提升蛋品質(zhì)的乳桿菌篩選及其作用機(jī)制研究

張 青 陳 聰 林 仙

（1.南平市延平區(qū)赤門畜牧獸醫(yī)站 福建南平 353000；2.南平市延平區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 福建南平 353000）

受非洲豬瘟疫情影響， 近年來(lái)養(yǎng)禽業(yè)在我國(guó)畜牧業(yè)的地位逐漸凸顯。 在養(yǎng)殖過(guò)程中， 通過(guò)添加抗生素或抗菌藥物來(lái)保障畜禽生產(chǎn)性能是長(zhǎng)期以來(lái)的慣用方法，由此也帶來(lái)畜禽產(chǎn)品藥物殘留、食品安全等一系列問(wèn)題。隨著“無(wú)抗養(yǎng)殖”概念的提出，探索抗生素替代品及無(wú)抗養(yǎng)殖技術(shù)成為當(dāng)前業(yè)內(nèi)關(guān)注的熱點(diǎn)。益生菌由于其成本低廉、無(wú)毒無(wú)害的特點(diǎn)使得其成為重要的抗生素替代品， 在養(yǎng)禽業(yè)中的應(yīng)用逐漸受到重視。最近，對(duì)肉雞的研究顯示，給Cobb 500 商品肉雞飼喂糞腸球菌可提高其日增重[1]。 對(duì)蛋雞的研究顯示， 在日糧中添加嗜酸乳桿菌可提升20～49 周齡海蘭褐蛋雞的蛋殼厚度、蛋殼百分比和哈夫單位[2]。 日糧添加丁酸梭菌及其復(fù)合菌劑（丁酸梭菌+凝結(jié)芽孢桿菌） 能有效緩解夏季高溫對(duì)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)造成的負(fù)面影響， 并延長(zhǎng)雞蛋存放時(shí)間，改善血清生化指標(biāo)[3]。 另外，日糧中添加乳酸菌和枯草芽孢桿菌還可降低蛋雞血清膽固醇和甘油三酯含量，提高新城疫抗體滴度[4]。 但關(guān)于可有效提升蛋品質(zhì)的更多乳桿菌類型及其作用機(jī)理還有待深入研究。

腸黏膜位于動(dòng)物胃腸道內(nèi)表面的單層柱狀上皮，是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要場(chǎng)所，同時(shí)也是抵御病原生物入侵的第一道屏障。 由于腸黏膜柱狀上皮細(xì)胞是養(yǎng)分吸收的主要功能細(xì)胞， 其吸收效率在很大程度上將影響動(dòng)物的生產(chǎn)性能。相關(guān)研究顯示，益生菌可調(diào)節(jié)腸黏膜生理功能。 Neija 等研究證實(shí)，枯草芽孢桿菌可增強(qiáng)Shaver 白雞腸黏膜的吸收功能[5]；Salehizadeh 等研究發(fā)現(xiàn)，飼喂唾液乳桿菌、嗜酸乳桿菌、 干酪乳桿菌可增加羅斯肉雞回腸絨毛的相對(duì)高度并提高其生長(zhǎng)性能[6]。此外，F(xiàn)orte 等發(fā)現(xiàn)飼喂嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌可顯著降低海蘭褐蛋雞十二指腸黏膜的炎癥反應(yīng)[7]。 綜上所述，腸黏膜形態(tài)與功能是研究腸道微生物調(diào)節(jié)蛋雞產(chǎn)蛋性能及蛋品質(zhì)的重要對(duì)象。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 所使用的乳桿菌為前期從蛋雞腸內(nèi)容物中篩選出的三株優(yōu)勢(shì)乳桿菌（Lactobacillus A株、Lactobacillus B 株、Lactobacillus C 株）。三株乳桿菌來(lái)源于福建省南平市延平區(qū)圣鑫蛋雞養(yǎng)殖專業(yè)合作社的500 羽處于產(chǎn)蛋高峰中后期的海蘭褐蛋雞（40～45 周齡）， 由浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院李劍副教授課題組分離、鑒定、保存并饋贈(zèng)。

1.2 試驗(yàn)分組 隨機(jī)選取500 羽產(chǎn)蛋高峰后期的海蘭褐蛋雞，分為5 組，每組100 羽，按如下分組進(jìn)行為期1 個(gè)月的乳酸菌拌料飼喂， 劑量為1010CFU/(羽·d）：（1）對(duì)照組，飼喂常規(guī)飼料；（2）在飼料中添加乳桿菌A；（3） 在飼料中添加乳桿菌B；（4）在飼料中添加乳桿菌C；（5）在飼料中添加乳桿菌A+B+C。

1.3 產(chǎn)蛋性能及蛋品質(zhì)分析 在飼喂試驗(yàn)期間，每日記錄各組的產(chǎn)蛋量和單枚蛋重， 并統(tǒng)計(jì)分析日產(chǎn)蛋率的變化趨勢(shì)。 同時(shí)，根據(jù)公式：日均蛋重（g）×日均產(chǎn)蛋率（%）× 30（d）× 30（羽）分析總蛋重的變化趨勢(shì)。 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從各組隨機(jī)挑選30 枚雞蛋用高精度數(shù)碼測(cè)蛋儀進(jìn)行蛋品質(zhì)分析， 檢測(cè)指標(biāo)包括蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度、哈氏單位等。 另外，采用羅氏比色盤對(duì)蛋黃顏色進(jìn)行1～15 之間的打分。

