不同產(chǎn)羔數(shù)西農(nóng)薩能奶山羊胎盤性狀的差異分析

李 壯，程 敏，高文昌，羅 軍

（西北農(nóng)林科技大學動物科技學院，陜西楊凌 712100）

山羊的繁殖性能與羊場經(jīng)濟效益密切相關，是現(xiàn)代山羊遺傳育種研究的重點。目前在奶山羊生產(chǎn)中，較低的母羊繁殖效率嚴重阻礙了奶山羊產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[1]。有研究表明，直接通過表型選擇高胎產(chǎn)羔數(shù)的母羊效果不理想主要是由于繁殖性狀的低遺傳力和負的母體效應[2]。而胎盤是一個多功能的器官，是母羊妊娠過程中胎兒獲取更多營養(yǎng)的基礎。胎盤子葉的形狀大小、分級程度、子葉總面積、子葉密度和子葉承載效率對山羊的繁殖性能具有一定的影響[3]。Wilson 等[4]首次提出胎盤效率這一概念，并強調子宮空間效用與營養(yǎng)供應能力對繁殖力的貢獻。胎盤表征指標影響胎兒數(shù)量及存活率，高胎盤效率母豬的初配日齡更早，且產(chǎn)仔數(shù)和活產(chǎn)仔數(shù)都較高[5-6]；限飼有利于提升山羊妊娠早期胎盤質量及血管密度，在妊娠階段改變母羊的營養(yǎng)攝入量會改善胎盤的生長發(fā)育從而促進胎兒發(fā)育[7]。本研究通過對不同產(chǎn)羔數(shù)西農(nóng)薩能奶山羊胎盤子葉性狀、胎盤子葉組織結構的比較，探討山羊胎盤子葉性狀、結構、繁殖性能指標與產(chǎn)羔數(shù)的關系，尋找與山羊繁殖性能相關的胎盤性狀，為高繁殖力奶山羊選種提供理論依據(jù)和實用方法。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選擇飼養(yǎng)于同一條件下、健康無病的西農(nóng)薩能奶山羊母羊73 只，于足月正常分娩后，采集母羊胎盤，用于性狀測定與分析。實驗羊全部來自于西北農(nóng)林科技大學薩能奶山羊原種場。

1.2 實驗試劑 生理鹽水、酒精、二甲苯、石蠟、蘇木素、中性樹脂、2.5%戊二醛固定液、0.1%PBS 液（pH=7.2）、甲醛、1.0%鋨酸、酒精和丙酮按要求在使用前配制。

1.3 相關性狀測定 母羊分娩后，記錄其窩產(chǎn)羔數(shù)并對羔羊編號，使羔羊編號與臍帶標簽一致。等待胎盤產(chǎn)出，在臍帶根部剪斷臍帶。主要測定指標及測定方法如下：

羔羊初生重：新生羔羊飼喂初乳前、全身被毛干爽后用電子天平（誤差范圍在±0.001 kg）稱重。

胎盤質量：在全部羔羊分娩完后，胎盤排出，用電子天平稱重。

子葉總數(shù)、直徑：用手術剪沿子葉邊緣剪去周圍的胎盤膜，記錄子葉總數(shù)目,同時用直尺測量子葉直徑。

其中,對胎盤質量、子葉總數(shù)、子葉直徑、初生窩重及羔羊初生重，重復測量3 次，取平均值。最后計算子葉總面積、胎盤效率（初生窩重與胎盤質量之比）、子葉密度（子葉總數(shù)與胎盤質量之比）和子葉承載效率（初生窩重與子葉總面積之比）。

1.4 胎盤子葉組織學觀察 以同一胎次不同產(chǎn)羔數(shù)的西農(nóng)薩能奶山羊作為采樣對象收集胎盤，選取與臍帶半徑距離一致、大小相近的子葉。切下子葉半徑中部不大于1 cm×1 cm 的面積作為組織樣本，0.9% 生理鹽水沖洗數(shù)遍，去表面黏膜，樣品固定于4%多聚甲醛（pH 7.4），4℃固定24 h 以上；固定好后依次進行水洗、梯度酒精（30%、50%、70%、80%、90%、100%）逐級脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片、染色，光學顯微鏡觀察單羔、雙羔及三羔的子葉組織學結構。

