VITEK MS鑒定惰性凝聚桿菌2例報(bào)道

李 梅，郭映輝，張文超，翟玉磊，周珊珊，李貴霞

（河北醫(yī)科大學(xué)附屬河北省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 石家莊 050031）

惰性凝聚桿菌原名惰性嗜血桿菌，最初被歸屬于嗜血桿菌屬，2006年被劃分到放線桿菌屬，目前被劃歸到凝聚桿菌屬。與其親緣性相近的有嗜沫凝聚桿菌、副嗜沫凝聚桿菌和伴放線凝聚桿菌均為凝聚桿菌屬。我們分別在2018年3月和8月從2例眼分泌物樣本中分離到2株惰性凝聚桿菌，現(xiàn)對其形態(tài)學(xué)、質(zhì)譜分析結(jié)果以及抗菌藥物譜進(jìn)行報(bào)道。

1 病例資料

1.1 菌株編號18023016

患兒，男，出生3個(gè)月。2018年2月12日發(fā)現(xiàn)右眼角膜上出現(xiàn)“白點(diǎn)”，于2018年2月30日于河北醫(yī)科大學(xué)附屬河北省兒童醫(yī)院眼科就診。入院查體：體溫37.0 ℃，脈率140次/min，呼吸頻率36次/min，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，神志清楚，心、肺、腹、脊柱及四肢檢查未見異常。眼部專科檢查：右眼角膜刺激征（+），瞼結(jié)膜充血，球結(jié)膜混合充血，角膜中央偏鼻側(cè)可見1處圓片狀灰白色潰瘍灶，角膜熒光素染色（+），周圍角膜水腫。左眼瞼結(jié)膜充血，球結(jié)膜輕度充血，角膜染色示鼻側(cè)可見點(diǎn)狀著色。雙側(cè)前房深淺可，未見明顯浮游物。瞳孔雙側(cè)正大等圓，對光反應(yīng)存在。診斷為右眼角膜潰瘍，雙眼角膜炎。入院后按照檢查結(jié)果給予局部抗感染治療，給予左氧氟沙星眼水點(diǎn)雙眼4次/d，妥布霉素眼膏點(diǎn)雙眼2次/d，復(fù)方托吡卡眼水點(diǎn)右眼1次/d，小牛血去蛋白提取物眼膠點(diǎn)雙眼4次/d，1周后右眼角膜潰瘍較之前好轉(zhuǎn)，患兒出院。

1.2 菌株編號18073021

患兒，女，出生3 d，雙眼內(nèi)眥部隆起3 d，左眼紅腫1 d，于2018年7月30日10：07收入院，查體：體溫36.6 ℃，脈率130次/min，呼吸頻率42次/min，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，神志清楚，心、肺、腹、脊柱四肢檢查未見異常，臍部微隆起；眼部專科檢查：雙眼淚囊區(qū)隆起，局部可觸及硬結(jié)，右眼淚囊區(qū)色青紫，左眼淚囊區(qū)紅腫，按壓可見黃色分泌物溢出，雙眼瞼結(jié)膜稍充血，球結(jié)膜未見明顯充血，無水腫，角膜清。入院診斷：（1）雙眼淚囊突出；（2）左眼淚囊炎。入院后積極完善各項(xiàng)常規(guī)檢查，于2018年8月2日全麻行內(nèi)窺鏡下雙側(cè)鼻腔淚囊造影術(shù)，手術(shù)進(jìn)行順利，術(shù)后沖洗雙眼淚道，沖洗通暢，吞咽明顯，無嗆咳，出院。出院后繼續(xù)給予妥布霉素眼水點(diǎn)雙眼4次/d，妥布霉素眼藥膏涂雙眼1次/晚，注意眼部衛(wèi)生，5 d后復(fù)查，癥狀好轉(zhuǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定

