酸棗仁種子質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)研究

韓亞平 胡利峰 肖淑賢 趙 丹 李 軍 陳 芳 趙路兵

（山西振東道地藥材開發(fā)有限公司，長(zhǎng)治 047100）

酸棗仁為鼠李科植物酸棗（Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou）的干燥成熟種子，主產(chǎn)于河北、陜西、山西、遼寧、河南等地[1]。主要用于治療虛煩不眠、驚悸多夢(mèng)、體虛多汗、津傷口渴等癥，為中醫(yī)首選的鎮(zhèn)靜安神藥[2]。隨著酸棗仁的醫(yī)療保健功效被認(rèn)同，市場(chǎng)上以次充好的酸棗仁也越來越多[3]。優(yōu)良的種子種苗是中藥材質(zhì)量?jī)?yōu)質(zhì)穩(wěn)定的基礎(chǔ)，中藥材良種的選育、繁育、使用是中藥材規(guī)范化生產(chǎn)的“源頭工程”[4]。作為中藥材種植的源頭，中藥材種子質(zhì)量直接關(guān)系到中藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量。然而，目前對(duì)于酸棗仁的研究多限于有效成分的含量及藥理作用方面，對(duì)于酸棗仁種子質(zhì)量的研究幾乎沒有。本研究參考GB/T 3543.1～3543.7—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程》[5]，通過在全國(guó)酸棗仁主要產(chǎn)區(qū)收集多個(gè)批次的酸棗仁種子，在建立酸棗仁種子檢驗(yàn)方法的基礎(chǔ)上，開展酸棗仁種子的質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)研究，為制定酸棗仁種子檢驗(yàn)規(guī)程提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料本試驗(yàn)通過購(gòu)買和主產(chǎn)區(qū)采集方式，收集山西、山東、河北等酸棗主產(chǎn)區(qū)的酸棗仁種子19 份，每份種子樣品大于1000g，各樣品信息見表1。

表1 酸棗仁種子的產(chǎn)地來源

1.2 方法

1.2.1 扦樣參照GB/T 3543.2—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程扦樣》執(zhí)行[5]。

1.2.2 凈度分析采用“四分法”取試驗(yàn)樣品，酸棗仁種子凈度分析中送檢樣品的最小重量為100g（至少含有2500 粒種子）。送檢樣品的重量應(yīng)超過凈度分析量的10 倍，至少1000g。在凈度分析臺(tái)上將每份試驗(yàn)樣品按凈種子、其他植物種子和雜質(zhì)（無生命雜質(zhì)、破裂或受損傷的種子等）分別稱重，重復(fù)3次，以g 表示，計(jì)算凈種子的百分率。

1.2.3 重量測(cè)定分析凈度分析后，采用百粒法、五百粒法和千粒法測(cè)定種子千粒重[6]。將全部?jī)舴N子用四分法分成4 份，每份中隨機(jī)取種25 粒，共100 粒為一組，重復(fù)5 次，用百粒法計(jì)算種子千粒重；將全部?jī)舴N子用四分法分成4 份，每份中隨機(jī)取種125 粒，共500 粒為一組，重復(fù)3 次，用五百粒法計(jì)算種子千粒重；將全部?jī)舴N子用四分法分成4 份，每份中隨機(jī)取種250 粒，共1000 粒為一組，重復(fù)3 次，用千粒法計(jì)算種子千粒重。

1.2.4 水分測(cè)定分析采用低恒溫（105℃）烘干法測(cè)定種子含水量[7]。試驗(yàn)步驟如下：（1）打開恒溫箱使之預(yù)熱至105℃，烘干潔凈鋁盒并迅速稱質(zhì)量記錄；（2）迅速稱量需檢測(cè)的樣品，每個(gè)批次3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)稱取5g 樣品，稱量后放于標(biāo)記好的鋁盒內(nèi)，一并放入干燥器；（3）烘箱溫度達(dá)到105℃時(shí)，把鋁盒蓋子放在鋁盒基部，打開烘箱，快速放入箱內(nèi)上層，保證鋁盒水平分布并迅速關(guān)閉烘箱門，待烘箱溫度回升至105℃時(shí)，開始計(jì)時(shí)；（4）4h 后取出鋁盒迅速放入干燥器中，待冷卻至室溫后進(jìn)行稱重。3 個(gè)重復(fù)的均值即為該批次的含水量。

