十八味訶子利尿丸對(duì)大鼠2型糖尿病性胃輕癱的作用

常秀君 馬如蘭 吳穹

(1青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青海 西寧 810000；2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

胃輕癱是糖尿病的慢性并發(fā)癥。它是一種以高糖影響胃腸道細(xì)胞正常生理功能為主要原因，胃腸道動(dòng)力障礙所致胃排空延遲為主要特征的上消化道肌肉紊亂性疾病〔1〕。胃輕癱對(duì)患者的傷害主要體現(xiàn)在：①直接影響消化道的正常生理功能，臨床表現(xiàn)為惡心、食欲不振、餐后腹脹感、胃脘部疼痛等癥狀〔2，3〕；②胃輕癱抑制糖尿病患者的藥物吸收，間接加重其他慢性糖尿病并發(fā)癥，如心血管疾病、腎病等，從而加速糖尿病進(jìn)程〔4〕。

藏藥十八味訶子利尿丸是藏醫(yī)臨床研究常用降糖治療藥物之一，可以預(yù)防糖尿病慢性并發(fā)癥和控制糖尿病患者的血糖水平〔5〕。其方中訶子澀腸止瀉〔6〕、姜黃主治胸腹脹痛、紅花活血通經(jīng)、牛黃促進(jìn)腸蠕動(dòng)〔7〕、巴夏嘎除胃中邪熱、藏茜草和巖精膏活血通經(jīng)、祛腸熱〔8〕、賽北紫堇主胃脘痛、刀豆益腹脹。因此，根據(jù)多年來(lái)十八味訶子利尿丸在藏藥臨床上良好的降糖作用及方中部分藥物對(duì)胃腸道細(xì)胞的修復(fù)功效和對(duì)小血管的保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)將初步探討十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病胃輕癱大鼠一般狀況、血糖、胃排空率、小腸推進(jìn)率及胃竇部組織的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 24只6周齡標(biāo)準(zhǔn)化雄性SD大鼠，體重80～100 g購(gòu)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：61001700003722，許可證號(hào)：SCXK(陜)2017-003。

1.2儀器與試劑 高脂飼料(10%蔗糖，10%豬油，1%膽固醇，0.3%膽酸鈉，78.7%常規(guī)飼料)鏈脲佐菌素(Sigma公司，美國(guó))，十八味訶子利尿丸(青海省藏醫(yī)院)，檸檬酸鈉緩沖液(Solarbio公司，北京)，卓越金采血糖儀及試劑(Roche公司，美國(guó))。

1.32型糖尿病胃輕癱大鼠模型的建立 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后隨機(jī)分為空白組(8只)，建模組(16只)。兩只一籠，自由進(jìn)行攝食飲水?？瞻捉M予常規(guī)使用飼料喂養(yǎng)，建模組給予高脂飼料喂養(yǎng)12 w后禁食、不禁水12 h，隨即尾靜脈一次性注射25 mg/kg劑量〔9〕的鏈脲佐菌素檸檬酸鈉緩沖液，72 h通過(guò)快速尾靜脈血糖儀檢測(cè)隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L，即該2型糖尿病大鼠模型成功。繼續(xù)予以普通飼料喂養(yǎng)6 w，觀察大鼠有腹部膨脹、體重減輕，大便變稀等胃輕癱癥狀，確定2型糖尿病胃輕癱大鼠建模成功〔10〕。

1.4給藥方法 將建模成功的16只大鼠隨機(jī)分為兩組，模型組和藏藥組，每組8只。藏藥組灌胃十八味訶子利尿丸300 mg/kg〔11〕，隔天1次，連續(xù)灌胃3 w；空白組和模型組同時(shí)灌胃等量生理鹽水。

1.5觀察指標(biāo)

