潰瘍性結腸炎患者活動期腸道菌群及糞便炎癥標志物檢測及其臨床意義

陳茜茜 朱海勇

[摘要] 目的 觀察潰瘍性結腸炎患者活動期腸道菌群及糞便炎癥標志物含量及其臨床意義。 方法 回顧性分析2018年3月至2021年1月在我院治療的60例潰瘍性結腸炎患者的臨床資料，按照病情狀況分為活動期組（n=39）與緩解期組（n=21），同時選擇在我院體檢的50名健康者為對照組。比較三組研究對象的腸道需氧菌群（包括酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌）、厭氧菌群（包括雙歧桿菌、擬桿菌、乳桿菌、真桿菌、消化球菌）以及糞便炎癥標志物乳鐵蛋白（LF）、鈣衛蛋白（FC）、髓過氧化酶（MPO）、基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）的水平。 結果 活動期組酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌數量明顯高于緩解期組與對照組，緩解期組酵母菌、腸球菌、腸桿菌數量明顯高于對照組（P<0.05）;活動期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于緩解期組與對照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于緩解期組與對照組，緩解期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于對照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于對照組（P<0.05）;活動期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于緩解期組與對照組，緩解期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于對照組（P<0.05）。 結論 潰瘍性結腸炎患者腸道菌群失調，糞便中炎癥標志物水平明顯較高，能夠通過腸道菌群變化及糞便內LF、FC、MPO、MMP-9水平評估疾病的活動性。

[關鍵詞] 潰瘍性結腸炎;活動期;需氧菌群;厭氧菌群;乳鐵蛋白;鈣衛蛋白;髓過氧化酶;基質金屬蛋白酶-9

[中圖分類號] R574.62? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）34-0016-04

[Abstract] Objective To observe the levels of intestinal flora and fecal inflammation markers in patients with ulcerative colitis and its clinical significance. Methods The clinical data of 60 patients with ulcerative colitis admitted to our hospital from March 2018 to January 2021 were retrospectively analyzed. According to their condition， the patients were divided into the active period group（n=39） and the remission period group（n=21）. At the same time， 50 healthy people who had a physical examination in our hospital were selected as the control group. The intestinal aerobic flora （including yeast， enterococcus， staphylococcus， and enterobacteriaceae）， the anaerobic flora（including bifidobacterium， bacteroides， lactobacillus， eubacterium， peptococcus）， and the fecal inflammation markers lactoferrin（LF）， calprotectin （FC）， myeloperoxidase （MPO）， matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） between the three groups were compared and analyzed. Results The numbers of enterococcus， staphylococci， and enterobacteriaceae in the active stage group were significantly higher than those in the remission stage group and the control group. The numbers of yeast， enterococcus， and enterobacteriaceae in the remission stage group were significantly higher than those in the control group. The differences were statistically significant（P<0.05）. The bifidobacterium， lactobacillus， eubacteria in the active period group were significantly lower than those in the remission stage group and the control group. The bacteroides and peptococcus in the active period group were significantly higher than those in the remission stage group and the control group. The bifidobacterium， lactobacillus， and eubacteria in the remission stage group were significantly lower than those in the control group. The bacteroides and peptococcus in the remission stage group were significantly higher than those in the control group. The differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of LF， FC， MPO， and MMP-9 in the active stage group were significantly higher than those in the remission group and the control group. The levels of LF， FC， MPO， and MMP-9 in the remission stage group were significantly higher than those in the control group， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion In patients with ulcerative colitis， the intestinal flora is imbalanced， and the level of fecal inflammatory markers is significantly higher. The activity of the disease can be assessed by the changes in the intestinal flora and the levels of LF， FC， MPO， and MMP-9 in feces.

[Key words] Ulcerative colitis; Active stage; Aerobic flora; Anaerobic flora; Lactoferrin; Calprotectin; Myeloperoxidase; Matrix metalloproteinase-9

