淫羊藿骨碎補鈣片的安全性評價

馬光宇 秦曉培 宋林

摘要 目的：對淫羊藿骨碎補鈣片的食用安全性進行毒理學研究。結論：淫羊藿骨碎補鈣片急性毒性分級屬無毒級，無遺傳毒性，最大無損害作用劑量大于3.33g/kg體重，相當于人體推薦攝入量的100倍。淫羊藿骨碎補鈣片在本研究劑量范圍內是安全的。

關鍵詞：淫羊藿;骨碎補;鈣;安全

骨質疏松癥是一種骨骼系統疾病，多由骨量減少、骨骼微細結構破壞、骨骼脆性增加、易于骨折等原因引起[1]。目前，骨質疏松癥成為繼心血管疾病、糖尿病之后的第3種常見多發的慢性疾病。本品研究一種具有增加骨密度作用的保健食品——是以中藥淫羊藿、骨碎補加鈣制成。本實驗擬對淫羊藿骨碎補鈣片進行毒理學實驗，進一步研究其安全性，為組方的安全使用提供依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1受試物 ?淫羊藿骨碎補鈣片 ?人體推薦量2g/d，其中含淫羊藿提取物0.3g，骨碎補提取物0.15g，鈣0.42g，酪蛋白磷酸肽0.15g。

1.1.2實驗動物 ?清潔級健康小鼠和SD大鼠。

1.1.3菌株 選用組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門氏菌，共四株， 即 TA97a、TA98、TA100、TA102，經生物學鑒定合格。

1.1.4實驗儀器 ?電子天平，Abacus全自動血液分析儀， Li- asys全自動生化分析儀，Olympus顯微鏡， 恒溫水浴箱。

1.2方法

1.2.1 大、小鼠急性毒性試驗 ?均按最大耐受量試驗方法。實驗前隔夜禁食， 不禁水。劑量為20g/kg體重，灌胃量為20ml/kg體重，給藥后觀察2周，判定其最大耐受量（MTD），評價其急性毒性強弱。

1.2.2 遺傳毒性

1.2.2.1 小鼠骨髓細胞微核試驗 小鼠每組10只，雌性各半，受試物設3個劑量組，2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及陰性（無菌水）、陽性（環磷酰胺40mg/kg）對照組。按常規進行實驗。

1.2.2.2 小鼠精子畸形試驗 ?小鼠每組10只，受試物設3個劑量組，2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及陰性（純化水）、陽性（環磷酰胺40mg/kg）對照組。按常規進行實驗。

1.2.2.3 ?Ames試驗 采用標準平板摻入法在加和不加S的條件下進行，實驗設 5個劑量， 5000μg/皿、1000μg/皿、200μg/皿、40μg/皿、8μg/皿， 另設空白對照、溶劑對照 （無菌水） 、陽性對照組， 陽性物為9 -氨基吖啶、2.7 -氨基芴、疊氮鈉、2 -乙酰氨基芴、絲裂霉素C。實驗結果以各劑量組與陰性對照組平均回變菌落數的比值（MR）來判斷。

1.2.3 大鼠30d喂養試驗 動物隨機分成4組，每組20只，雌雄各半，受試物設3個劑量組，1.17g/kg、2.33g/kg、3.33 g/kg，另設陰性對照組，經口給藥，按不同劑量要求將樣品均勻拌入基礎飼料。大鼠2只/籠飼養，自由進食飲水。連續觀察30d，每周記錄體重和進食量并計算食物利用率，實驗期末斷頭取血、處死，對每只大鼠進行臟器大體觀察，同時取肝、腎稱重并計算臟體比，同時進行血象、血生化檢查，并取肝、腎、胃腸進行病理組織學檢查，常規制片，H-E染色。

1.3 統計學處理

數據采用SPS 12.0 forWindows統計軟件包分析， 采用OneWayANVOA分析， 差異顯著性檢驗水準為0.05。

2結果

2.1 大、小鼠急性毒性試驗

實驗期間， 各大、小鼠均未出現異常癥狀、體征， 也無死亡。淫羊藿骨碎補鈣片對雌、雄性小鼠和雌、雄性大鼠經口MTD均大于20.0g/kg體重，屬無毒級。

2.2 遺傳毒性試驗

2.2.1 小鼠骨髓細胞微核試驗 ?結果顯示陽性對照組微核率高達1.88% - 1.92%，而劑量組的微核率在0.12%-0.16%。與陰性對照組（0.14%-0.16%）相比差別無統計學意義（ P>0.05）， 提示淫羊藿骨碎補鈣片對小鼠骨髓細胞染色體無明顯斷裂效應。

2.2.2 小鼠精子畸形試驗 ?結果顯示各劑量組的精子畸形率在1.66%-1.80%， 與陰性對照組（1.88%） 相近，而陽性對照組的精子畸形率高達5.64%，提示淫羊藿骨碎補鈣片對小鼠精子形態無影響。

2.2.3 ?Ames試驗 淫羊藿骨碎補鈣片各劑量組回變菌落數與陰性對照組比較均無明顯差異。未見淫羊藿骨碎補鈣片有致突變作用。

2.3 大鼠30d喂養試驗

2.3.1 生長發育 ? 試驗期間， 大鼠生長良好，各劑量組大鼠均無異常癥狀和體征，也無死亡。經方差分析檢驗，各劑量組動物的體重、進食量、食物利用率與陰性對照組比，差別無統計學意義（ P>0.05） 。

2.3.2血常規及生化檢查 ?各劑量組與陰性對照組比，差別無統計學意義 （ P>0.05） 。

2.3.3 病理組織學檢查 解剖時大體觀察未見異常， 臟器系數各劑量組與陰性對照組比較未見明顯差別。鏡下觀察對照組和劑量組動物的肝、腎、胃、十二指腸均未見明顯的病理改變。

3結論

實驗結果表明：淫羊藿骨碎補鈣片雌雄性大、小鼠經口MTD大于 20.0 g/kg體重， 根據急性毒性分級標準， 屬無毒級;小鼠精子畸形試驗、Ames試驗、小鼠骨髓微核試驗三項遺傳毒性試驗結果均為陰性;30d喂養試驗顯示大鼠體重、總食物利用率、血常規、血液生化指標、臟體比以及肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸和卵巢的病理組織學檢查均未見異常改變。得出淫羊藿骨碎補鈣片的最大無損害作用劑量大于3.33g/kg體重， 相當于人體推薦攝入量的100倍。綜上所述， 淫羊藿骨碎補鈣片在本研究劑量范圍內是安全的。

參考文獻

[1]李祥雨，姜勁挺，李建國，等.骨質疏松癥中藥防治研究進展.中國骨質疏松雜志.2018，24（2）：270-275.