人顆粒蛋白A 的表達、優化及抗腫瘤活性研究

張雪健, 韓玉峰, 王繁業

(青島科技大學 化工學院, 山東 青島 266042)

1 前 言

顆粒蛋白(GRN)，也稱為上皮蛋白，通過顆粒體蛋白前體(pGRN)產生，分子量在6 kD 左右，由多種功能富含半胱氨酸的多肽家族組成。GRN 家族的成員含有12 個半胱氨酸殘基，排列在高度保守的位置，半胱氨酸殘基形成分子內二硫鍵，具有特征緊密堆積的結構[1-2]。pGRN 是一種分泌性糖蛋白，在胚胎發育、宿主防御、抗炎和創傷修復等生理病理過程中發揮重要作用[3]。大量研究證明pGRN 在腫瘤發生和轉移中具有重要作用。在許多類型的癌癥的臨床標本中已經觀察到pGRN 的過度表達，尤其是在具有高惡性腫瘤的癌癥中[4-5]。Bateman 等[6]最初從人類炎癥細胞分泌物以及大鼠骨髓中分離得到GRNA、GRNB、GRNC 和GRND。Sparro 等[7]從尿液中分離出GRNF。GRN 家族在結構上與表皮生長因子/轉化生長因子α(EGF/TGFα)家族具有相似性，GRN 在體外顯示出對哺乳動物細胞生長的抑制或促進作用，GRN 家族的不同成員可以作為細胞增殖的激動劑或拮抗劑，并在胚胎發生、細胞存活、細胞遷移、組織修復、炎癥和血管生成中起作用[8-10]。

實驗室前期從海鞘中分離出一種新型抗腫瘤多肽 CS5931[11]，因該多肽的三維結構類似于 HGRNA，推測HGRNA 可能也具有抗腫瘤活性。為了探究HGRNA 的抗癌活性，構建一種能夠在畢赤酵母細胞高效表達多肽的方法，優化發酵條件并探究GRNA 的抗腫瘤生物活性。

2 實驗材料和方法

2.1 實驗材料

質粒、菌株與癌細胞：表達載體 pGAPZαA，生物風公司；大腸桿菌(E.coli)DH-5α 由實驗室保存；畢赤酵母菌株(P. pastoris)SMD1168H，山東大學生物醫藥研究院；……