高 峰,楊艷斌,王志文,王澤志,孫玉寧,付開強,曹榮峰
(青島農業大學動物醫學院,山東青島 266109)
瘤胃酸中毒是反芻動物采食過量精料引起的消化障礙性疾病。在快速育肥和泌乳高峰期,人為添加更多的精飼料經常引起群發性亞急性瘤胃酸中毒(SARA)[1],因此生產中常補飼碳酸氫鈉等緩沖物質來預防和治療SARA。據報道,口服碳酸氫鈉能升高瘤胃pH、糾正瘤胃酸中毒,但某些揮發性脂肪酸(VFA)濃度降低不明顯[2]。丙酮酸鈉作為一種堿性緩沖劑,在體內分解出的丙酮酸能參與機體的糖代謝,也是糖類、蛋白質和脂類之間相互轉化的重要樞紐[3]。臨床上應用丙酮酸鹽防治瘤胃酸中毒的報道不多,僅丙酮酸鈣能夠很好調控本病[4]。本試驗擬通過構建山羊SARA,并口服丙酮酸鈉或碳酸氫鈉,測定血氣指標和血常規參數,瘤胃液中pH、VFA 和乳酸的變化,為臨床上防治反芻動物瘤胃酸中毒提供參考。
1.1 試劑和儀器 乳酸試劑盒購自南京建成生物工程研究所、丙酮酸鈉(純度99%)購自杭州君維化工有限公司。Epoch 微孔板分光光度計(美國BIOTEK 公司)、臺式高速離心機(德國Sigma 公司)、pH 計(上海儀電分析儀器有限公司)。
1.2 試驗設計及試驗日糧 選用2~3 歲、體重(35.0±2.0)kg、健康、體況基本一致的雌性黃淮山羊6 只。采用自身對照設計,將6 只山羊先用精粗比3:7 日糧飼喂5 d,作為空白對照組;之后均改用精粗比7:3 日糧飼喂14 d,作為瘤胃酸中毒組。山羊的日糧組成、精粗料比及營養成分見表1。再隨機分為2 組,每組3 只。丙酮酸鈉組飼喂前灌服丙酮酸鈉5 g,連續給藥2 d;碳酸氫鈉組飼喂前灌服碳酸氫鈉5 g,連續給藥2 d。飼養在同一圈舍,每日飼喂2 次,每次1 kg。
1.3 樣品的采集和處理 開始飼養時為第1 天,分別在試驗第5、19、21 天的第2 次飼喂后3 h,采頸靜脈血5 mL,經胃導管抽取瘤胃液15 mL。采集靜脈血后直接進行血氣分析和血常規試驗,瘤胃液直接測pH;剩余瘤胃液-80℃保存。

表1 試驗日糧組成及營養成分
1.4 檢測指標及方法
1.4.1 血液的血氣指標和血常規指標 采血液5 min 內,用血氣分析儀測定pH、二氧化碳分壓(pCO2)、二氧化碳總量(tCO2)、HCO3-等指標,用血細胞分析儀測血象指標。
1.4.2 瘤胃液VFA 和乳酸的測定 將瘤胃液恢復室溫,用氣相色譜儀檢測乙酸、丙酸和丁酸的濃度,試劑盒檢測乳酸濃度。
1.5 統計分析 結果用平均值± 標準差表示,用SPSS 20.0 軟件進行數據分析,組間差異性采用方差分析。P<0.05 表示差異顯著。
2.1 丙酮酸鈉和碳酸氫鈉對瘤胃酸中毒山羊瘤胃液酸度的影響 由表2 可見,與空白對照組相比,瘤胃酸中毒組的瘤胃液pH 降低(P<0.05),VFA 和乳酸濃度升高(P<0.05);丙酮酸鈉組的各指標與空白對照組無顯著差異;碳酸氫鈉組除VFA 濃度差異顯著外,其他指標差異不顯著。與瘤胃酸中毒組相比,丙酮酸鈉組各項指標均差異顯著;而碳酸氫鈉組VFA 濃度差異不顯著,其他指標差異顯著。說明瘤胃酸中毒組的瘤胃液呈明顯酸性;丙酮酸鈉和碳酸氫鈉都能明顯地將瘤胃酸中毒山羊瘤胃的pH 恢復到正常水平,而且丙酮酸鈉中和VFA的能力優于碳酸氫鈉。

