新疆喀什地區乳腺癌患者BRCA1、2蛋白表達的分析及臨床意義

祖麗比亞·司馬義 迪麗拜爾·吾守 艾克白爾江·艾尼瓦爾 宋全明

乳腺癌屬于我國較為常見的疾病,屬于乳腺上皮組織的惡性腫瘤,一般出現在女性群體。乳腺癌細胞通常并不具備正常細胞的特性,細胞之間的連接相比于正常細胞更為松散,因此很容易脫落,一旦出現脫落情況,癌細胞在游離形態下就會隨著淋巴液以及血液向患者全身播散,從而出現轉移,對我國女性健康有著極大的威脅。據相關報道表明,乳腺癌患者約有5%～10%是遺傳傾向性,其中45%與BRCA1 基因有關,35%與BRCA2 基因有關,并且大量研究能夠充分表明乳腺癌的發生發展與BRCA1、BRCA2 有密切聯系。除此之外,乳腺癌易感基因的確存在不同的突變,而我國新疆喀什地區的乳腺癌患病率在逐漸攀升,常年居高不下,因此深入探討、分析新疆喀什地區乳腺癌患者BRCA1、BRCA2 蛋白表達具有十分重要的臨床意義。本文就本院于2018 年1 月～2020 年2 月接診的50 例乳腺癌患者作為研究對象,以此來探討新疆喀什地區乳腺癌患者BRCA1、BRCA2 蛋白表達的臨床意義,并進一步了解患者年齡、腫塊大小、病理類型、組織學分級、淋巴結轉移情況等與 BRCA1 和BRCA2 表達的關系,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月～2020 年2 月本院接收的50 例乳腺癌患者作為觀察組,選取同期10 例乳腺良性腫瘤患者為常規組,研究已通過醫院倫理委員會的批準。常規組患者平均年齡(50.64±4.43)歲,觀察組患者平均年齡(50.82±4.51)歲。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。納入標準：①經手術治療和病理檢查(ER、PR、HER-2和Ki-67 等免疫組織化學檢測結果)證實為乳腺癌患者［1］；②均為女性患者；③均行乳腺癌根治術或改良根治術；④術前未行放化療；⑤均對此次研究知情并簽署知情同意書。

1.2 方法 所有標本均使用4%甲醛固定,并通過石蠟包埋,切片厚度為3 μm,然后通過免疫組織化學SP法對其進行檢測［2］。濃縮型鼠抗BRCA1 單克隆抗體與兔抗BRCA2 多克隆抗體均來自福州邁新公司,工作液濃度分別為1∶40、1∶50、1∶60,之后通過石蠟切片免疫組化 Envision 二步染色法進行檢測,染色步驟如下［3］：①二甲苯脫蠟10 min×2 次；②梯度酒精洗(100%、90%、80%、70%)各1 min；③蒸餾水洗片刻；④3% H2O2去除內源性酶,室溫10 min；⑤蒸餾水3 min×2 次；⑥Ki-67 切片微波抗原修復或高壓抗原修復(現場操作)；⑦蒸餾水洗3 min×2 次；⑧PBS洗3 min×2 次；⑨加鼠抗人Ki-67 孵育放于濕盒中,4 ℃過 夜；PBS 洗3 min×2 次；Ki-67 加HR-PantiMouse/Rabbit 孵 育30 min 37 ℃；PBS 洗3 min×2 次；DAB 顯色(棕褐色),鏡下控制；自來水沖洗5 min；蘇木素復染,水洗,梯度酒精(70%、80%、90%、100%)脫水；切片風干后中性樹膠封片。

1.3 觀察指標及判定標準 比較兩組患者BRCA1、BRCA2 蛋白表達情況,BRCA1 與BRCA2 的陽性表達方式均為細胞核、細胞漿內出現棕色顆粒,BRCA1 陽性細胞數＜10%為陰性(-),≥10%為陽性(+)［4］；BRCA2胞質及胞膜無黃色陽性反應物或＜5%為陰性(-),≥5%為陽性(+)［5］。分析BRCA1、BRCA2 與乳腺癌臨床病理特征的關系,病理特征包括組織學分級、患者年齡、淋巴結轉移情況、腫瘤大小、組織類型等。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者BRCA1、BRCA2 蛋白表達情況比較 觀察組患者的BRCA1 與BRCA2 陽性表達率明顯低于常規組,差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。觀察組BRCA1與BRCA2蛋白表達定位主要在細胞質和細胞核；常規組BRCA1 與BRCA2 蛋白表達定位均在細胞核。

