組織miRNA指標(biāo)在宮頸癌的表達(dá)情況及其與病理分型、組織分化的相關(guān)性研究*

劉 淼，烏蘭娜，張曉曉，李瑞珍

(北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦科，廣東深圳 518036)

宮頸癌作為女性發(fā)病率極高的一類惡性腫瘤，其導(dǎo)致的死亡患者數(shù)量較高，是臨床中研究較多的一類生殖系統(tǒng)腫瘤。宮頸癌早期正確有效的診治是預(yù)后改善的前提，因此找到對于宮頸癌診斷價(jià)值較高的指標(biāo)，尤其是對于病理分型及組織分化等有較高反映意義的指標(biāo)是臨床研究的熱點(diǎn)[1-2]。miRNA指標(biāo)作為在惡性腫瘤中研究較多的內(nèi)容，其在宮頸癌患者病灶組織中的表達(dá)多見，同時(shí)也是研究差異較大的方面，故認(rèn)為更為全面的探究需求較高。miR-34a及miR-19a作為在宮頸癌患者中研究較多的miRNA指標(biāo)，其與病理分型及組織分化的關(guān)系有待深入探究[3-5]。因此，本研究就組織miRNA指標(biāo)在宮頸癌患者中的表達(dá)情況及其與病理分型、組織分化的相關(guān)性進(jìn)行探究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月至2019年10月本院60例宮頸癌患者作為觀察組，選取同時(shí)期60例健康同齡女性作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡20歲及以上；(2)對研究知情同意；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他生殖系統(tǒng)疾病者；(2)合并代謝性疾病者；(3)合并多系統(tǒng)器官功能不全者；(4)合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病或損傷者。觀察組年齡26～72歲，平均(43.9±6.0)歲，其中有生育史51例，無生育史9例；病理分型：鱗癌47例，腺癌13例；組織分化程度：高分化25例，中分化20例，低分化15例；國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)(FIGO)分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期18例，Ⅲ期18例，Ⅳ期12例。對照組年齡27～73歲，平均(43.6±6.1)歲，其中有生育史53例，無生育史7例。兩組年齡與生育史比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審批通過。

1.2 方法

取對照組健康宮頸組織及觀察組宮頸癌標(biāo)本，對采集的標(biāo)本進(jìn)行檢測和RNA提取，使用TRIzol Reagent(Invitrogen)試劑，按照試劑說明書操作，采用逆轉(zhuǎn)錄(RT)-PCR法進(jìn)行檢測，參照TakaRa SYBR PrimeScript miRNA RT-PCR Kit說明書，將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄，由羅氏480Ⅱ熒光定量PCR儀完成。U6作為內(nèi)參，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔，根據(jù)同一個(gè)標(biāo)本的CT值(目標(biāo)基因和內(nèi)參基因)計(jì)算ΔCT值，miRNA相對表達(dá)水平采用2-ΔΔCT進(jìn)行計(jì)算，統(tǒng)計(jì)及比較指標(biāo)為組織miR-34a及miR-19a。上述檢測均由經(jīng)驗(yàn)豐富者進(jìn)行操作檢測，然后統(tǒng)計(jì)及比較兩組miRNA指標(biāo)(miR-34a及miR-19a)表達(dá)水平，同時(shí)比較觀察組不同病理分型、組織分化程度及FIGO分期的檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 兩組宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

觀察組miR-34a表達(dá)明顯低于對照組，miR-19a表達(dá)明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 兩組宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

2.2 觀察組不同病理分型的宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

與鱗癌比較，腺癌miR-34a表達(dá)水平更低，miR-19a表達(dá)水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組不同病理分型的宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

2.3 觀察組不同組織分化程度的宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

與高分化比較，低分化miR-34a表達(dá)水平更低，miR-19a表達(dá)水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 觀察組不同組織分化程度的宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

2.4 觀察組不同F(xiàn)IGO分期的宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

與FIGO低分期比較，F(xiàn)IGO高分期miR-34a表達(dá)水平更低，miR-19a表達(dá)水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 觀察組不同F(xiàn)IGO分期的宮頸組織miRNA指標(biāo)表達(dá)水平比較

