血清miR-377在原發性肝癌患者并發脈管癌栓中的價值研究*

張彬彬,郁 皓△,劉 慧,曹 斐,吳曉霞,殷 媛

(1.江蘇省無錫市第五人民醫院腫瘤科 214000;2.江蘇省無錫市第四人民醫院腫瘤研究所 214062)

原發性肝癌(primary liver cancer，PLC)是世界五大惡性腫瘤之一，為臨床上嚴重威脅人類生活質量和生命安全的疾病[1-2]。隨著當前社會環境的變化，PLC的發病率逐年增加[3-4]。PLC的侵襲和轉移為其發生、發展過程中較為嚴重的生物學行為，嚴重影響患者生命的同時，還會限制其治療和預后[5-6]。然而PLC患者的脈管內出現癌栓在PLC的侵襲和轉移中起到十分關鍵的作用，即PLC發生侵襲和轉移時患者的脈管內癌栓的發生率明顯升高[7]。微小RNA(microRNAs，miR)為體內長度較小的RNA，與機體的多種生物學功能相關[8-10]。其中的miR-377為近年來miR的研究熱點，與腫瘤的關系密切[11-12]。然而miR-377與并發脈管內癌栓的PLC間的關系并不清楚。因此，本研究觀察PLC患者miR-377的表達水平、腫瘤直徑、腫瘤標志物[甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)、大分子糖蛋白抗原(carbohydrate antigen,CA)242和CA724]、轉移侵襲標志物[基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2、MMP-9、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和胰島素樣生長因子-2(insulin like growth factor-2，IGF-2)]的水平，并探討miR-377和并發脈管內癌栓的PLC間的相關性，以期為并發脈管內癌栓的PLC的侵襲和轉移提供更可靠的診斷和治療手段，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年11月至2019年11月無錫市第五人民醫院腫瘤科收治的100例PLC患者為研究對象，其中并發脈管內癌栓的50例PLC患者作為觀察組，未并發脈管內癌栓的50例PLC患者作為對照組。納入標準：(1)符合《原發性肝癌診療規范 2017 版》[13]中PLC的診斷標準；(2)患者的意識清楚，生命體征較為穩定，自愿參與本研究者。排除標準：(1)合并出血傾向、免疫系統疾病、其他惡性腫瘤、心肺腎功能疾病、血液系統疾病和嚴重的精神系統疾病的患者；(2)依從性差不能配合完成研究的患者。所有患者均知情同意，且本研究經無錫市第五人民醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

記錄患者性別、年齡、病理分期和卡氏(KPS)評分。采用病例對照研究方法，患者入院時及治療結束后，于清晨空腹抽取2 mL靜脈血，室溫靜置20 min至凝固，2 800 r/min離心20 min分離血清，儀器使用ELx800全自動酶標儀，利用南京森貝伽生物科技有限公司的試劑盒檢測miR-377、腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)和PLC轉移侵襲標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)水平，并使用B超檢測腫瘤直徑。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 一般資料比較

觀察組年齡45～73歲，KPS評分62.13～72.21分；對照組年齡44～76歲，KPS評分60.35～73.18分；兩組性別、年齡和KPS評分比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料比較(n=50)

2.2 兩組miR-377水平和腫瘤直徑比較

與對照組比較，觀察組miR-377水平更高，腫瘤直徑更大，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組miR-377水平和腫瘤直徑比較

2.3 兩組腫瘤標志物水平比較

觀察組腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組腫瘤標志物水平比較

2.4 兩組轉移侵襲標志物水平比較

觀察組轉移侵襲的標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組轉移侵襲標志物水平比較

2.5 miR-377和腫瘤直徑、腫瘤標志物的相關性分析

Pearson線性相關性分析顯示，miR-377與腫瘤直徑、腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)和轉移侵襲的標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)呈正相關(P<0.05)，見表5。

表5 miR-377和腫瘤直徑、腫瘤標志物的相關性分析

3 討 論

流行病學調查結果顯示PLC的發病率逐年增高，嚴重危害人們的健康和生命，而PLC的侵襲和轉移是影響腫瘤惡性程度的關鍵因素，嚴重影響患者的生命安全，限制患者的治療和預后。因此，需要臨床醫生對PLC的轉移和侵襲做到早發現、早診斷和早干預。然而，最有效的診療體系應將臨床診斷和治療直接有效關聯，即通過更加準確的診斷方法而直接提供相應的治療藥物，更加直接準確地對發生侵襲和轉移的PLC患者進行治療，方可獲得滿意的療效。因此，需要建立更加完善的PLC發生轉移的診斷指標，以期更加有效地提供治療策略。因此，本研究首次針對PLC患者，觀察miR-377表達水平、腫瘤直徑、腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)、轉移侵襲標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的水平，并探討miR-377和并發脈管內癌栓的PLC間的相關性，發現PLC患者的血清miR-377水平升高，且并發管內癌栓的miR-377水平升高更加明顯。

miR是長度為18～24個核苷酸的一組非編碼蛋白質的小RNA，與機體細胞的多種生物學過程相關，包括生長、發育、分化、衰老和炎癥。此外，還與多種疾病相關，包括腫瘤、阿爾茲海默癥和自身免疫病等。miR-377為近年來miR的研究熱點，且過往研究證明其與腫瘤的關系密切，在腫瘤的發展、演化過程中發揮著至關重要的作用，如可以明顯地抑制胰腺癌和非小細胞肺癌的腫瘤細胞的生長發展變化，還與胰腺癌的腫瘤直徑、有無轉移密切相關[14]。此外，還有研究表明miR-377可抑制肝纖維化的進程[15]。因此，可推斷miR-377在PLC患者體內水平升高，且并發管內癌栓時的水平升高更加顯著。因miRNAs具有穩定性、組織特異性、易獲得性和高度保守性的特點和優勢，可以用來作為一種有效的腫瘤標志物，預測PLC的發生，還可針對miR-377作為治療的靶點進行精準治療。

本研究還發現PLC轉移侵襲的標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)水平亦升高，因腫瘤發生侵襲和轉移需降解和破壞腫瘤表面的細胞外基質，而MMP為水解細胞外基質十分關鍵的蛋白水解酶，MMP-2和MMP-9為其中較為典型的2種因子，可參與細胞外基質的破壞，進而參與腫瘤的浸潤和轉移[16-17]。VEGF則是腫瘤細胞形成的重要促血管形成因子，可參與腫瘤的發生、侵襲和轉移[18-19]。而IGF-2亦可提高VEGF的水平，進而在腫瘤的增殖分化、侵襲和轉移中發揮關鍵的促進作用[20]。本研究結果同樣符合過往研究結果，并發管內癌栓的PLC患者轉移侵襲的標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的水平明顯升高。

本研究針對PLC患者探討外周血miR-377與腫瘤直徑、腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)、轉移侵襲標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的相關性，發現miR-377與腫瘤直徑、腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)、轉移侵襲標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)呈明顯正相關(P<0.05)。即當外周血miR-377水平增高、腫瘤直徑更大時，腫瘤標志物(AFP、CA242和CA724)和轉移侵襲標志物(MMP-2、MMP-9、VEGF和IGF-2)的水平更高。該結論的得出可為并發管內癌栓的PLC診斷提供便捷的方法，通過miR-377的檢測即可了解PLC腫瘤直徑、腫瘤標志物和轉移侵襲標志物的表達情況。

綜上所述，miR-377可逐漸被挖掘為臨床上并發管內癌栓的PLC的診斷依據，亦為進一步的臨床治療提供有效、精準的治療方法。