1.5 統(tǒng)計分析 不同產(chǎn)羔數(shù)山羊胎盤性狀、繁殖性能利用SPSS 19.0 軟件的One-way AVOVA 程序對實驗結果進行軟件分析，采用LSD 法進行多重比較，統(tǒng)計結果以平均數(shù)、標準誤和P值形式表示；利用GraphPad Prism 6 軟件進行細胞計數(shù)分析。

2 結果與分析

2.1 不同產(chǎn)羔數(shù)奶山羊的胎盤性狀 由表1 可知，73 只西農(nóng)薩能奶山羊母羊平均窩產(chǎn)羔數(shù)為1.77，羔羊平均初生重3 422.31 g，胎盤平均質量639.50 g，正常分娩羔羊生長狀況良好。

表1 73 只西農(nóng)薩能奶山羊產(chǎn)羔性狀和胎盤性狀數(shù)據(jù)統(tǒng)計

由表2 可知，隨產(chǎn)羔數(shù)增加，初生窩重極顯著增加，產(chǎn)雙羔和三羔羊平均初生重極顯著下降。

表2 西農(nóng)薩能奶山羊羔羊平均初生重比較

由表3 可知，隨產(chǎn)羔數(shù)增加，胎盤質量、子葉總面積顯著增加。雙羔組子葉平均直徑相對最低，三羔組相對最高，兩者呈顯著差異。多羔組的胎盤效率具有明顯高于單羔組的趨勢，且雙羔組胎盤效率顯著高于單羔組；多羔組中子葉承載效率顯著高于單羔組。隨著產(chǎn)羔數(shù)的增加，胎盤效率和子葉承載效率并不逐漸增加，而是趨向于某一穩(wěn)定值。

表3 不同產(chǎn)羔數(shù)西農(nóng)薩能奶山羊胎盤性狀比較

2.2 不同產(chǎn)羔數(shù)奶山羊的胎盤子葉組織結構 圖1 表明，切片染色后胎盤子葉滋養(yǎng)層細胞數(shù)量和毛細血管數(shù)隨產(chǎn)羔數(shù)增加而顯著增多。

圖1 不同產(chǎn)羔數(shù)西農(nóng)薩能奶山羊的胎盤子葉橫切組織結構

2.3 不同產(chǎn)羔數(shù)奶山羊胎盤組織滋養(yǎng)層細胞計數(shù) 圖2表明，隨著產(chǎn)羔數(shù)的增加，胎盤子葉滋養(yǎng)層細胞數(shù)量極顯著增多。

3 討 論

圖2 不同產(chǎn)羔數(shù)西農(nóng)薩能奶山羊的胎盤子葉滋養(yǎng)層細胞計數(shù)

山羊胎盤屬于子葉型胎盤，其胎盤表型性狀主要有胎盤質量、子葉數(shù)量、子葉密度和子葉面積等[8]。有研究表明，胎盤質量與營養(yǎng)傳輸能力、胎兒體重呈正相關[9-10]。但有文獻顯示，胎盤大小減少，胎盤單位質量提供的營養(yǎng)物質卻增加[11]，因而在生產(chǎn)實踐中可通過統(tǒng)計胎盤效率反映胎盤的功能。本實驗結果顯示，產(chǎn)羔數(shù)與胎盤質量呈極顯著差異；與單羔妊娠相比，多羔妊娠的胎盤效率有顯著增高的趨勢，其中雙羔妊娠胎盤效率最高。Dwyer 等[12]研究表明，與綿羊的單羔妊娠和雙羔妊娠相比，三羔妊娠的胎盤效率更高；當母豬產(chǎn)仔數(shù)較高時具有較高的胎盤效率[13-14]。和本實驗相比，這些差異可能是由物種不同或攜帶三羔的母羊數(shù)量較少造成的。另外，實驗結果表明三羔組羔羊平均初生重相對最低，對分娩后羔羊觀察發(fā)現(xiàn)三羔組羔羊生存活力（吮吸速度和站立快慢等）相對較低，可能是三羔組羔羊存在胎盤功能不足。有文獻指出，隨著產(chǎn)羔數(shù)的增加，每只羔羊胎盤子葉的相對表面積減少，表明其可能的胎盤補償機制存在問題，導致出生后體重較低的羔羊死亡率較高，出生后體重較輕羔羊的絕對生長率低于較重的羔羊[15]。從營養(yǎng)傳遞的角度看，妊娠期反芻動物的子宮胎盤組織消耗50% 以上的葡萄糖，這些葡萄糖被胎盤和胎兒所吸收，其中的一部分隨后以乳酸和果糖的形式轉移到胎兒體內(nèi)[16]。與質量較小但效率較高的胎盤相比，質量較大的胎盤消耗相對較多的營養(yǎng)，向胎兒傳遞的營養(yǎng)相對較少。

