高原地區(qū)藏、漢族輕度認(rèn)知障礙與阿爾茨海默病病人血清氧化低密度脂蛋白和髓過氧化物酶的水平

冀磊 鐘欣 杜燦 李國峰 李鴻娟 朱愛琴

AD是一種常見的老年神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。2020年AD報告[1]指出，美國65歲以上老年人有580萬人患有AD，到本世紀(jì)中葉預(yù)計將增長至1380萬。輕度認(rèn)知障礙(mild cognitive impairment，MCI)作為正常衰老與早期癡呆之間的過渡階段，每年向癡呆的轉(zhuǎn)化率為8%～15%[2]，比正常人群高出近10倍。AD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，且尚未明確，但越來越多的研究證實(shí)，AD的發(fā)生與神經(jīng)炎癥反應(yīng)有關(guān)[3]。作為新型血管炎癥標(biāo)志物的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)和髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)在高原地區(qū)藏、漢2個民族中與MCI和AD進(jìn)程的關(guān)系未見報道，故本研究以此作為研究目的，旨在為今后高原人群預(yù)防AD提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 入選對象均來自于青海省西寧地區(qū)(海拔2260 m)，在對當(dāng)?shù)鼐幼?0年以上的藏、漢族城鎮(zhèn)居民進(jìn)行的流行病學(xué)調(diào)查(2012～2015年)的基礎(chǔ)上，共選取180例進(jìn)行研究，年齡60～85歲。其中藏、漢族MCI組和AD組各30例，藏、漢族正常對照(normal control，NC)組各30例。MCI病人符合Petersen診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：主訴或知情者報告有認(rèn)知損害；神經(jīng)心理測試有一個或多個認(rèn)知領(lǐng)域損害(執(zhí)行功能、記憶、語言或視空間)；日常生活能力正常，未達(dá)到癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)。AD病人均符合美國國家衰老研究所和阿爾茨海默病學(xué)會(NIA-AA)AD診斷的2011版核心標(biāo)準(zhǔn)[5]，并結(jié)合MMSE評分結(jié)果判斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)失語、行動不便、嚴(yán)重聽力或視力障礙者；(2)有精神病史者或智力發(fā)育遲緩者；(3)合并感染性疾病等嚴(yán)重內(nèi)科疾病者；(4)合并可引起腦功能障礙的神經(jīng)系統(tǒng)疾病如腦卒中、腦血管性癡呆、高血壓腦病和腦外傷等病人；(5)合并抑郁癥等精神類疾病病人；(6)拒絕參加本次試驗(yàn)者。本研究已獲得青海省人民醫(yī)院倫理委員會審批同意。受試者及其監(jiān)護(hù)人同意參加本研究，均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 一般資料調(diào)查:制定統(tǒng)一的調(diào)查方法和調(diào)查問卷，并對調(diào)查員進(jìn)行培訓(xùn)，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。采用問卷調(diào)查方式，記錄一般人口學(xué)資料，包括：年齡、性別、世居海拔、民族、認(rèn)知狀態(tài)、日常生活能力、文化程度、居住地等。

1.2.2 神經(jīng)量表測定:采用MMSE進(jìn)行認(rèn)知功能評分，根據(jù)文盲、小學(xué)、中學(xué)、大學(xué)等不同的文化程度，分別以MMSE評分≤17、20、22、23分作為入選AD組的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 血液指標(biāo)檢測：所有受試者空腹采集靜脈血。一部分血液以4000 r/min離心，分離血清，置于-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫涣硪徊糠旨尤隕DTA-Na2抗凝，分離血漿，檢測血常規(guī)。采用ELISA法測定血清ox-LDL和MPO的水平，嚴(yán)格按照各試劑盒說明書要求進(jìn)行樣品處理、測定及質(zhì)量控制。所有試劑由上海瓦蘭生物科技有限公司(Wksu-BIO)供應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 基線資料比較 6組在人口學(xué)特征(性別、年齡、受教育程度)、RBC、Hb、肌酐、BUN、FPG、TC、TG等指標(biāo)上差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但6組在MMSE評分、PLT、β2微量球蛋白、LDL等指標(biāo)上差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，PLT在漢族人群中以AD組最低，MCI組最高；相反，在藏族人群中以MCI組最低，而AD組最高。β2微量球蛋白在漢族MCI組最低，AD組次之；而在藏族人群中，NC組最低，MCI組次之。不論藏族還是漢族，LDL均以MCI組最低，AD組最高。見表1。

表1 研究人群基線資料比較

2.2 6組血清oxLDL、MPO水平比較Kruskal-Wallis結(jié)果顯示，6組間血清oxLDL和MPO水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=39.746，P<0.001；χ2=13.039，P=0.023)。進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，與漢族NC組相比，藏族NC組oxLDL水平顯著增高(P<0.05)；與藏族AD組比較，漢族AD組、藏族NC組和藏族MCI組的oxLDL水平顯著減低(P<0.01)；在漢族中，AD組MPO水平顯著高于NC組(P<0.05)；藏族中，AD組MPO水平顯著高于MCI組(P<0.01)。見表2。

表2 6組血清oxLDL、MPO水平比較[M(P25，P75)，n=30]

2.3 高原地區(qū)漢族血清oxLDL、MPO水平與MMSE評分的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，oxLDL水平與MMSE評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.737，P<0.001)，MPO水平與MMSE評分無明顯相關(guān)性(P=0.062)。

2.4 高原地區(qū)藏族血清oxLDL、MPO水平與MMSE評分的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，oxLDL評分與MMSE評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.794，P<0.001)，MPO水平與MMSE評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.742，P<0.001)。