1.5.1攝食和飲水 觀察每籠大鼠建模前、建模成功后、灌藥3 w后24 h的攝食和飲水情況。

1.5.2血糖和體重 觀察各組大鼠造建前、建模成功后、灌藥3 w后隨機(jī)血糖和體重。

1.5.3胃排空率與小腸推進(jìn)率 末次給藥后大鼠進(jìn)行禁食12 h，期間可自由攝水。隨即一次性灌胃2 ml 5%酚紅溶液，45 min后行水合氯醛麻醉，結(jié)扎幽門(mén)與賁門(mén)，取全胃于培養(yǎng)皿中，參照賀鳳娥〔12〕的方法測(cè)定酚紅剩余量。計(jì)算胃排空率=(1-測(cè)定酚紅殘留量/酚紅灌胃量)×100%。結(jié)扎大鼠幽門(mén)至回盲瓣的小腸直鋪于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，測(cè)量幽門(mén)到回盲瓣全長(zhǎng)(L2)和幽門(mén)到酚紅染成紅色末端距離(L1)。計(jì)算小腸推進(jìn)率=L1/L2×100%。

1.5.4胃竇部組織病理形態(tài)學(xué) 大鼠胃竇部組織行常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色切片，光鏡下觀察胃竇組織病理形態(tài)改變。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1飲水和攝食 模型組、藏藥組與空白組比較，建模成功后24 h飲水?dāng)z食均增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；藏藥組與模型組比較，灌藥3 w后24 h飲水?dāng)z食均減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組不同時(shí)間24 h飲水、攝食及血糖濃度和體重變化

2.2血糖和體重 藏藥組、模型組與空白組比較，建模成功后血糖濃度上升、體重減輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；藏藥組與模型組比較，灌藥3 w后血糖濃度下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而體重?zé)o明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3胃排空率和小腸推進(jìn)率 末次灌藥結(jié)束后，藏藥組與模型組比較，胃排空率和小腸推進(jìn)率均增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病胃輕癱大鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率的影響

2.4胃竇部病理表現(xiàn) 空白組胃黏膜完整，細(xì)胞排列整齊、胞膜完整、胞質(zhì)染色均勻、無(wú)空泡；無(wú)出血和炎細(xì)胞滲出。模型組壁細(xì)胞胞質(zhì)疏松化；出現(xiàn)紅細(xì)胞滲出、水腫、少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的炎癥表現(xiàn)。藏藥組與模型組比較，壁細(xì)胞胞質(zhì)疏松化減輕，炎癥表現(xiàn)緩解。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠胃竇部病理表現(xiàn)(HE，×100)

3 討 論

糖尿病胃輕癱的發(fā)病機(jī)制與多種原因相關(guān)，其中與高血糖誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)影響胃組織的正常生理功能；迷走神經(jīng)、胃腸道平滑肌細(xì)胞、起搏細(xì)胞病理改變導(dǎo)致胃腸運(yùn)動(dòng)功能下降；炎癥反應(yīng)加劇導(dǎo)致胃組織損傷等因素具有密切的聯(lián)系〔13〕。本實(shí)驗(yàn)觀察到藏藥十八味訶子利尿丸對(duì)高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的2型糖尿病胃輕癱大鼠具有一定的保護(hù)作用，體現(xiàn)在灌藥3 w后飲水減少、血糖降低、胃竇部組織細(xì)胞損傷減小、炎癥現(xiàn)象緩解?？赡苁怯捎诙喾N藥物組合后顯著提高胰島素水平從而控制大鼠血糖〔14〕；方中訶子提高了氧化應(yīng)激引起神經(jīng)細(xì)胞損傷的修復(fù)能力〔15〕；小檗皮、刺柏等藥物的消炎作用；姜黃、人工牛黃對(duì)胃腸道的保護(hù)作用；藏茜草對(duì)小血管損傷的愈合功效等因素有關(guān)。

綜上所述，藏藥十八味訶子利尿丸可能從直接保護(hù)胃腸道組織及間接降低血糖兩方面減慢了2型糖尿病慢性并發(fā)癥胃輕癱的發(fā)展進(jìn)程，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。