷價值。

綜上所述，LncRNA MIR155HG在OLP患者血清中表達上調，可能通過影響T淋巴亞群平衡參與調控OLP疾病的發生、發展過程，但其具體作用機制尚需進一步探索研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

黎煒：課題設計，設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；路麗：提出研究思路，分析試驗數據，論文審核；辛越紅：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改；郭明：進行統計學分析