2.5 高原地區(qū)漢族發(fā)生MCI和AD影響因素的多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清oxLDL水平升高和高齡是高原地區(qū)漢族發(fā)生MCI的危險因素；oxLDL和LDL水平升高是漢族發(fā)生AD的危險因素。見表3。

表3 影響高原地區(qū)漢族發(fā)生MCI和AD的多因素Logistic回歸分析

2.6 高原地區(qū)藏族發(fā)生MCI和AD影響因素的多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，oxLDL、MPO水平升高，β2微球蛋白>0.18μg/mL是高原地區(qū)藏族發(fā)生MCI的危險因素；oxLDL、MPO水平升高，受教育年限<6年、FPG>7.0 mmol/L是藏族發(fā)生AD的危險因素。見表4。

表4 影響高原地區(qū)藏族發(fā)生MCI和AD的多因素Logistic回歸分析

3 討論

隨著我國步入老齡化社會，AD發(fā)病率呈明顯上升趨勢。高原具有低氧、低氣壓、強(qiáng)輻射的氣候特點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)，高海拔地區(qū)老年人AD的發(fā)病率較內(nèi)地明顯升高[6]，可能的機(jī)制與低氧和間歇性低氧環(huán)境作為重要的環(huán)境因素和許多小膠質(zhì)誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的神經(jīng)退行病變有關(guān)[7]。樂衛(wèi)東教授課題組也發(fā)現(xiàn)低氧環(huán)境可能是AD發(fā)生的一個危險因素[8]。動物實(shí)驗(yàn)證明，高壓氧治療可以降低3xTg-AD小鼠的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，并改善其行為表現(xiàn)[9]。oxLDL是由血漿中的LDL經(jīng)過氧化修飾形成的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，通過脂質(zhì)調(diào)節(jié)產(chǎn)生多種不同的寡聚物亞型，使β-淀粉樣蛋白(Aβ)生成增加[10]，加速AD的發(fā)生發(fā)展。MPO是一種過氧化物酶超家族亞鐵血紅素酶，廣泛存在于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中，具有過氧化物酶和溶酶體酶活性，能夠介導(dǎo)脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)、氧化損傷等過程[11-12]。已有研究表明，MPO可能與多種神經(jīng)退行性疾病有關(guān)。Tzikas等[13]發(fā)現(xiàn)，AD病人血漿中MPO水平明顯高于健康對照人群，提示MPO可能參與MCI和AD的發(fā)生發(fā)展。由于單一標(biāo)志物不可能真正涵蓋AD的全過程，因此聯(lián)合檢測這些生物標(biāo)志物將更有助于篩選和保護(hù)易感人群。

藏族是青藏高原地區(qū)聚居的主要民族。藏族經(jīng)過長期的自然選擇，加之特殊文化生活方式，導(dǎo)致藏族很多疾病的發(fā)病率及其機(jī)制相較于其他民族有所不同。本研究通過比較180例藏、漢2個民族的血清oxLDL和MPO的水平發(fā)現(xiàn)，oxLDL和MPO在藏、漢族認(rèn)知功能減退不同階段中有著不同的表現(xiàn)；此外，在正常老年人群中，藏族oxLDL水平高于漢族。但這些現(xiàn)象的背后尚需更大樣本的流行病學(xué)調(diào)查以及相關(guān)研究來解釋。

本研究的Spearman相關(guān)分析結(jié)果提示，oxLDL水平升高可加重藏、漢族認(rèn)知功能損害的程度；在藏族中，隨著MPO水平的增加，MMSE評分越低，但在漢族中二者無相關(guān)性。多因素Logistic回歸分析結(jié)果提示，oxLDL水平升高可能是中高海拔地區(qū)藏、漢族發(fā)生MCI和AD的主要危險因素，MPO水平升高是藏族發(fā)生MCI和AD的獨(dú)立危險因素。可見oxLDL與藏、漢2個民族MCI和AD的發(fā)生發(fā)展均具有相關(guān)性，而MPO只在藏族認(rèn)知功能衰退過程中起作用。

本研究通過對藏、漢2個民族的基線資料比較發(fā)現(xiàn)，不論藏族還是漢族，LDL水平均以MCI組最低，AD組最高，提示LDL在癡呆的不同進(jìn)程中表現(xiàn)不一，其首先在MCI階段降低，然后在AD階段升高。多因素Logistic回歸分析結(jié)果提示，LDL水平升高是漢族發(fā)生AD的主要危險因素，而這種危險性并未在藏族中體現(xiàn)。目前研究關(guān)于血漿LDL水平升高對AD患病的風(fēng)險影響結(jié)果并不一致[14-16]。本研究結(jié)果提示，LDL水平從正常人群到MCI到最后發(fā)展AD階段，出現(xiàn)了先下降后上升的趨勢，未來研究可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，以期尋找一個折點(diǎn)，用以判斷MCI向AD的轉(zhuǎn)變。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)oxLDL和MPO在藏、漢族認(rèn)知功能減退的不同階段有著不同表現(xiàn)，oxLDL與藏、漢族MCI和AD的發(fā)生發(fā)展均具有相關(guān)性，而MPO只在藏族認(rèn)知功能衰退過程中起作用。但由于本研究樣本量較小，且未對MCI和AD病人進(jìn)行隨訪，對上述某些結(jié)果無法進(jìn)行深層次的解釋，有待下一步擴(kuò)大樣本量并延長隨訪給出答案。