miR-145在垂體腺瘤患者中的表達及其臨床意義

范雁東，羅坤，丁崇學，李彥東，孫宏杰，周凱

垂體腺瘤(pituitary adenoma，PA)是臨床常見的腫瘤性疾病之一，占全部顱內腫瘤的10%，其術后復發率較高，對患者預后及生活質量影響明顯[1-2]。研究顯示，部分垂體腺瘤的發生與原癌基因的激活和抑癌基因的失活導致基因突變有關[3-4]。PA可分為無功能垂體腺瘤(NFPA)和功能性垂體腺瘤(FPA)，FPA根據其分泌激素的不同又可進一步分為促腎上腺皮質激素(ACTH)型、生長激素(GH)型、催乳素(PRL)型及混合型等[5]。手術是PA常見的治療方式，放療和藥物治療亦有一定幫助[6]。近年來，研究發現微小RNA(microRNA，miR)在腫瘤的發生發展中有重要意義[7-8]。 研究顯示miR-145在垂體腺瘤組織中的表達存在明顯差異[9-10]，但其具體表達情況、與患者臨床特點的關系及對預后判斷的價值研究目前少有報道。現分析miR-145在垂體腺瘤患者腫瘤組織中的表達及其與臨床特征和預后的關系，為進一步解釋垂體腺瘤的發病機制及臨床治療提供思路，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月—2019年1月新疆醫科大學第一附屬醫院神經外科行蝶竇入路行垂體腺瘤切除術患者120例(PA組)，包括NFPA亞組60例和FPA亞組60例，其中FPA包括ACTH型3例，GH型7例，PRL型32例及混合型18例[5]。PA組患者年齡36～76歲，中位年齡52歲。另選取同期經病理檢查為正常垂體的尸體標本20份作為對照組，患者死亡年齡41～75歲，中位年齡54歲。本研究經醫院倫理委員會批準，患者或家屬知情同意并簽署同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①手術切除垂體標本經病理及免疫組化確診為垂體腺瘤；②所有垂體腺瘤患者均為初治；③患者臨床病理特征資料完整。(2)排除標準：①入組前經過化療、生物治療及其他藥物治療者；②有遠處轉移者；③合并其他部位腫瘤者；④不同意參與研究者。

1.3 檢測指標與方法

1.3.1 垂體組織miR-145測定：手術及尸檢后取出垂體標本立即放入液氮保存，存入-80℃冰箱待檢。垂體腺瘤及其亞型采用免疫組化方法進行。目標miRNA的測量經過分離—逆轉錄—定量檢測等過程。其中垂體組織總RNA分離采用TRIzol試劑(美國Invitrogen Inc公司)進行，而后經逆轉錄試劑盒完成cDNA的合成，采用SYBR Green RT-PCR試劑盒(日本Takara公司)進行PCR。采用實時熒光定量PCR(qRT-PCT)對垂體組織miR-145表達水平進行檢測。該實驗過程中各加樣步驟均采用加樣器進行，所得最終實驗結果以酶標儀讀數為準。miR-145 的引物(廣州復能基因有限公司)均用Primer5.0設計完成，其中miR-145逆轉錄引物序列為：5’-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCCACTGGATACGAC

AGGGAT-3’。miR-145 PCR(美國BIO公司)反應的上、下游引物序列分別為5’-GTCCAGTTTTCCCAGGA-3’和 5’-TGCGTGTCGTGGAGTC-3’。

1.3.2 隨訪：對120例患者定期于門診復查或電話等方式進行隨訪，隨訪時間為出院日至2019年7月31日，患者死亡、脫失或復發即為終止。

2 結 果

2.1 各組垂體miR-145表達比較 對照組miR-145相對表達量為3.278±0.261(2.803～3.723)，高于PA組的2.228±2.160(0.134～7.492)，差異有統計學意義(t=2.165，P=0.032)；FPA及NFPA亞組相對表達量分別為4.169±1.318、0.287±0.117，差異有統計學意義(t=22.725，P=0.000)。

