高效液相色譜法測定化妝品中普魯卡因胺等7種組分

郭春梅 矯筱蔓 王超

【摘要】 膏霜乳液類化妝品經甲醇直接提取，無需經凈化小柱萃取，由高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，對普魯卡因胺等7種組分進行測定，回收率均在89.6%～119.1%之間，能夠滿足一般實驗要求，方法簡捷高效。

【關鍵詞】 膏霜乳液類化妝品;甲醇直接提取;高效液相色譜法

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2021.01.039

Abstract： Direct extraction of Cream and emulsion cosmetics by methanol，There is no need for over purification column，It was separated by HPLC，Determination of diode array detector，Determination of 7 components of procaine amine，The recoveries warebetween 89.6% and 119.1%，Can meet the general experimental requirements，The method is simple and efficient.

Key words： cream and emulsion class cosmetics;direct methanol extraction;high performance liquid chromatography

普魯卡因胺等七種物質是局部麻醉劑，人的皮膚局部使用能使皮膚緊致光澤，祛皺。因此有被用在化妝品中的案例。長期或過量使用對人體有很大的傷害、能使面部表情僵硬。辛可卡因毒性很大，使用后顏面或皮膚會出現潮紅，還會有過敏反應。丁卡因有擴張毛細血管的藥理作，用藥部位常見輕微的紅斑，偶見輕微水腫或瘙癢，罕見更嚴重的紅斑、水腫或瘙癢。普魯卡因、普魯卡因胺、氯普魯卡因等用量過大或用濃溶液快速注入血管時，可能引起惡心、出汗、脈速、呼吸困難、顏面潮紅、譫妄、興奮、驚厥。長期使用部分患者出現紅斑性狼瘡樣綜合征。利多卡因能引起中樞神經系統的相關癥狀，比如引起嗜睡、感覺異常、肌肉震顫、驚厥、昏迷及呼吸抑制等不良反應，苯佐卡因作為一種表面麻醉劑，如使用不當或長期使用可引起一定的危害。主要表現為對呼吸道有刺激性，吸入后可引起咳嗽，氣短。對眼有刺激性，對部分人員有致敏作用，可表現為皮膚瘙癢，紅斑以及出現皮疹，丘疹，紅腫等。

鑒于普魯卡因胺等7種物質對人體的種種危害性，為保障廣大人民群眾的身體健康，安全使用化妝品，在《化妝品安全技術規范》2015年版中被明確規定為禁用成分。《化妝品安全技術規范》中膏霜乳液類化妝品中普魯卡因胺等7種組分的檢驗方法為1%的三氯乙酸和乙腈提取，再經固相萃取小柱凈化，氮氣吹干后甲醇定容再進行液相色譜法測定，方法繁瑣實驗成本高。本方法采用甲醇直接提取后由高效液相色譜儀進行分離測定，通過回收率實驗，高中低三點的回收率均在89%-119%之間，完全能夠滿足實驗要求。

1 試驗部分

1.1 主要儀器

安捷倫高效液相色譜儀1200，帶二極管陣列檢測器;色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）;超聲波清洗儀;斡旋混合儀;pH計：精度0.01。

1.2 主要試劑

甲醇（色譜純），磷酸氫二鈉，磷酸（優級純），普魯卡因胺來自LGC，辛可卡因來自USP，普魯卡因、氯普魯卡因、苯佐卡因、利多卡因、丁卡因均來自中國食品藥品檢定研究院。

1.3 試驗方法

1.3.1 測定條件

流動相A：0.01 mol/L磷酸氫二鈉水溶液，磷酸調pH值至7.0，流動相B：甲醇

1.3.2 樣品處理

準確稱取樣品0.5 g（精確到0.001 g）于10 mL具塞比色管中，用甲醇定容至刻度渦旋30 s，混勻，超聲提取20 min，以5000 r/min離心5 min，取上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液即為待測溶液，無需過固相萃取凈化小柱凈化。

準確稱取樣品0.5 g（精確到0.001 g）于15 mL具塞比色管中，加入8 mL1%三氯乙酸，2 mL乙腈，渦旋1 min，以5000 r/min離心5 min，上清液待固相萃取小柱凈化。

PCX固相萃取小柱依次用3 mL甲醇、5 mL1%三氯乙酸進行凈化。將待凈化的樣品清液流經小柱后，用3 mL1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，棄去淋洗液，再用10 mL的5%氨水甲醇洗脫，收集洗脫液，氮氣吹干，用甲醇定容至10 mL，經0.45 μm濾膜過濾，濾液作為待測溶液。

1.3.3 標準溶液的配制

稱取普魯卡因胺、氯普魯卡因、丁卡因、利多卡因標準品各0.05 g，普魯卡因、苯佐卡因、辛可卡因標準品各0.04 g置于同一50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，搖勻。得混合標準儲備液。

稱取空白基質0.5 g6份，分別置于10 mL具塞比色管中，分別加標準儲備液0.02、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 mL，同樣品處理，得檢出限、混標1、混標2、混標3、混標4、混標5。

2 結論與討論

2.1 不同方法處理的膏霜基質加對照的色譜圖

膏霜空白樣品甲醇直接提取的色譜圖見圖1。

膏霜加標樣品（混標5）甲醇直接提取進行測定的色譜圖見圖2。

膏霜加標樣品（混標5）固相萃取小柱凈化進行測定的色譜圖見圖3。

2.2 標準曲線

空白基質加標制備的標準系列采用甲醇直接提取和經固相萃取小柱凈化兩種不同方法處理后繪制的標準曲線，其線性方程和線性系數見表1。

2.3 回收率

不同方法處理的加標回收率，甲醇直接提取與經固相萃取小柱凈化后提取的高中低三個濃度的回收率測定的結果見表2―表7。

2.4 檢出限

稱取空白基質0.5 g，置于10 mL具塞比色管中，加標準儲備液0.02 mL，制備成檢出限，通過不同提取方法提取后進行測定，甲醇定容至10 mL直接提取的檢出限譜圖見圖4，經固相萃取小柱凈化后甲醇定容至10 mL的檢出限譜圖見圖5。

3 結論

經過對比實驗，未經固相萃取小柱凈化甲醇直接提取的標準曲線、回收率和檢出限都完全能夠滿足實驗要求。可以確定膏霜類化妝品在測定普魯卡因胺等7種組分時，樣品用甲醇直接提取就能滿足實驗要求。因此能大大地降低了實驗成本，簡化了實驗過程，縮短了檢驗時間。

【參考文獻】

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【參考文獻】

郭春梅（1966-），女，高級工程師，大專，研究方向為食品化妝品檢測。

矯筱蔓（1978-），女，主任藥師，碩士，研究方向為化妝品禁限用物質檢測方法研究。

王超（1985-），女，主管藥師，碩士，研究方向為藥品非法添加及化妝品理化檢驗。