1.4 腸黏膜形態(tài)學(xué)觀察 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從各組隨機(jī)選取3 羽蛋雞，經(jīng)頸總動(dòng)脈放血處死，之后立即分離十二指腸并固定于4%甲醛溶液中， 按常規(guī)方法制作石蠟切片并進(jìn)行HE 染色。 測(cè)量十二指腸的腸絨毛高度和隱窩深度， 并對(duì)絨毛高度/隱窩深度（V/C比值）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1 產(chǎn)蛋率 在飼喂乳桿菌期間，每天收集各組產(chǎn)蛋數(shù)據(jù)，并對(duì)綜合產(chǎn)蛋率進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，A 組、B 組、C 組以及A+B+C 組的綜合產(chǎn)蛋率分別比對(duì)照組提升了2.48%、4.51%、0.53%和7.37%（見(jiàn)圖1A）。對(duì)飼喂期間總蛋重的分析結(jié)果顯示，A 組、B 組、C組和A+B+C 組的總蛋重分別比對(duì)照組升高了3.12%、6.36%、1.97%和6.63%（見(jiàn)圖1B）。

2.2 蛋品質(zhì)分析 試驗(yàn)第30 d， 從各組隨機(jī)選取30 枚雞蛋， 對(duì)其蛋白高度與蛋黃顏色進(jìn)行分析。 B組、A+B+C 組的蛋白高度分別比對(duì)照組高11.83%和11.15%（見(jiàn)圖2A）。 各組的蛋黃顏色均優(yōu)于對(duì)照組，A 組、B 組、C 組和A+B+C 組 分別比對(duì)照組高2.92%、9.16%、2.92%和10.07%（見(jiàn)圖2B）。

圖1 飼喂乳桿菌對(duì)產(chǎn)蛋性能的影響

圖2 飼喂乳桿菌對(duì)蛋品質(zhì)的影響

2.3 腸黏膜形態(tài)學(xué)觀察 為進(jìn)一步分析腸黏膜結(jié)構(gòu)在乳桿菌調(diào)節(jié)產(chǎn)蛋性能中的作用， 對(duì)十二指腸進(jìn)行組織切片制作及HE 染色， 同時(shí)對(duì)十二指腸的絨毛高/隱窩深度比值（V/C 比值）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果顯示， 各乳桿菌飼喂組的V/C 比值均高于對(duì)照組，A組、B 組、C 組、A+B+C 組分別比對(duì)照組高10.78%、17.58%、10.78%、23.58%（見(jiàn)圖3 A-圖3 B）。

3 討 論

研究表明，飼喂芽孢桿菌可促進(jìn)60 周齡海蘭褐蛋雞的產(chǎn)蛋率、蛋重以及蛋殼強(qiáng)度[8]；飼喂含有枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌等多種益生菌的微生態(tài)制劑可提升50 周齡羅曼褐蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、蛋白高度以及蛋黃顏色[9]。 但是，嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌對(duì)16 周齡海蘭褐蛋雞的蛋品質(zhì)無(wú)顯著影響[7]。 本研究結(jié)果顯示，飼喂乳桿菌B 以及乳桿菌A+B+C 可有效提升海蘭蛋雞的綜合產(chǎn)蛋率與總蛋重。 同時(shí)，對(duì)蛋品質(zhì)的分析結(jié)果表明，乳桿菌B 以及乳桿菌A+B+C 對(duì)蛋白高度和蛋黃顏色有較好的提升效果。上述結(jié)論差異可能與蛋雞日齡、品種及所用益生菌種類及其濃度不同有關(guān)。綜上所述，本試驗(yàn)所用的乳桿菌B 以及乳桿菌A+B+C 混合飼喂對(duì)產(chǎn)蛋性能與蛋品質(zhì)有提升作用。

試驗(yàn)結(jié)果顯示， 各乳桿菌組的十二指腸段V/C比值均高于對(duì)照組， 表明所用的乳桿菌可提高腸黏膜的相對(duì)吸收面積。 相似地，Arbor Acre 肉雛雞飼喂枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌后， 其十二脂腸和回腸段的V/C 比值顯著升高[10]。 Ross 308 肉雞飼喂商品化益生菌后，其回腸中的V/C 比值也顯著升高[11]。上述結(jié)果表明，飼喂益生菌可有效提高腸絨毛的V/C 比值，提示可促進(jìn)腸黏膜的吸收面積，進(jìn)而提高養(yǎng)分吸收效率，最終提升產(chǎn)蛋性能與蛋品質(zhì)。

綜上所述，本試驗(yàn)所使用的乳桿菌B 以及乳桿菌A+B+C 混合飼喂可有效提高海蘭蛋雞的產(chǎn)蛋率與總蛋重。 同時(shí)，乳桿菌B 以及乳桿菌A+B+C 混合飼喂可有效提高腸黏膜的吸收面積， 提高養(yǎng)分吸收效率，從而提升海蘭蛋雞的產(chǎn)蛋性能與蛋品質(zhì)。

圖3 飼喂乳酸菌對(duì)十二指腸絨毛的影響