2.2 垂體瘤組織miR-145表達在不同臨床/病理特征中比較 垂體腺瘤患者miR-145的表達在不同年齡、是否具有侵襲性及腫瘤分型中比較，差異有統計學意義(P均<0.05)；而在不同性別及腫瘤直徑中比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 120例垂體腺瘤患者miR-145表達在不同臨床/病理特征中比較

2.3 復發情況 本研究中垂體組織miR-145相對表達量中位數為0.268，以此為分界值將FPA患者分為miR-145高表達亞組(≥0.268)和miR-145低表達亞組(<0.268)。PA患者120例隨訪6～36個月，失訪病例10例(低表達亞組6例，高表達亞組4例)，復發32例(29.09%)，其中miR-145高表達亞組復發10例(17.85%，10/56)，miR-145低表達亞組復發22例(40.74%，22/54)，2亞組比較差異有統計學意義(χ2=3.851，P=0.050)，見圖1。

圖1 miR-145表達與垂體腺瘤患者復發之間的關系

3 討 論

垂體腺瘤是原發于垂體的腫瘤性疾病，臨床數據顯示，垂體腺瘤占全部顱內腫瘤的10%以上。該腫瘤一般惡性程度較低，很少引起遠處轉移，但因其位置特殊，手術切除難度較大。盡管放化療技術和分子研究已不斷深入，目前手術治療仍是垂體腺瘤的主要治療方式。但臨床實踐發現，術后復發是該病較為棘手的問題。體積較大的垂體腺瘤可對周圍組織產生壓迫而造成臨床癥狀，功能性垂體腺瘤因分泌不同激素可造成相應的臨床表現[11]。因此，從垂體腺瘤發生機制著手方可徹底解決這一難題。

微小RNA是一類長度為21～25個核酸并可靶向結合mRNA的RNA家族，其可抑制靶向mRNA翻譯或導致其變性，進而影響下游基因的表達。越來越多的研究表明，眾多腫瘤組織中存在許多異常表達的miRNA。國外學者研究發現，在ACTH型垂體腺瘤組織中存在188種表達上調、160種表達下調的miRNA，并提出這些異常表達的miRNA對垂體腺瘤的發生發展有重要作用[12]。此外，少數研究也表明NFPA同樣存在部分異常表達的miRNA[13]。有學者通過對垂體腺瘤組織進行基因差異性分析得到部分差異性表達的miRNA[14]，其中miR-145屬于表達下降的miRNA。國內學者對miR-145的研究主要集中在消化系統腫瘤上，如肝癌、結腸癌等[15]，研究顯示miR-145在這些腫瘤中均低表達。

本研究采用qRT-PCR技術檢測miR-145在垂體腺瘤患者中的表達，分析其與臨床特征、分型及預后的相關性。結果提示，miR-145在PA患者中的表達較正常者顯著降低，差異有統計學意義(P<0.05)，提示miR-145低表達可能是PA發生的危險因素，但通過對垂體腺瘤亞型的分析卻發現，FPA中miR-145的表達卻明顯升高，這提示FPA與NFPA的發生機制可能存在差異，在治療中也應該分別對待。miR-145在垂體腺瘤患者中的表達與患者年齡、是否具有侵襲性及分型密切相關，即年齡≥45歲、具有侵襲性及NFPA患者miR-145表達顯著下降。這與Pertichetti等[16]的研究結果類似。隨訪分析顯示，miR-145高表達組垂體腺瘤患者術后復發率顯著低于低表達組(P<0.05)，提示垂體腺瘤患者miR-145的低表達是不良預后的預測因素。

綜上，miR-145參與了垂體腺瘤的發生、發展，可作為垂體腺瘤患者尤其是NFPA患者潛在的預后標志物及可能的治療靶點。本研究的不足之處在于，研究例數較少，隨訪的時間不夠長，對具體參與分子機制的研究有待進一步加強。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

范雁東、周凱：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；羅坤、丁崇學：提出研究思路，分析試驗數據，論文審核；李彥東、孫宏杰：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改