從本實驗結果可以看出，子葉總面積和子葉承載效率對于提高山羊產(chǎn)羔數(shù)是非常重要的。子葉總面積和子葉承載效率也是總毛細血管血流量作用的一種體現(xiàn)，在胎盤上存在大小數(shù)量不一的子葉，在雙羔組和三羔組子葉總數(shù)無顯著變化的情況下，子葉總面積的增加為多胎妊娠發(fā)育提供了足夠的空間及營養(yǎng)物質。子葉承載效率代表胎盤所能承載子葉大小的能力，其在不同產(chǎn)羔類型間差異性比較中，多羔妊娠與單羔妊娠相比具有顯著增高的趨勢。子葉承載效率在一定程度上能體現(xiàn)出母羊在妊娠過程中母胎物質交換的能力，為進一步探索奶山羊繁殖性能提供了有力保證。

胎盤大小和營養(yǎng)轉運能力在決定胎兒產(chǎn)前生長軌跡方面起著關鍵作用，直接影響胎兒初生重[17-19]。一方面，胎盤增大可通過增加總毛細血管的血流量使營養(yǎng)物質的輸送增加。為了維持正常的氧氣和營養(yǎng)物質的輸送，使胎兒正常生長，妊娠期間子宮胎盤血流量增加[20-21]。在子葉切片中可以發(fā)現(xiàn)胎盤毛細血管的數(shù)量隨著胎兒數(shù)量的增加而增加，說明胎盤毛細血管的血流量隨著產(chǎn)羔數(shù)的增加而增加。有相關文獻顯示血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在多羔妊娠母羊胎盤中mRNA 的表達量顯著較高[22]。本實驗中單羔組羔羊平均初生重顯著高于其他組，可能是奶山羊在相同飼養(yǎng)條件下隨胎兒數(shù)量的增加，在妊娠后期單羔胎兒相對生長速率顯著高于多羔胎兒，這與有效個體接受不同胎盤營養(yǎng)輸送面積有關。

另一方面，母胎之間的胎盤屏障是各種營養(yǎng)物質、代謝產(chǎn)物和激素等進入胎兒的必經(jīng)之路。胎盤滋養(yǎng)層細胞位于胎盤屏障的最外層，對于胚胎附植、胎兒發(fā)育和維持妊娠至關重要。實驗結果中，隨著產(chǎn)羔數(shù)增加胎盤滋養(yǎng)層細胞顯著增加，表明胎盤滋養(yǎng)層細胞對于母羊多羔妊娠的重要性。妊娠母羊在相同飼養(yǎng)條件下，多羔妊娠的母體胎兒較單羔妊娠胎兒需要更多的營養(yǎng)物質以保證生長，由于山羊間子宮容積和負的母體效應并不顯著，更可能是每個胎兒通過增加胎盤滋養(yǎng)層細胞數(shù)量及血管化程度轉化更多的養(yǎng)分以促進胎兒生長，所以隨著產(chǎn)羔數(shù)增加，胎盤大小和胎盤子葉的營養(yǎng)轉運能力發(fā)揮著重要作用。

4 結 論

胎盤質量、子葉總數(shù)和子葉總面積等山羊胎盤表型性狀可作為高繁殖力母羊的選擇指標之一，本實驗結果為進一步研究西農(nóng)薩能奶山羊繁殖性能奠定了基礎。