山茶籽與葛根素對去卵巢大鼠骨質疏松的防治作用比較

方曉燕 李海 顧建忠 邱迎均 韋福相 陳建海 黎飚

(右江民族醫學院組織胚胎學教研室,廣西 百色 533000)

老年女性卵巢退化萎縮，體積變小，卵泡數量減少，分泌雌激素逐步減少。雌激素是維持女性骨代謝平衡的重要物質，表現在維持破骨細胞與成骨細胞功能的平衡，即破骨細胞破骨功能和成骨細胞成骨功能的相對平衡，成骨與骨質流失量相當。雌激素減少，破骨細胞的溶骨量大于成骨細胞的合成骨量時，骨質減少，骨質變得疏松，骨密度下降〔1～3〕。經實驗室和臨床實踐證明雌激素防治絕經后骨質疏松(PMOP)也稱為Ⅰ型女性骨質疏松具有明顯效果，但雌激素療法毒副作用日益明顯〔4～6〕，人們把研究重點轉移到無毒副作用的植物所含雌激素，葛根素和山茶籽內含較多雌激素樣作用成分，有必要研究葛根素和山茶籽的抗骨質疏松作用，并比較它們作用。

1 材料和方法

1.1材料和儀器 選用32只5月齡雌性SPF級大鼠，葛根注射液(天臺藥廠100 mg/支，批號：0175053)，雌二醇 (100 μg/支，仙居制藥廠,批號：0188072)，骨密度用XR-600雙能X骨密儀檢測。堿性磷酸酶用建成公司的試劑盒測定。

1.2動物飼養 大鼠分籠同條件飼養,按大鼠顆粒飼料標準,自動飲水機供水。控溫(22±5)℃，控濕50%～78%，照射亮度控制在150～190 Lx。

1.3摘卵巢造模 大鼠腹腔麻醉(用10 g/L戊巴比妥鈉按3.0 mg/kg給藥)，無菌背部雙側入口，摘雙側卵巢，縫合再消毒。切下組織切片鏡檢確定為卵巢組織。術后用青霉素注射涂擦傷口3 d，預防感染。

1.4動物分組 大鼠隨機分成4組，每組8只。假手術(Sham)組：手術過程、處理方法與摘卵巢造模組相同，但暴露卵巢后不摘除卵巢，只切除卵巢外側的一點脂肪塊。術后預防感染方法與摘卵巢造模組相同。山茶籽治療(Ts)組：摘卵巢造模后，山茶籽醇提物灌胃，10 ml/kg,1次/d (5 g/g生藥)。葛根素治療(Pr)組：摘卵巢造模后，皮下注射葛根素，50 mg/kg，1次/d。Sham組、摘卵巢造模(OVX)組灌胃生理鹽水。

1.5實驗觀察指標和方法 (1)股骨頭骨組織顯微鏡下組織結構。(2)血堿性磷酸酶。(3)股骨骨密度。各組4 w、12 w麻醉采血后處死取其兩側股骨。血液經離心得血清，-18℃凍存待測堿性磷酸酶。堿性磷酸酶以比色測定，操作按說明。左股骨固定、脫水、鈣再包埋切片，染色后觀察形態結構。右股骨,剝離干凈周圍組織后置干燥箱,待干燥后，用骨密度XR-600測量儀測量，1.5 cm寬度，4.3 cm長度,速度4.0 s/m 。

1.6統計學方法 采用SPSS20.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1各組股骨切片鏡下組織結構 Sham組周圍骨皮質較厚且均勻，骨陷窩較充實，細胞飽滿整齊,小粱粗細均勻,密集；OVX組骨皮質較薄，小梁間隙明顯增寬、小梁細而斷裂，深處髓腔增大；Pr和Ts組骨皮質明顯增厚，小梁均勻密集，變粗，與OVX組比較骨質疏松明顯改善。見圖1。

圖1 各組12 w股骨切片光鏡結構組織(HE，×200)

2.2各組雙X線骨密度 OVX組的骨密度明顯低于同時期Sham組、Ts組、Pr組(P<0.01)；Sham組、Pr組和Ts組骨密度相比無顯著差異(P>0.05)。見表1。

2.3各組血堿性磷酸酶比較 OVX組4 w、12 w血堿性磷酸酶均顯著高于Sham組、Ts組和 Pr組(P<0.01)，Pr組與Sham組及Ts組堿性磷酸酶相比無明顯差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組血堿性磷酸酶含量比較

3 討 論

本研究結果說明絕經后骨質疏松的大鼠造模是成功的。摘除卵巢導致雌激素急劇下降，引起成果細胞與破骨功能平衡失調，破骨大于成骨，骨量減少，骨質疏松出現。而堿性磷酸酶是骨代謝的一個重要指標之一，骨質流失增多，堿性磷酸酶升高〔7,8〕。山茶籽、葛根素治療后，骨質疏松得到明顯好轉，骨密度也與對照組沒有明顯差異。山茶籽、葛根素都含有雌激素樣成分，也叫植物性雌激素，進入體內，在雌激素水平偏低時，發揮雌激素樣作用〔9，10〕，當雌激素水平較高時，不顯示其作用，這叫雙向調節。山茶籽、葛根素的雙向調節已被動物實驗所驗證〔11～13〕。