將送檢分泌物拭子樣本接種于哥倫比亞血瓊脂平板、中國蘭瓊脂平板和巧克力瓊脂平板[貝瑞特生物技術(shù)（鄭州）有限責(zé)任公司]，置于5% CO2、35 ℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h后，血瓊脂平板上長出針尖樣小菌落，巧克力瓊脂平板上長出稍大、干燥、無色菌落（圖1），中國蘭瓊脂平板未見菌落生長。菌落涂片染色為革蘭陰性小桿菌（圖2）。取巧克力瓊脂平板上的菌落涂布于VITEK MS一次性靶板（法國生物梅里埃公司），加入0.5 μL甲酸，再加入1 μL基質(zhì)液（4-羥基-2-甲基肉桂酸）（法國生物梅里埃公司），自然干燥后采用VITEK MS儀（法國生物梅里埃公司）進(jìn)行檢測，以標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC 8739）為校準(zhǔn)菌株，鑒定為惰性凝聚桿菌，鑒定百分率均為99.9%，其質(zhì)譜圖見圖3。采用法國生物梅里埃公司VITEK 2 Compact自動(dòng)化鑒定藥敏儀及配套NH細(xì)菌鑒定卡，鑒定結(jié)果為灰色奈瑟球菌，鑒定百分率為88%，生化鑒定編碼為0200000040。送北京醫(yī)院檢驗(yàn)科采用MALDI Biotyper質(zhì)譜儀（德國布魯克公司）鑒定，結(jié)果也為惰性凝聚桿菌。

2.2 體外藥物敏感性試驗(yàn)

根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）M45文件中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)。HTM平板和藥物敏感性試驗(yàn)紙片均購自溫州康泰生物科技有限公司，2株細(xì)菌均為β-內(nèi)酰胺酶陰性，氨芐西林、氨芐西林-舒巴坦、阿莫西林-克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢曲松、美羅培南、亞胺培南、阿奇霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、氯霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑敏感。

圖1 細(xì)菌培養(yǎng)48 h菌落形態(tài)

圖2 菌株革蘭染色鏡下形態(tài)（×1 000）

圖3 細(xì)菌鑒定質(zhì)譜圖

3 討論

凝聚桿菌屬細(xì)菌為革蘭陰性短桿菌，有菌毛、無芽胞、無動(dòng)力、兼性厭氧，常定植或共生在人、哺乳動(dòng)物和鳥的消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜表面，多為動(dòng)物病原菌，具有狹窄的宿主范圍，是正常口腔微生物群的一部分，特別是牙菌斑的正常菌，只在創(chuàng)傷或黏膜破損時(shí)，凝聚桿菌屬才會侵入健康組織引起感染，可致心內(nèi)膜炎、軟組織感染等。有研究結(jié)果顯示，嗜沫凝聚桿菌可引起復(fù)雜性腦膿腫伴急性感染性心內(nèi)膜炎[1]，也可引起化膿性關(guān)節(jié)炎[2]。有研究從乳腺感染膿液樣本和細(xì)菌性心內(nèi)膜炎血液樣本中檢出伴放線凝聚桿菌[3-4]。

惰性凝聚桿菌屬于凝聚桿菌屬，是人類口咽部的共生菌，關(guān)于其致病性的研究報(bào)道比較少見，有研究認(rèn)為惰性凝聚桿菌與細(xì)胞結(jié)構(gòu)具有黏附性，且與其他細(xì)菌共存，是引起牙菌斑的原因[5]。惰性凝聚桿菌也可能引起心內(nèi)膜炎、菌血癥、腎盂腎炎[6-8]。

由于惰性凝聚桿菌在臨床感染中相對較為少見，且不能用普通革蘭陰性菌鑒定卡進(jìn)行鑒定，選擇特殊的苛養(yǎng)菌鑒定卡又容易與灰色奈瑟球菌混淆，因此極易被誤鑒定為其他細(xì)菌。近年來，隨著激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜和16SrRNA檢測等新的微生物鑒定技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用，越來越多的凝聚桿菌被檢出。

凝聚桿菌屬細(xì)菌對廣譜頭孢菌素和氟喹諾酮類抗菌藥物均敏感，對青霉素和氨芐西林有較高的敏感性，1項(xiàng)針對11個(gè)嗜沫凝聚桿菌臨床分離株的研究發(fā)現(xiàn)，其對青霉素的敏感性高達(dá)82%，對氨芐西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢曲松、美羅培南、左氧氟沙星的敏感率為100%[9]，但也有產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株。本微生物實(shí)驗(yàn)室檢出的這2株惰性凝聚桿菌均為β-內(nèi)酰胺酶陰性，所以對氨芐西林、氨芐西林-舒巴坦、阿莫西林-克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢曲松、美羅培南、亞胺培南、阿奇霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、氯霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑均敏感。