HPLC法測定愈創甘油醚片中有效成分

龐春潔，張 林

（馬應龍藥業集團股份有限公司，湖北 武漢 430064）

愈創甘油醚片作為一種祛痰藥類非處方藥藥品，其主要有效成分為愈創甘油醚，臨床應用已有幾十年之久，其化學成分性質較穩定[2]。國外很多國家也將該藥作為非處方產品銷售，說明該藥安全性良好。該藥物在臨床中不良反應一般較輕，不影響血壓，血壓維持平穩，患者耐受性比較理想，而且用藥方便，市場應用價值較高[2]。在愈創甘油醚片生產過程中，為了保證產品質量，就需要對愈創甘油醚片的有效成分進行測定。愈創甘油醚片目前已收載于國家藥品標準中[3]，過往一般選擇滴定與萃取相結合的方式對愈創甘油醚片的有效成分進行測定，但是該方法的重現性并不理想，而且操作比較繁瑣[4]。本研究選擇高效液相色譜法（HPLC）對愈創甘油醚片有效成分進行測定，操作比較簡單方便，結果準確，具體試驗報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

選擇安捷倫1260型液相色譜儀。北京賽多利斯儀器有限公司的1/10000電子分析天平；昆山超聲儀器有限公司的KQ-500DE型超聲波清洗器。

1.2 試藥

選擇中國藥生物制品鑒定所的愈創甘油醚對照品；乙腈、磷酸、三乙胺分別選擇HPLC級、優級純、分析純。

2 方法與結果

2.1 方法

①色譜條件：采用Agilent C18色譜柱，5 μm，150*4.6 mm；流動相選擇磷酸溶液（1%）-三乙胺溶液（1%）-乙腈，35:35:30比例；進樣量設置為10 μl，流速設置為每分鐘1.0 ml，檢測波長設置為273 nm。

②選擇波長：準確稱取愈創甘油醚對照品，并將其加入到流動相內進行溶解，稀釋成每1 ml含25 μg愈創甘油醚的溶液，以分光光度法進行測定，于273 nm波長處出現最大吸收，故將測驗檢測波長定為273 nm。

③考察線性關系：準確稱取0.0105 g愈創甘油醚對照品（經105℃干燥恒重），并將其放置在100 ml量瓶內，通過流動相將其溶解、稀釋到刻度，搖勻并準確取2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、15 μl、20 μl、30 μl，分別注入到液相色譜儀。縱坐標、橫坐標分別為峰面積、愈創甘油醚量，獲回歸方程A=0.6891C+688.02，r=0.9999，結果顯示愈創甘油醚在0.2～3.0 μg范圍內同色譜色譜面積線性關系比較理想。

④輔料干擾試驗：根據處方量準確稱取0.6 g輔料，放置在50 ml量瓶內，通過流動相將其溶解、稀釋到刻度，然后將其搖勻，進行濾過處理后準確量取2.0 ml續濾液，放置在50 ml量瓶內，通過流動相將其稀釋到刻度，進樣10 μl，光譜圖分析結果顯示輔料不存在干擾。說明該可方可準確的進行有效成分測定。

⑤穩定性測試：選擇試品溶液，放置于室溫下，分別于0、1、2、4、8小時后進行測定，結果顯示峰面積基本未變，RSD為0.22%，結果提示在8小時內樣品均較穩定。

⑥精密度試驗：選取線性關系范圍內的溶液，持續進樣5次，每次10 μl，愈創甘油醚峰面積的RSD為0.25%。結果提示該方法精密度較好，可滿足定量分析的要求。

⑦重復性試驗：稱取6份同一樣品，按上述方法對其含量進行測定，各樣品含量的RSD為0.2%，結果顯示該試驗方式重復性良好。

⑧回收率試驗：根據處方比例對樣品進行配制，分別加入標示量80%、100%、120%的愈創甘油醚，根據上述樣品含量測定方法進行處理，然后對回收率進行計算。

⑨測定樣品含量：選取10片樣品，將其研細，準確稱取相當于0.1 g的愈創甘油醚，放置在50 ml量瓶內，通過流動相將其溶解、稀釋到刻度，搖勻、濾過后準確量取2 ml續濾液，放置在50 ml量瓶內，選擇流動相將其稀釋到刻度，進樣10 μl，選擇外標法對其含量進行測定。

2.2 結果

2.2.1 回收率結果觀察

經過9次測定，加樣平均回收率為100.03%，RSD為0.39%，具體結果如表1所示。

表1 加樣回收率結果觀察

2.2.2 樣品含量測定結果觀察

采用外標法對樣品含量進行測定，2次測定結果分別為99.7%，99.2%。

3 討 論

游離愈創木酚是愈創甘油醚片常見的一種已知雜質，正常情況均能檢測出該雜質[5-6]。愈創甘油醚同分異構體則是另外一種雜質，但是選擇梯度洗脫，測定所需時間較長。本研究采用HPLC法，Agilent C18色譜柱，流動相選擇磷酸溶液-三乙胺-乙腈溶液，波長273 nm，通過等度洗脫就能有效分開同分異構體，進而明顯縮短測定時間，測定效率明顯提升。除此之外，當所選擇的色譜柱更換廠家品牌后，分離效果依然比較理想。同時在輔料干擾試驗中發現該測定方法不存在輔料干擾的情況，不影響試驗準確度。由此可以發現，該方法能對難分離物質進行有效分離，檢測準確，具有較強的可重復性，穩定性也比較理想，具有比較顯著的優越性。

本研究中結果顯示，該試驗方法加樣回收率達100.03%，RSD:0.39%，愈創甘油醚片有效成份含量測定結果顯示均達99%以上。

綜上所述，選擇HPLC法測定愈創甘油醚片的有效成分穩定可靠，準確度高，而且操作簡單方便，在生產過程中可對產品質量進行有效控制。