雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV的臨床價值研究

曹琳

（阜新市中心血站檢驗科，遼寧 阜新 123000）

丙型肝炎作為常見傳染性疾病，多由丙型肝炎病毒（HCV）感染所致，由于HCV在體內(nèi)持續(xù)存在，易誘發(fā)肝硬化甚至肝癌[1]。目前經(jīng)血液制品或血液傳播已成為HCV經(jīng)典傳播途徑，故為控制HCV 傳播，丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）檢測已成為獻(xiàn)血者重要檢查項目[2-3]。抗-HCV主要通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測，既往多使用間接ELISA法，但由于血清中IgG 等影響，間接ELISA 法檢測抗-HCV 假陽性較高。雙抗體夾心 ELISA 法能測定 IgG、IgM 等總抗體，避免 IgG 對檢測結(jié)果的影響[4]。鑒于此，本研究旨在探討雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018 年1 月至2019 年12 月在血站無償獻(xiàn)血的486 份標(biāo)本為研究對象，獻(xiàn)血者男272 例，女214例；年齡22～67 歲，平均年齡（44.18±5.06）歲。采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）進(jìn)行血液篩查，其中抗HCV陽性標(biāo)本、抗HCV陰性標(biāo)本分別為19例、467例。本研究經(jīng)本院倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡22～70 歲；無嚴(yán)重心腎并發(fā)癥；標(biāo)本采集符合要求；臨床資料完整；患者對研究知情并簽署知情同意書。

1.2 方法 收集無償獻(xiàn)血篩查標(biāo)本，3 000 r/min離心10 min，分離血清，分別采用間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法測定抗-HCV，檢測應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)（瑞士TECAN 公司，F(xiàn)reedom Evolyzer 型），北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供血篩間接ELISA試劑盒、雙抗原夾心ELISA試劑盒。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法診斷抗-HCV 結(jié)果，并以熒光定量PCR 血液篩查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計算間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法診斷抗-HCV特異度、敏感度及準(zhǔn)確率。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；準(zhǔn)確率=（真陽性+真陰性）/（真陽性+假陰性+假陽性+真陰性）×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用組間（%）表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 間接ELISA 法診斷結(jié)果 間接ELISA 法診斷抗HCV 陽性、抗 HCV 陰性分別為 96 例、390 例，間接 ELISA 法診斷抗-HCV 敏感度、特異度、準(zhǔn)確率分別為63.16%（12/19）、82.01%（383/467）、81.28%（395/486），見表1。

表1 間接ELISA法診斷結(jié)果

2.2 雙抗體夾心ELISA 法診斷結(jié)果 雙抗體夾心ELISA法診斷抗HCV陽性、抗HCV陰性分別為28例、458例，雙抗體夾心ELISA 法診斷抗-HCV 敏感度、特異度、準(zhǔn)確率分別為94.74%（18/19）、97.86%（457/467）、97.74%（475/486），見表2。

表2 雙抗體夾心ELISA法診斷結(jié)果

2.3 間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法診斷結(jié)果比較 雙抗體夾心ELISA 法診斷抗-HCV 敏感度、特異度、準(zhǔn)確率均高于間接ELISA法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法診斷情況比較

3 討論

HCV屬于單股正鏈RNA病毒，人群普遍易感，多數(shù)HCV患者感染初期無典型癥狀，但隨著病情進(jìn)展，會誘發(fā)肝臟慢性炎癥壞死及肝功能衰竭，嚴(yán)重者將發(fā)展為肝癌，影響患者生存質(zhì)量，甚至危及其生命安全[5]。目前尚無有效的HCV 預(yù)防疫苗及治療藥物，故根據(jù)傳染源、傳播途徑，早期篩查并診治已成為控制丙型肝炎傳染的重要方法[6]。

核酸、抗原及血清學(xué)檢測為血站中常用檢測技術(shù)，每種方法均具有各自特點及使用范圍，其中間接ELISA法作為檢測抗-HCV較為常用血清學(xué)方法，檢測特異度較高，但由于該檢測試劑多采用二抗作為酶結(jié)合物，血清中IgM抗體出現(xiàn)時間早于IgG 抗體，故在HCV 感染早期實施間接ELISA 法檢測易出現(xiàn)漏診現(xiàn)象[7-8]；同時，間接法ELISA 法檢測受抗原制備技術(shù)影響，血清中IgG抗體水平較高，其中非特異性IgG抗體吸附易導(dǎo)致假陽性，盡管檢測前采用稀釋處理能降低IgG抗體水平，但操作較復(fù)雜，仍無法完全避免假陽性現(xiàn)象[9]。孫強(qiáng)等[10]研究中比較分析雙抗體夾心ELISA 法、間接ELISA 法檢測HCV臨床價值，其研究結(jié)果顯示，雙抗體夾心ELISA法診斷HCV 特異度、敏感度高于間接ELISA 法（P＜0.05），且其能提升HCV診斷準(zhǔn)確率，對控制HCV感染及傳播具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，雙抗體夾心ELISA 法診斷抗-HCV 敏感度、特異度、準(zhǔn)確率高于間接ELISA 法，與上述研究結(jié)果較為相似，表明，與間接ELISA法比較，雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV敏感度、特異度及準(zhǔn)確率較高，能避免間接ELISA法檢測中假陽性、假陰性較高的弊端，進(jìn)而降低假陽性血液報廢量，減少獻(xiàn)血樣本的浪費，建議在無償獻(xiàn)血中采用雙抗原夾心ELISA 法測定抗-HCV。雙抗原夾心ELISA 法已在梅毒抗體、抗HBsAg 抗體檢測中廣泛應(yīng)用，能檢測包括IgG、IgM 等總抗體，縮短窗口期，對患者機(jī)體內(nèi)相關(guān)抗體實施2 次特異性反應(yīng)，能減少非特異性IgG影響，改善間接ELISA法檢測中假陽性較高的不足，且雙抗原夾心ELISA法加樣量增加，能避免由于加樣所致的試驗誤差，提高抗-HCV診斷效能[11-12]。

綜上所述，雙抗原夾心ELISA 法檢測抗-HCV 敏感度、特異度及準(zhǔn)確率較高，有利于提升抗HCV 陽性檢出率，降低由于生物學(xué)假陽性所致的血液報廢及獻(xiàn)血者流失，可作為血液樣本抗-HCV篩查優(yōu)選方法。