表1 兩組患者BRCA1 與BRCA2 蛋白表達情況比較［n(%)］

2.2 BRCA1、BRCA2 與乳腺癌臨床病理特征的關系分析 組織學分級：BRCA1 組織學分級Ⅰ級、Ⅱ級(-)11 例(22%),(+)10 例(20%),Ⅲ級(-)15 例(30%),(+)14 例(28%)；BRCA2 組織學分級Ⅰ級、Ⅱ級(-)13 例(26%),(+)10 例(20%),Ⅲ級(-)14 例(28%),(+)13 例(26%)。不同組織學分級患者的BRCA1、BRCA2 陽性表達率比較,差異均無統計學意義(χ2=0.0021、0.1090,P=0.9634、0.7412＞0.05)。

患者年齡：BRCA1 患者≤35 歲(-)13 例(26%),(+)12 例(24%),＞35 歲(-)11 例(22%),(+)14 例(28%)；BRCA2患者≤35 歲(-)5 例(10%),(+)14 例(28%),＞35 歲(-)19 例(38%),(+)12 例(24%)。不同年齡患者的BRCA1 陽性表達率比較,差異無統計學意義(χ2=0.3205,P=0.5713＞0.05)；不同年齡患者的BRCA2 陽性表達率比較,差異有統計學意義(χ2=5.7730,P=0.0163＜0.05)。

淋巴結轉移情況：BRCA1 淋巴結轉移0 枚(-)10 例(20%),(+)8 例(16%),1～3 枚(-)5 例(10%),(+)4 例(8%),4 枚 以 上(-)13 例(26%),(+)10 例(20%)；BRCA2 淋 巴結轉移0 枚(-)11 例(22%),(+)7 例(14%),1～3 枚(-)6 例(12%),(+)3例(6%),4枚以上(-)12例(24%),(+)11例(22%)。不同淋巴結轉移患者的BRCA1、BRCA2 陽性表達率比較,差異均無統計學意義(χ2=0.3651、0.5935,P=0.5457、0.4411＞0.05)。

腫瘤大小：BRCA1 腫瘤≤5.0 cm(-)21 例(42%),(+)19 例(38%),＞5.0 cm(-)6 例(12%),(+)4 例(8%)；BRCA2腫瘤≤5.0 cm(-)22 例(44%),(+)18 例(36%),＞5.0 cm(-)5 例(10%),(+)5 例(10%)。不同腫瘤大小患者的BRCA1、BRCA2 陽性表達率比較,差異均無統計學意義(χ2=0.1812、0.0805,P=0.6704、0.7766＞0.05)。

組織類型：觀察組患者BRCA1、BRCA2 蛋白浸潤性導管癌(-)17 例(34%),(+)33 例(66%),常規組患者BRCA1、BRCA2 蛋白浸潤性導管癌(-)9 例(90%),(+)1 例(10%)。觀 察 組BRCA1、BRCA2 蛋 白 浸 潤 性 導管癌陽性表達率高于常規組,差異具有統計學意義(χ2=10.6425,P=0.0011＜0.05)。

3 討論

乳腺癌屬于女性常見疾病,其發病率居高不下,而且有著較高的死亡率,而新疆喀什地區的患病人數更是逐年攀升。乳腺癌患者有90%～95%為散發性乳腺癌,其發病機制目前尚未完全明確。引起乳腺癌的原因有很多,包括攜帶乳腺癌相關的突變基因、月經初潮早和絕經遲、長期服用外源性雌激素、絕經后肥胖并長期過度飲酒等。而散發性乳腺癌與氣候、地域有著更密切的關系,比如新疆喀什地區乳腺癌發病率就要明顯高于其他普通地區,有相關報道指出,新疆喀什地區乳腺癌高發的重要因素為BRCA1、BRCA2［6-8］。

在本次研究中,觀察組患者的BRCA1 與BRCA2陽性表達率明顯低于常規組,差異具有統計學意義(P＜0.05)。觀察組BRCA1 與BRCA2 蛋白表達定位主要在細胞質和細胞核；常規組BRCA1 與BRCA2 蛋白表達定位均在細胞核。在乳腺良性病變組織中,陽性定位均為細胞核,這種良惡性表達位置不一致的原因很有可能是腫瘤本身所引起的,不過由于本次研究的樣本量較小,所以可能會出現偏差,可能會導致結果存在一定的局限性。不同組織學分級、淋巴結轉移情況、腫塊大小患者的BRCA1、BRCA2 陽性表達率比較,差異均無統計學意義(P＞0.05),說明BRCA1、BRCA2 與這些臨床病理因素無相關性；不同年齡患者的BRCA2陽性表達率比較,差異有統計學意義(P＜0.05)。觀察組BRCA1、BRCA2 蛋白浸潤性導管癌陽性表達率高于常規組,差異具有統計學意義(P＜0.05)。

綜上所述,在分析新疆喀什地區乳腺癌中,BRCA1和BRCA2 的缺失有著決定性的作用,并且與組織類型及患者年齡有相關性,因此,進一步地研究BRCA1、BRCA2 有著重要的現實意義。