肺炎支原體23Sr RNA耐藥基因位點(diǎn)突變情況與兒童呼吸道感染患者臨床癥狀分析

喬靜，龐新豐

(焦作市婦幼保健院 兒科一區(qū)，河南 焦作 454000)

肺炎支原體是兒童呼吸道感染中的易感病原體，在呼吸道病原體中陽(yáng)性檢出率居于前列[1]。肺炎支原體感染癥狀不典型，不僅可以引起兒童呼吸道感染，還可以引起支氣管炎、肺膿腫及肺外合并癥，嚴(yán)重者甚至危及患者的生命[2]。原有的專家共識(shí)及治療指南，推薦大環(huán)內(nèi)酯類藥物作為治療此類疾病的首選藥物[3]，但是近年來(lái)，兒童肺炎支原體感染治療指南將抗菌藥物的選擇、用藥時(shí)長(zhǎng)、耐藥監(jiān)測(cè)作為研究重點(diǎn)。針對(duì)上述特點(diǎn)，本研究對(duì)兒童呼吸道感染患者進(jìn)行肺炎支原體核酸及耐藥基因突變位點(diǎn)檢測(cè)，分析耐藥性對(duì)臨床治療帶來(lái)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)于疑似肺炎支原體感染、臨床診斷有呼吸道感染癥狀的患兒進(jìn)行采樣。896 例肺炎支原體核酸檢測(cè)及耐藥基因標(biāo)本收集于焦作市婦幼保健院兒科呼吸病區(qū)，時(shí)間2019年1月1日至2019年8月1日，患兒年齡3 個(gè)月至14 歲，男515 例，女381 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①肺炎支原體感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第八版診療標(biāo)準(zhǔn)[4]：患兒有呼吸道感染癥狀；肺部聽診濕啰音；胸部影像學(xué)顯示病灶存在；肺炎支原體抗體檢測(cè)陽(yáng)性抗體滴度大于1∶160。②本研究陽(yáng)性應(yīng)符合核酸檢測(cè)陽(yáng)性。③納入本研究的患兒樣本采集均已取得家屬同意，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①近1 個(gè)月因MP 感染入院治療的患者；②既往重癥肺炎未痊愈者；③免疫治療者。

1.2 檢測(cè)試劑

MP 核酸及基因位點(diǎn)A2603G 和A2604G 檢測(cè)試劑盒選用默樂(lè)生物，檢測(cè)儀器為ABI7500 熒光定量檢測(cè)儀，檢測(cè)試劑盒選用江蘇默樂(lè)生物產(chǎn)品，遵循檢測(cè)儀器和試劑說(shuō)明書進(jìn)行試驗(yàn)操作。

1.3 檢測(cè)方法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)合TaqMan 熒光探針技術(shù)檢測(cè)。對(duì)患者標(biāo)本進(jìn)行肺炎支原體核酸檢測(cè)；對(duì)肺炎支原體核酸陽(yáng)性患者進(jìn)行肺炎支原體基因點(diǎn)位A2603G、A2604G 檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)

臨床癥狀觀察指標(biāo)選擇：肺炎陽(yáng)性率，肺外多系統(tǒng)并發(fā)癥及住院時(shí)長(zhǎng)，發(fā)熱時(shí)長(zhǎng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用x±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用n(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同年齡段分組MP 陽(yáng)性率比較

2 結(jié) 果

2.1 肺炎支原體核酸陽(yáng)性率在不同年齡段中檢測(cè)情況

896 例兒童呼吸道感染患者中，MP 陽(yáng)性98 例，陽(yáng)性率為10.9%(98/896)。肺炎支原體核酸檢測(cè)陽(yáng)性患兒按不同年齡段進(jìn)行分組，分為0 ～6月，6 ～12月，1 ～3歲，＞3 歲四個(gè)年齡組，卡方值為48.65，P ＜0.01，對(duì)比差異明顯，不同年齡段肺炎支原體核酸陽(yáng)性率不同，6 ～12月組肺炎支原體核酸檢測(cè)陽(yáng)性率最低為5.4%，3 歲以上組肺炎支原體核酸檢測(cè)陽(yáng)性率最高為32.1%。 見表1。

2.2 不同年齡組MP 耐藥基因A2603G 和A2604G 突變位點(diǎn)突變率檢測(cè)