表2 丙酮酸鈉和碳酸氫鈉對瘤胃酸中毒山羊瘤胃液pH 及酸性物質濃度的影響
2.2 丙酮酸鈉和碳酸氫鈉對瘤胃酸中毒山羊血液指標的影響
2.2.1 血氣指標的變化 如表3 所示,與空白對照組相比,瘤胃酸中毒組血液中HCO3-濃度、pCO2和tCO2差異顯著,而pH、Na+、K+、Cl-等其他指標差異不顯著;丙酮酸鈉和碳酸氫鈉組山羊各項血氣指標的參數差異均不顯著。與瘤胃酸中毒組相比,丙酮酸鈉和碳酸氫鈉組山羊血液中HCO3-濃度、pCO2和tCO2差異顯著。說明瘤胃酸中毒組山羊血液雖然pH 差異不顯著,但酸堿指標已經顯著呈酸性異常;而丙酮酸鈉和碳酸氫鈉都能恢復異常的血氣指標,從數值上看丙酮酸鈉略優于碳酸氫鈉。

表3 丙酮酸鈉和碳酸氫鈉對瘤胃酸中毒山羊部分血氣指標的影響
2.2.2 血常規的變化 由表4 可見,與空白對照組相比,瘤胃酸中毒組血液中紅細胞數、血紅蛋白濃度、紅細胞壓積、白細胞數量差異顯著。與瘤胃酸中毒組血常規指標相比,丙酮酸鈉組和碳酸氫鈉組山羊各項血常規參數差異顯著,后2 組間差異不顯著。
3.1 添加過量精飼料對山羊瘤胃液和血液指標的影響一般認為,過量精料在瘤胃內快速發酵生成大量VFA[5]。隨著VFA 積累瘤胃pH 下降,瘤胃內菌群失調,乳酸的產生增多、代謝利用減少,反芻動物瘤胃pH 進一步降低[6~8]。本試驗用精粗比高的日糧飼喂山羊,在14 d使瘤胃pH 處于5.45,且VFA 和乳酸累積,說明瘤胃液指標達到瘤胃酸中毒水平。本研究采用胃導管收集瘤胃液,所以瘤胃液在收集過程中會被唾液稀釋,各組山羊所測瘤胃液中的VFA 濃度偏低。

表4 山羊血常規部分參數指標的變化
血氣指標中pH、pCO2、HCO3-及tCO2表示機體酸堿平衡狀況[9]。血液中HCO3-能中和H+,當H+濃度快速升高且遠高于HCO3-時,HCO3-會迅速降低,tCO2也快速降低,使體內酸堿平衡偏酸性紊亂[10-11]。本試驗中,瘤胃酸中毒組血液中HCO3-濃度、tCO2和pCO2顯著降低,說明提高日糧的精粗比除了降低瘤胃pH,還能造成血液偏酸,成功復制了山羊瘤胃酸中毒病例。
瘤胃內H+和酸性物質濃度明顯升高,使瘤胃液滲透壓升高,使血中水分經瘤胃壁進入瘤胃內,引起機體脫水和血液濃縮[12-13]。本試驗發現,瘤胃酸中毒組紅細胞數量、血紅蛋白濃度及紅細胞壓積升高,表明機體出現脫水和血液濃縮。
3.2 日糧中添加緩沖物質對山羊瘤胃液和血液指標的影響 臨床上,經常在日糧中添加或自由舔食碳酸氫鈉來治療或預防瘤胃酸中毒[14]。本研究結果表明,碳酸氫鈉可恢復瘤胃pH 和乳酸濃度,并不能從根本上解決VFA 所引起的瘤胃酸中毒。當山羊食入丙酮酸鈉,在瘤胃分解產生的丙酮酸鹽能通過乙酰CoA 和三羧酸循環實現體內糖、脂肪和氨基酸間的互相轉化,其在三大營養物質的代謝聯系中起著重要的樞紐作用,而且其可作為生糖先質。本研究表明,丙酮酸鈉在反芻動物瘤胃內發揮抗酸作用,不僅能夠恢復瘤胃pH 還能降低瘤胃液中酸性物質濃度,對酸中毒和酮病都有一定的防治作用。研究表明,日糧中添加丙酮酸鈣雖能緩解反芻動物瘤胃酸中毒[15],但反芻動物對高鈣敏感,不宜長期過量添加,而丙酮酸鈉具有與丙酮酸鈣相似化學結構,可以在臨床上治療代謝性酸中毒[16]。本試驗結果發現,丙酮酸鈉對維持山羊瘤胃內環境比碳酸氫鈉更好,值得臨床上推廣使用。
本試驗結果顯示,飼喂精粗比為7:3 日糧14 d 會引起山羊瘤胃液和血液指標明顯酸化;日糧中添加丙酮酸鈉可使瘤胃酸中毒山羊瘤胃液VFA 和乳酸濃度降低,恢復瘤胃pH 和血液指標,穩定瘤胃內環境,并且比碳酸氫鈉能更好地恢復山羊瘤胃和血液的酸中毒指標。