基于檸檬酸/乙二胺-碳量子點制備熒光傳感器

張語嫣，李永生

(四川大學 化學工程學院，四川 成都 610065)

碳量子點具有獨特的物理及化學性質，與半導體量子點相比，碳量子點具有低毒性、環境友好、生物相容性好、化學性質穩定等優點，現廣泛用于生物成像[1-2]、傳感[3-4]、藥物傳遞[5-6]和光催化[7-8]等領域。由于碳量子點對金屬離子的超高選擇性，越來越多的碳量子點用于金屬檢測[9-10]。但目前利用的碳量子點熒光探針技術大多使用液態碳量子點，使用過后難以回收，不能重復使用。本研究通過靜電結合，將碳量子點固定在毛細管內表面，制備了一種熒光生物傳感器，對Fe3+有特定響應。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

pH標準物、聚丙烯酸、乙醇、聚乙烯亞胺(PEI)、氫氧化鈉、無水檸檬酸、乙二胺均為分析純；實驗用水均為超純水(電導率0.1 μS/cm)。

RF-5301PC熒光光度儀；玻璃毛細管(45 mm×0.90 mm)；毛細管精密定位座(13 mm×13 mm×43 mm)，自制；艾柯KL-UP-IV-10型超純水器；AUW型電子天平；傲藝紫外-可見分光光度計。

1.2 試劑配制

1.2.1 25 g/L CA/EDA-CQDs儲備液 稱取1.5 g CA/EDA-CQDs，用超純水溶解，100 mL容量瓶定容，置于4 ℃冰箱中保存。

1.2.2 6 g/L PAA儲備液 稱取0.6 g PAA，用超純水溶解，100 mL容量瓶定容。置于4 ℃冰箱中保存。

1.2.3 10 g/L PEI儲備液 稱取1.0 g PEI，用超純水溶解，100 mL容量瓶定容。置于4 ℃冰箱中保存。

1.3 CA/EDA-CQDs的制備[11]

10 mL 1 mol/L檸檬酸溶液中加入2 mL乙二胺，待溶液混合均勻后，置于微波爐中，中高火加熱5 min，可觀察到溶液顏色逐漸變黃，最終得到的褐色產物即為CA/EDA-CQDs。于60 ℃ 烘干24 h。

1.4 CA/EDA-CQDs熒光傳感器制備

用濃硫酸、NH3/H2O2對玻璃表面進行預處理，使玻璃表面帶有負電荷，從而將碳點固定在玻璃表面[12]。其制備過程見圖1。

1.4.1 玻璃毛細管的預處理 將玻璃毛細管放入煮沸的1.0 mol/L NaOH溶液中1 h，使其內表面修飾上硅羥基。取出毛細管，用水、無水乙醇清洗數次，于50 ℃下烘干。

1.4.2 PEI陽離子層修飾 將毛細管浸入10 g/L PEI溶液，室溫下反應5 min。取出毛細管用超純水清洗2次，清除未結合的PEI分子。

1.4.3 PAA陰離子層修飾 將毛細管浸入6 g/L PAA溶液，室溫下反應5 min。取出毛細管，用超純水清洗2次，清除未結合的PAA分子。

1.4.4 CA/EDA-CQDs固定化 將毛細管浸入 15 g/L CA/EDA-CQDs溶液，室溫下反應5 min。取出毛細管，用超純水清洗2次，清除未結合的CA/EDA-CQDs。

1.4.5 多層CA/EDA-CQDs固定化 依次循環上述1.4.3、1.4.4節步驟，按制備PAA/CA/EDA-CQDs復合薄膜層數確定步驟循環次數。

圖1 CA/EDA-CQDs熒光傳感器制備流程圖Fig.1 Flowchart of CA/EDA-CQDs fluorescence sensor preparation