潰瘍性結腸炎的發病原因還沒有完全明確，現在大多數學者認為是由遺傳易感、環境、免疫功能不正常、腸道屏障功能出現障礙等諸多原因引發，其中，免疫應答紊亂與慢性炎癥反應為引發潰瘍性結腸炎的重要環節，腸道中的菌群紊亂是導致免疫應答變化、炎癥反應的一個關鍵因素，是發生潰瘍性結腸炎的關鍵因素[1-3]。近幾年，多項文獻[4-5]，腸道內菌群的不協調與潰瘍性結腸炎息息相關。通常來說炎癥性腸病腸道內的菌群組成變化主要有多樣性減少、黏膜總菌改變、于疾病進展期菌群組成變化，像增加侵襲性細菌的類型、減少保護性菌的數量[6]。潰瘍性結腸炎患者的腸黏膜屏障于腸道炎癥發生后受損，經由受損的腸黏膜屏障，中性粒細胞進入腸腔，通過糞便排出，所以，糞便內的中性粒細胞衍生產物乳鐵蛋白（Lactoferrin，LF）、鈣衛蛋白（Fecal calprotectin，FC）、髓過氧化酶（Myeloperoxidase，MPO）、基質金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）等往往被用于腸道炎癥評估[7-8]。但是國內少有醫療機構對潰瘍性結腸炎患者的糞便做相應的菌群分析，因而本院在患者入院后對菌群進行分析。基于此，本研究回顧性分析我院診治的潰瘍性結腸炎患者的臨床資料，觀察其活動期腸道菌群及糞便炎癥標志物檢測及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年3月至2021年1月在我院治療的60例潰瘍性結腸炎患者的臨床資料，本研究經本院醫學倫理委員會批準同意，且所有患者均知情同意。納入標準：符合潰瘍性結腸炎的相關標準者[9]。排除標準：①處于哺乳期、妊娠期的婦女;②合并其他免疫系統疾病者;③合并惡性腫瘤者;④使用糖皮質激素、免疫調節劑、免疫抑制劑、益生菌進行治療的患者。按照病情狀況分為活動期組（n=39）與緩解期組（n=21）?；顒悠诮M男23例，女16例;年齡21～49歲，平均（28.69±8.11）歲;病程0.5～18.5年，平均（9.57±5.48）年。緩解期組男7例，女14例;年齡20～51歲，平均（29.06±8.21）歲;病程1～19年，平均（9.88±5.36）年。同時選擇在我院體檢的50名健康者為對照組，男29例，女21例;年齡19～52歲，平均（29.57±7.38）歲。兩組患者的基本資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有研究對象在結腸鏡檢查日留取5～10 g新鮮糞便，于無菌便盒內密閉保存，30 min之內送檢。

1.2.1 直接涂片鏡檢與分析菌群? 對糞便標本進行涂片，面積為1.5 cm×2.0 cm左右，厚度像血膜的菌膜，于干燥固定之后格蘭染色，借助油鏡對視野（10個）進行觀察，按照各油鏡視野下細菌總數同各類細菌的比值，對菌群是否失調及失調的程度進行判斷，分級及判斷標準依據《腸道菌群糞便涂片檢查圖譜》[10]。

1.2.2 細菌培養鑒定? 選擇接種環10 μL取一環糞便，使用四區劃線法實施接種。①需氧培養，麥康凱平板與血平板接種，于37℃且包括5%體積分數的CO2的有氧環境內孵育24 h，選擇VITEK 2全自動細菌鑒定儀（生物梅里埃公司）對需氧菌群（包括酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌）進行檢測。②厭氧培養：厭氧血平板接種，于無氧且37℃的環境內孵育48 h，之后進行耐氧試驗，選擇API 20A厭氧菌鑒定卡（北京千舜生物科技有限公司）鑒定厭氧菌群（包括雙歧桿菌、擬桿菌、乳桿菌、真桿菌、消化球菌）。

1.2.3 糞便炎癥標志物檢測? 選擇生理鹽水稀釋糞便標本，然后進行離心，選取上清液，使用酶聯免疫吸附法對LF、FC、MPO、MMP-9水平進行檢測，試劑盒都由南京建成科技有限公司提供。

1.3 統計學方法

應用SPSS 20.0 統計學軟件進行分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組需氧菌菌群的數量比較

活動期組酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌數量明顯高于緩解期組與對照組，緩解期組酵母菌、腸球菌、腸桿菌數量明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 三組厭氧菌菌群的數量比較

活動期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于緩解期組與對照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于緩解期組與對照組;緩解期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于對照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 三組糞便炎癥標志物水平比較

活動期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于緩解期組與對照組，緩解期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

潰瘍性結腸炎屬于常見胃腸道的非特異性慢性疾病，此病臨床特征和體征輕重緩急會交替變換，具有不一致性，患者既可出現全身癥狀，也會僅出現結腸癥狀[11]。相關文獻顯示，發生潰瘍性結腸炎的原因同腸道菌群、免疫、遺傳以及環境等因素息息相關。腸道內的優勢菌群同人體的免疫系統會維持動態平衡，通常腸道免疫系統不將這些共生菌群看作非己，所以耐受于其免疫系統，然而若腸道出現慢性炎癥，這類細菌會大量增殖，導致腸道免疫屏障被破壞，腸黏膜免疫功能被抑制，從而導致人體腸道出現免疫反應，引發潰瘍性結腸炎[12-14]。然而具體的機制目前尚不明確，同炎性因子是否相關仍有待分析。