2.5 組織miRNA指標(biāo)與宮頸癌病理分型、組織分化程度及FIGO分期的相關(guān)性分析

Pseron相關(guān)性分析顯示，組織miR-34a及miR-19a均與病理分型明顯相關(guān)(P<0.05)；Spearman秩相關(guān)分析顯示，組織miR-34a與組織分化程度呈正相關(guān)，與FIGO分期呈負(fù)相關(guān)，組織miR-19a與組織分化程度呈負(fù)相關(guān)，與FIGO分期呈正相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5 組織miRNA指標(biāo)與宮頸癌病理分型、組織分化程度及FIGO分期的相關(guān)性分析

3 討 論

宮頸癌作為婦科最為常見的惡性腫瘤，是臨床研究較多的一類疾病，早期正確診治是改善預(yù)后及降低病死率的重要前提。臨床中與惡性腫瘤相關(guān)的診治研究多見，其中miR相關(guān)指標(biāo)是研究較多且較熱的一類指標(biāo)[6-8]，較多相關(guān)指標(biāo)在宮頸癌中的表達(dá)變化研究顯示，其對于疾病的分期等多方面具有較高的反映價(jià)值。經(jīng)證實(shí)，miR-34a及miR-19a在宮頸癌患者中的表達(dá)波動(dòng)相對較大，其中較多研究認(rèn)為miR-34a在下調(diào)細(xì)胞周期基因中具有較強(qiáng)的作用[9]，對于使腫瘤細(xì)胞停留于G0/G1期，抑制相關(guān)蛋白的表達(dá)，其在宮頸癌患者中的表達(dá)研究可見，多呈現(xiàn)降低的趨勢[10-12]，但是其對于不同宮頸癌病理分型、組織分化程度及FIGO分期者中的具體表達(dá)變化研究不足，有待深入探究。miR-19a則對較多抑癌基因具有抑制作用，其可對胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)表達(dá)起到較大控制作用，因此其在腫瘤患者中多呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞抑制作用的減弱，腫瘤細(xì)胞增殖情況增加，同時(shí)其對于Bcl-2具有較強(qiáng)的影響作用，因此在腫瘤患者中的監(jiān)測意義較高[13-16]。另外，臨床中關(guān)于宮頸癌患者miR-34a及miR-19a的細(xì)致變化研究存在一定差異[17-18]，故對其表達(dá)的細(xì)致作用及對病理分型、組織分化程度及FIGO分期的反映價(jià)值研究均極為必要。

本研究就組織miRNA指標(biāo)在宮頸癌患者中的表達(dá)及與病理分型及組織分化的相關(guān)性進(jìn)行探究，結(jié)果顯示，宮頸癌患者的組織miR-34a表達(dá)明顯低于健康者，組織miR-19a表達(dá)則明顯高于健康者，說明其在宮頸癌患者中具有一定的價(jià)值。同時(shí)，研究顯示，不同病理分型、組織分化程度及FIGO分期者的組織miR-34a及miR-19a表達(dá)差異明顯，Pseron相關(guān)性分析顯示，組織miR-34a及miR-19a均與病理分型明顯相關(guān)(P<0.05)；Spearman秩相關(guān)分析顯示，組織miR-34a與組織分化程度呈正相關(guān)，與FIGO分期呈負(fù)相關(guān)，組織miR-19a與組織分化程度呈負(fù)相關(guān)，與FIGO分期呈正相關(guān)(P<0.05)，因此肯定了組織miR-34a及miR-19a與宮頸癌患者病理分型、組織分化程度及FIGO分期的相關(guān)性，進(jìn)一步提升了上述miR指標(biāo)在宮頸癌中的檢測意義。分析原因，miR-19a對于IGF2R抑癌活性發(fā)揮了減弱作用，因此腫瘤細(xì)胞活性增強(qiáng)，疾病進(jìn)展加快，疾病狀態(tài)相對較差，控制效果也即較差。miR-34a表達(dá)降低則導(dǎo)致腫瘤抑制作用減弱，腫瘤細(xì)胞集落及侵襲能力增強(qiáng)，因此認(rèn)為其與宮頸癌的上述方面密切相關(guān)[19-21]。

綜上所述，組織miRNA指標(biāo)在宮頸癌患者中呈現(xiàn)異常表達(dá)的狀態(tài)，且與病理分型及組織分化有密切的相關(guān)性，其在宮頸癌患者中的應(yīng)用價(jià)值較高。