種子含水量=（M2-M3）/（M2-M1）×100%，公式中M1為鋁盒和蓋的質(zhì)量；M2為鋁盒和樣品烘干前的質(zhì)量；M3為鋁盒及樣品烘干后的質(zhì)量。

1.2.5 生活力測(cè)定分析采用TTC 檢測(cè)法測(cè)定種子生活力[8]。TTC 染色前必須將酸棗仁種子進(jìn)行預(yù)先濕潤(rùn)，從充分混勻的凈種子中隨機(jī)取3 份重復(fù)，每份50 粒種子，種子在25℃條件下，浸泡處理24h；將酸棗仁種子用刀縱切兩半，一半放入0.5%的TTC溶液中，溶液浸泡以淹沒種子為宜，染色溫度40℃，染色時(shí)間4h。染色結(jié)束后，用清水沖洗種子數(shù)次，然后觀察染色情況，解剖鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)胚乳切面和胚染色情況，判斷酸棗仁種子是否有活力。

1.2.6 發(fā)芽率測(cè)定分析從每個(gè)批次的凈種子中隨機(jī)選取50 粒放入培養(yǎng)皿中，每批種子做3 次重復(fù)，加水適量，置于25℃培養(yǎng)箱中發(fā)芽，每天根據(jù)干濕情況加水，并記錄種子發(fā)芽狀況，3 次重復(fù)求均值，即為發(fā)芽率。

2 結(jié)果與分析

2.1 凈度測(cè)定結(jié)果由表2 可知，全國(guó)不同地區(qū)的19 份酸棗仁種子均存在其他雜質(zhì)，凈度在73.88%～99.49%之間，各試樣增失差距均沒有偏離原始質(zhì)量的5%，為有效數(shù)據(jù)。19 個(gè)不同地區(qū)酸棗仁種子的凈度有明顯差異。其中，樣品10 種子因破損度最高，達(dá)25.68%，導(dǎo)致種子凈度最低，其值為73.88%；樣品16 破損程度最小為0.41%，種子凈度最高，其值為99.49%。樣品10 的酸棗仁種子破損率高的原因可能是這批種子成熟度不夠，種子硬實(shí)度不達(dá)標(biāo)，導(dǎo)致加工時(shí)破損嚴(yán)重，從而嚴(yán)重影響種子凈度和種仁質(zhì)量。所以，建議酸棗在采收時(shí)盡量不要搶青，特別是作為種源更要保證質(zhì)量。

表2 不同地區(qū)酸棗仁種子凈度分析

2.2 重量測(cè)定結(jié)果由表3 可知，酸棗仁種子的千粒重均在34～52g 之間，3 種測(cè)定方法中百粒法有3 份樣品的變異系數(shù)（變異系數(shù)=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均值）×100%）大于4%，故不考慮百粒法作為酸棗仁種子重量的檢測(cè)方法；采用五百粒法和千粒法稱量時(shí)，各樣品的變異系數(shù)都在4%以下。因此，酸棗仁種子重量測(cè)定采用五百粒法和千粒法都是可以的，本研究采用五百粒法作為酸棗仁種子重量的檢測(cè)方法。其中，樣品7 酸棗仁種子大而飽滿，五百粒重高達(dá)25.72g，樣品17 酸棗仁種子五百粒重最小，為17.17g。

表3 不同地區(qū)酸棗仁種子重量測(cè)定結(jié)果

2.3 發(fā)芽率、生活力和水分測(cè)定結(jié)果由表4 可以看出，樣品16 的發(fā)芽率最高，為97.00%；樣品4的發(fā)芽率最低，為38.33%。酸棗仁種子含水量為7.81%～14.59%不等，其中樣品14 的種子含水量最高，為14.59%；而樣品17的酸棗仁種子含水量最低，為7.81%。種子生活力結(jié)果顯示：樣品14 種子生活力最高，為96.67%；樣品18 的種子生活力最低，為48.00%。孫麗娜等[9]研究發(fā)現(xiàn)，種子成熟度差、未經(jīng)嚴(yán)格篩選、貯存時(shí)間過長(zhǎng)，均能導(dǎo)致發(fā)芽率低。樣品18 種子的生活力最低，可能是因?yàn)榉N子的成熟度不夠所致。