98 例MP陽(yáng)性標(biāo)本中，83例檢測(cè)出A2603G 和A2604G 突變，耐藥基因突變率為84.7%(83/98)。耐藥基因突變位點(diǎn)突變率在兒童肺炎支原體陽(yáng)性患者中隨年齡段增加而增高。見表2。

表2 年齡段分組耐藥基因突變情況

2.3 臨床特點(diǎn)分析

以肺炎支原體耐藥基因突變位點(diǎn)A2603G 和A2604G是否突變分組，突變組83 例，未突變組15 例。按照臨床特點(diǎn)分析，以年齡、肺炎、肺外合并癥、住院時(shí)長(zhǎng)、發(fā)熱時(shí)長(zhǎng)等指標(biāo)作為統(tǒng)計(jì)要素進(jìn)行分析。表二中，肺炎支原體耐藥基因突變位點(diǎn)以不同年齡段分組，低年齡段不易發(fā)生肺炎支原體耐藥基因突變點(diǎn)位，不同年齡段四組肺炎支原體耐藥基因突變率對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在臨床癥狀特點(diǎn)分組中，突變組肺炎例數(shù)、肺外感染、住院時(shí)長(zhǎng)、發(fā)熱時(shí)長(zhǎng)均顯著高于非突變組(P＜0.05)，說(shuō)明肺炎支原體耐藥基因突變位點(diǎn)陽(yáng)性患者臨床癥狀中發(fā)熱時(shí)長(zhǎng)，住院周期均高于為突變組，且易發(fā)生肺部及肺外感染。見表3。

表3 MP 耐藥基因位點(diǎn)突變分組情況與臨床癥狀分析

3 討 論

肺炎支原體是一種無(wú)細(xì)胞壁原核細(xì)胞型病原體，由于病原體結(jié)構(gòu)缺乏細(xì)胞壁，易產(chǎn)生耐藥。文獻(xiàn)[4]報(bào)道北京地區(qū)兒童肺炎支原體的耐藥基因突變率超過(guò)80%，與本研究?jī)和疢P 耐藥基因突變率84.7% 接近。核糖體50s 亞單位23Sr RNA 的V 區(qū)是大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物的結(jié)合位點(diǎn)，如果V 區(qū)核苷酸突變即可引起核糖體結(jié)合抗菌藥物親和力下降，從而使肺炎支原體產(chǎn)生耐藥性[5]，目前已發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)主要有A2063G、A2064G[6]。

不同年齡段分組研究，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：＞3 歲組為焦作地區(qū)兒童呼吸道感染肺炎支原體易感人群；但在耐藥基因突變分組中，肺炎支原體耐藥基因位點(diǎn)突變率隨年齡增高而增高。

肺炎支原體感染常見于呼吸道感染，除了呼吸道感染癥狀外，還易累及其他臟器，引起肺外感染癥狀[7]。本研究中98 例肺炎支原體陽(yáng)性感染患者中32 例有肺外感染癥狀，肺外感染率32.7%(32/98)，其中以肝酶異常、心肌受累最常見，其次是胃腸道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。研究發(fā)現(xiàn)肺炎支原體耐藥基因突變組更易出現(xiàn)肺外感染癥狀。突變組肺外感染癥狀37.3%(31/83)肺外感染率遠(yuǎn)高于未突變組的6.7%(1/15)，這與其他學(xué)者研究數(shù)據(jù)相似[8]。耐藥基因突變組臨床癥狀中住院時(shí)間、發(fā)熱時(shí)間均高于未突變組，肺炎及肺外感染等重癥患者比例，肺炎支原體耐藥基因突變組較高(92.8%，77/83)，與耐藥特點(diǎn)密切相關(guān)。

綜上所述，肺炎支原體感染率在不同年齡段陽(yáng)性比例略有不同，三歲以上為易感人群，23Sr RNA 基因位點(diǎn)突變?cè)谀挲g分組中呈現(xiàn)隨年齡增長(zhǎng)突變率增高的特點(diǎn)，23Sr RNA 基因位點(diǎn)突變對(duì)于發(fā)熱時(shí)長(zhǎng)，住院時(shí)長(zhǎng)以及肺部、肺外感染均有影響。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)合TaqMan熒光探針技術(shù)檢測(cè)肺炎支原體23Sr RNA 基因位點(diǎn)突變，在抗菌藥物的選擇和治療方案使用上有指導(dǎo)意義。