2 結果與討論

2.1 CA/EDA-CQDs光學表征

圖2為CA/EDA-CQDs紫外-可見吸收光譜及熒光光譜表征。

圖2 CA/EDA-CQDs光譜圖Fig.2 The spectrogram of CA/EDA-CQDs

2.2 CA/EDA-CQDs溶液濃度對固定化影響

CA/EDA-CQDs溶液濃度對CA/EDA-CQDs固定化影響見圖3。

由圖3可知，隨著CA/EDA-CQDs溶液濃度增加，傳感器平臺熒光強度隨之增加。為了節省試劑，同時獲得較好的熒光強度，選定CA/EDA-CQDs溶液濃度為15 g/L。

圖3 CA/EDA-CQDs濃度對固定化影響Fig.3 Effect of concentration of CA/EDA-CQDson immobilization

2.3 CA/EDA-CQDs溶液酸度對固定化影響

CA/EDA-CQDs溶液酸度對CA/EDA-CQDs固定化影響見圖4。

圖4 CA/EDA-CQDs pH對固定化影響Fig.4 Effect of CA/EDA-CQDs pHon immobilization

由圖4可知，固定化CA/EDA-CQDs毛細管的熒光強度隨著CA/EDA-CQDs溶液pH的增加而增加，當pH=3時，達到最大值，隨后固定化CA/EDA-CQDs毛細管的熒光強度隨著CA/EDA-CQDs溶液pH的增加而減小。這是由于CA/EDA-CQDs+與H+與PAA的 —COO-基團競爭結合。

2.4 PAA溶液濃度對固定化影響

PAA作為平臺的聚強陰離子電解質層，對CA/EDA-CQDs固定化存在影響，PAA濃度對CA/EDA-CQDs固定化影響見圖5。

圖5 PAA濃度對固定化影響Fig.5 Effect of PAA concentration on immobilization

由圖5可知，PAA濃度為6 g/L時，CA/EDA-CQDs在毛細管內壁固定的效果最好。聚電解質發生電離時，聚電解質鏈上帶有同種電荷，發生靜電排斥，分子鏈舒展開來。溶液濃度<1%，隨著濃度的降低，平衡向電離方向移動。當濃度適當降低時，有利于PAA的電離，利于CA/EDA-CQDs與PAA分子間的靜電結合。

2.5 PAA溶液酸度對固定化影響

PAA溶液酸度對PAA的電離有影響，從而影響到PAA與CA/EDA-CQDs之間的靜電結合。PAA溶液酸度對固定化影響進行考察，結果見圖6。

圖6 PAA的pH對固定化影響Fig.6 Effect of PAA pH on immobilization

由圖6可知，PAA溶液pH為3時，CA/EDA-CQDs在毛細管內壁固定的效果最好。當溶液的酸度過高時，溶液中存在大量H+，對PAA長鏈上的 —COOH的電離有抑制作用，不利于PAA與CA/EDA-CQDs的靜電結合；溶液的酸度降低時，溶液中存在的OH-增多，抑制了固定在毛細管內壁的CA/EDA-CQDs的質子化，仍然不利于PAA與CA/EDA-CQDs的靜電結合。故當pH為3時，對PAA的電離與CA/EDA-CQDs的質子化沒有較大影響。

2.6 傳感器金屬離子選擇性考察

將制備的傳感器內吸入超純水，測定此時傳感器熒光強度為F1，吹出超純水，再吸入不同的金屬離子溶液(1 mg/L)，在傳感器內停留10 min，反應結束后，吹出管內溶液，重新吸入超純水，測定此時傳感器熒光強度(F2)，金屬離子對傳感器熒光猝滅值ΔF=F1-F2，結果見圖7。

圖7 傳感器對金屬離子選擇性Fig.7 Sensor selectivity for metal ions

由圖7可知，該傳感器對Fe3+有高選擇性。

3 結論

基于靜電結合法制備了CA/EDA-CQDs的熒光傳感器。在CA/EDA-CQDs溶液濃度為15 g/L，pH為3，PAA溶液濃度為6 g/L，pH為3時制備的傳感器熒光強度最高。將傳感器內吸入不同的金屬離子，發現傳感器對Fe3+的響應最強，說明該傳感器對Fe3+有特定響應，可用來檢測生物樣品中Fe3+含量。