丁香菌酯與辛菌胺混配對(duì)桃枝枯病的防治研究

范昆，付麗，張義坤，武海斌，孫瑞紅，曲健祿*

(1.山東省果樹研究所，山東泰安 271000；2.泰安市泰山風(fēng)景名勝區(qū)管理委員會(huì)桃花源管理區(qū))

桃枝枯病是桃樹的主要病害之一，隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整、效益農(nóng)業(yè)的發(fā)展，近年來發(fā)生、危害逐年加重，主要癥狀表現(xiàn)為春梢抽生后基部發(fā)黑，枝條逐漸枯死，樹勢(shì)減弱，甚至桃樹整株枯死，嚴(yán)重影響桃樹樹勢(shì)和產(chǎn)量，可造成桃樹減產(chǎn)20%～50%[1]。

目前，桃樹枝枯病的防治主要依靠化學(xué)防治方法。丁香菌酯是一種甲氧基丙烯酸甲酯類化合物，通過鎖住細(xì)胞色素b和c1之間的電子傳遞而阻止細(xì)胞的ATP合成，從而抑制其線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用。具有保護(hù)、治療、鏟除、滲透、內(nèi)吸活性作用，而且能在植物體內(nèi)、土壤和水中很快降解。辛菌胺，是一種環(huán)保型氨基酸類高分子聚合物殺菌劑，是新一代高科技、環(huán)保型、高效廣譜、低毒殺菌劑。辛菌胺的作用機(jī)理是在水溶液中能產(chǎn)生電離，親水基部分含有強(qiáng)烈的正電性，吸附通常呈負(fù)電的各類細(xì)菌、病毒從而抑制了細(xì)菌、病毒的繁殖，凝固病菌蛋白質(zhì)，使病菌酶系統(tǒng)變性，加上聚合物形成的薄膜堵塞了這部分微生物的離子通道，使其立即窒息死亡，從而達(dá)到最佳的殺菌效果。殺菌廣譜，具有內(nèi)吸性和極強(qiáng)的滲透性，還具有雙向輸導(dǎo)作用，同時(shí)具有保護(hù)、治療、鏟除和調(diào)養(yǎng)四大功能。

本研究對(duì)丁香菌酯和辛菌胺兩種不同作用機(jī)制的藥劑進(jìn)行防治桃枝枯病研究，并對(duì)其進(jìn)行科學(xué)復(fù)配，開展室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定并進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，篩選出對(duì)桃樹枝枯病具有明顯防效的新型配方制劑，以期提高病害防治的安全性和有效性，以及延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藥劑：96%丁香菌酯原藥，吉林省八達(dá)農(nóng)藥有限公司；30%辛菌胺母藥，陜西省西安嘉科農(nóng)化有限公司；20%丁香菌酯懸浮劑200倍液，吉林省八達(dá)農(nóng)藥有限公司；1.2%辛菌胺醋酸鹽水劑，山東勝邦綠野化學(xué)有限公司；3%甲基硫菌靈糊劑，日本曹達(dá)株式會(huì)社；430g/L戊唑醇懸浮劑，安道麥馬克西姆有限公司。

丁香菌酯、辛菌胺原藥分別先用少量N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、丙酮溶解，配成10000μg/mL的母液，再以0.2%的體積分?jǐn)?shù)加入乳化劑Tween-80，于冰箱中4℃下貯藏備用，使用時(shí)以無菌水稀釋至適當(dāng)濃度。

供試病原菌及培養(yǎng)基：桃枝枯病菌(Phomopsisamygdali)；PSA培養(yǎng)基(馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，去離子水1000mL)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑對(duì)病原菌的室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定

單劑毒力測(cè)定方法[2]：先將供試藥劑配制成7個(gè)濃度梯度(丁香菌酯：0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg/kg；辛菌胺1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0mg/kg)。將病原菌于PDA培養(yǎng)基上26℃預(yù)培養(yǎng)4天，用直徑7mm的打孔器在靠近菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，接種到含有不同藥劑濃度的培養(yǎng)基平板上，每皿一片，置于26℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)4天，用十字交叉法測(cè)定各處理的菌落生長(zhǎng)直徑，以清水為對(duì)照，每濃度處理重復(fù)4次。測(cè)定菌落徑向線性生長(zhǎng)量，確定藥劑對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑制率。通過菌絲生長(zhǎng)抑制概率值和藥劑濃度對(duì)數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑對(duì)菌株的有效抑制中濃度EC50值。