2.4 系統(tǒng)聚類法分析由圖1 可以看出，從橫坐標(biāo)10 處進(jìn)行劃分，19 個(gè)不同地區(qū)的種子規(guī)律地分成了3 個(gè)類群，其中樣品6、19、14、16、1、15、17、13 歸為一類；樣品4 和18 歸為一類；樣品8、11、5、12、2、9、3、7、10 歸為一類。以發(fā)芽率為分級(jí)第一參考指標(biāo)，綜合考慮凈度、五百粒重、含水量、生活力指標(biāo)，使用SPSS 軟件作K 聚類分析，將19 個(gè)批次的酸棗仁種子分為3 級(jí)，最終分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表5。

表4 不同地區(qū)酸棗仁種子發(fā)芽率、種子生活力和含水量分析 （%）

圖1 全國(guó)19 個(gè)不同地區(qū)酸棗仁種子系統(tǒng)聚類分析樹狀關(guān)系圖

3 討論

3.1 分類依據(jù)在種子分級(jí)的5 項(xiàng)指標(biāo)中，發(fā)芽率和五百粒重2 項(xiàng)指標(biāo)作為主要分級(jí)依據(jù)，其中發(fā)芽率為重中之重，因?yàn)榘l(fā)芽率的高低直接決定了種子的實(shí)際利用價(jià)值，依據(jù)發(fā)芽率可以計(jì)算出田間出苗率，決定實(shí)際種子播種量，參考價(jià)值很高。五百粒重可以反映種子飽滿度和種子成熟度等。另外，河南洛陽(yáng)（樣品8）和遼寧二十家子（樣品17）兩個(gè)批次的酸棗仁種子五百粒重小，可能與種子含水率低和采收期有關(guān)，武延生[10]研究表明酸棗成熟后期酸棗仁和核殼質(zhì)量呈減小趨勢(shì)，且后期種殼變硬，保護(hù)種仁不受傷害。

種子生活力是種子發(fā)芽和出苗率、幼苗生長(zhǎng)的潛勢(shì)、植株抗逆能力和生產(chǎn)潛力的總和，是種子品質(zhì)的重要指標(biāo)[11]。但種子生活力是以凈種子測(cè)定的，離不開凈度分析。含水量、凈度、種子生活力3 個(gè)指標(biāo)作為次要分類依據(jù)，種子凈度反映清潔度、純度，含水量反映種子對(duì)儲(chǔ)藏條件的要求，凈度和含水量也可以通過再加工來提高質(zhì)量。

3.2 系統(tǒng)聚類分析法此方法是利用數(shù)學(xué)原理的分級(jí)方法，是屬于數(shù)據(jù)類的平均劃分，更適合于判斷物體的內(nèi)在品質(zhì)，因此使用此法制定的酸棗仁種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是科學(xué)的、可行的。

3.3 完善種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系不同來源、不同批次的酸棗仁種子質(zhì)量差異懸殊，種子質(zhì)量最重要的指標(biāo)發(fā)芽率相差甚多，最低值為38.33%，最高可達(dá)97.00%，因此，必須加強(qiáng)藥材種子繁育和加快制定酸棗仁種子質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系。

3.4 適時(shí)采收所采購(gòu)的種子破損程度較為嚴(yán)重，小的占比0.41%，嚴(yán)重的占比25.68%。一可能是加工過程中因操作不當(dāng)引起的；二則更可能是種子成熟度不夠，酸棗“被搶青”所致。所以，在此再次呼吁，請(qǐng)廣大藥材經(jīng)營(yíng)者一定要尊重自然，每種藥材都有最佳的采收時(shí)期，請(qǐng)盡量在適宜的采收期內(nèi)進(jìn)行采摘，莫要為了一己私利，降低藥材藥效和種子質(zhì)量。

表5 酸棗仁種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)