混配藥劑聯(lián)合毒力測(cè)定[3]： 在單劑毒力測(cè)定的基礎(chǔ)上，將供混配的丁香菌酯、辛菌胺按體積比例分別設(shè)置10∶1、5∶1 、2∶1 、1∶1、1∶2 、1∶5 、1∶10 、1∶15 、1∶20 、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40、1∶45、1∶50共15個(gè)配比，配制成最終質(zhì)量濃度為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/kg 7個(gè)系列濃度的含藥PDA培養(yǎng)基，確定藥劑對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑制率。每處理(每菌株每濃度水平)重復(fù)4次，以不加藥劑的PDA培養(yǎng)基作為對(duì)照，求出混配藥劑對(duì)菌株的有效抑制中濃度EC50值，利用孫云沛法(1960)計(jì)算混配劑的共毒系數(shù)CTC，評(píng)價(jià)混配劑的協(xié)同增效作用。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均由Microsoft Excel 2003、DPS數(shù)據(jù)處理工作平臺(tái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算出每種藥劑的EC50值、95%置信限區(qū)間。

抑制生長(zhǎng)率(%) = [(對(duì)照菌落直徑- 處理菌落直徑) / (對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑) ]×100

毒力指數(shù)TI=(標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/供試藥劑EC50)×100

混配劑實(shí)際毒力指數(shù)ATI=(標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/混配制劑EC50)×100

混配劑理論毒力指數(shù)TTI=單劑A的TI × PA+單劑B的TI × PB(PA和PB分別為混配劑中有效成分的百分含量)

共毒系數(shù)CTC=混配劑的實(shí)際毒力指數(shù)ATI/混配劑的理論毒力指數(shù)TTI × 100

增效作用判斷：CTC≥120，具有增效作用；80

1.2.2 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑的田間藥效試驗(yàn)

1.2.2.1 試驗(yàn)園基本情況 試驗(yàn)地點(diǎn)在山東省泰安市西苑莊桃園。田間試驗(yàn)供試品種為倉(cāng)方早生。樹齡均為7年，株行距為3m×4m，選取樹勢(shì)相當(dāng)、病情相近、管理措施一致的植株作為試材，歷年枝枯病發(fā)生較重。

1.2.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按照1.2.1試驗(yàn)獲得的丁香菌酯、辛菌胺最佳配比配制20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑。

20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑有效成分用量(下同)133.3、200、333.3mg/kg；20%丁香菌酯懸浮劑250mg/kg；1.2%辛菌胺醋酸鹽水劑60mg/kg；43%戊唑醇懸浮劑172mg/kg；70%甲基硫菌靈可濕性粉劑1000mg/kg及空白對(duì)照處理。每4株樹為一個(gè)小區(qū)，重復(fù)4次，小區(qū)隨機(jī)排列，并掛牌標(biāo)示。

1.2.2.3 試驗(yàn)方法 于6月份發(fā)病初期進(jìn)行葉面噴霧處理，每次施藥間隔10～15天，共施藥3次。最后一次施藥及其藥后14天調(diào)查各處理小區(qū)的發(fā)病率和病情指數(shù)，調(diào)查時(shí)每株樹東、南、西、北4個(gè)方向共80個(gè)新枝(每方向20個(gè))，計(jì)算調(diào)查發(fā)病率和病情指數(shù)，采用DMRT法統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)調(diào)查桃樹是否受所施藥劑的影響而產(chǎn)生藥害，以及藥害的癥狀類型和受害程度[4]。

桃枝枯病的田間病情分級(jí)分6 級(jí)，具體如下:0級(jí)，全株無病；1級(jí)，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條周長(zhǎng)的50%，10%以下葉片凋萎；3級(jí)，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條周長(zhǎng)的51%～100% ，11%～30% 葉片凋萎；5級(jí)，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條1 周，31%～50% 葉片凋萎，枝條輕度枯萎；7級(jí)，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條1周，51%～70% 葉片凋萎、落葉，枝條中度枯萎；9級(jí)，桃樹枝枝條病斑環(huán)繞枝條1周，70%以上葉片凋萎、落葉，枝條枯死。

病情指數(shù)、防效等參照黃國(guó)洋的方法，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)利用DPS軟件完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑對(duì)桃枝枯病病原菌的聯(lián)合毒力室內(nèi)測(cè)定結(jié)果

丁香菌酯、辛菌胺單劑及15個(gè)不同配比的混配藥劑對(duì)桃枝枯病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見表1、2。結(jié)果表明，丁香菌酯、辛菌胺及其混配制劑，對(duì)桃枝枯病菌菌絲生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制活性，其中丁香菌酯與辛菌胺的配比在1∶2～1∶45之間時(shí)，對(duì)供試病原菌的共毒系數(shù)均在120以上，表明這兩種殺菌劑在此配比下具有很好的協(xié)同增效作用，尤其是配比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20的共毒系數(shù)(CTC)分別為154.59、168.75、176.24、161.10，協(xié)同增效作用更為顯著。

表1 2種藥劑對(duì)桃枝枯病菌的毒力室內(nèi)測(cè)定結(jié)果

表2 丁香菌酯與辛菌胺不同比例混配對(duì)桃枝枯病菌的毒力室內(nèi)測(cè)定結(jié)果

2.2 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑對(duì)桃枝枯病的田間防治效果

綜合評(píng)價(jià)室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果，選擇1∶10作為丁香菌酯和辛菌胺的最佳復(fù)配比例，制備20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑用于田間藥效試驗(yàn)。結(jié)果(表3)顯示，末次施藥當(dāng)日、藥后20天，20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑各藥劑處理對(duì)桃枝枯病防治效果分別為88.70～91.91%、91.05%～93.39%，均具有較好的田間防治效果，20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑有效成分用量333.3mg/kg的防效顯著優(yōu)于對(duì)照藥劑20%丁香菌酯SC 250mg/kg、1.2%辛菌胺醋酸鹽水劑60mg/kg、43%戊唑醇SC 172mg/kg、70%甲基硫菌靈WP 1000mg/kg的防治效果。

表3 20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑防治桃枝枯病的藥效結(jié)果

3 討論

丁香菌酯、辛菌胺具有不同的作用機(jī)制[5，6]，兩者復(fù)配可對(duì)病原菌多位點(diǎn)作用，擴(kuò)大殺菌譜，提高防效，降低農(nóng)藥施用量，延緩抗藥性的產(chǎn)生。本試驗(yàn)對(duì)兩種供試藥劑室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果表明，丁香菌酯、辛菌胺混配對(duì)桃枝枯病菌防治相對(duì)于單劑防治具有顯著的增效作用。從共毒系數(shù)來看，丁香菌酯與辛菌胺的配比在1∶2～1∶45之間時(shí)，對(duì)桃枝枯病菌的增效作用最為顯著。

綜合考慮室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果及田間實(shí)際用藥量的需要，選擇1∶10作為丁香菌酯、辛菌胺復(fù)配制劑的最佳復(fù)配比例，并按此比例進(jìn)行復(fù)配制劑的制備和田間防病效果驗(yàn)證。綜合考慮田間防效、有效成分用量成本及抗藥性風(fēng)險(xiǎn)等因素，推薦20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑的最佳施用濃度為1500倍～600倍(有效成分用量133.3～333.3mg/kg)，使用前直接以成品制劑形式桶混，或直接單劑形式兌水混勻配置所需濃度，全植株均勻噴霧施用。

目前，未見有丁香菌酯與辛菌胺進(jìn)行復(fù)配防治桃枝枯病的藥劑登記及文獻(xiàn)報(bào)道。通過不同作用機(jī)制藥劑的混配及新型藥劑的應(yīng)用，有利于擴(kuò)大防治譜、延緩抗藥性的產(chǎn)生[3]。因此，20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑作為桃枝枯病防治及延緩病原菌抗藥性發(fā)生發(fā)展的混配制劑具有較好的推廣應(yīng)用潛力。然而，為進(jìn)一步明確丁香菌酯與辛菌胺復(fù)配對(duì)桃枝枯病的防治效果，仍需開展多年多地區(qū)的田間試驗(yàn)驗(yàn)證。