血清Sestrin2與胱抑素C在缺血性腦卒中早期診斷中的臨床價值

陳 躍，趙 春 ，趙 娜

(溫州市中醫(yī)院 1.檢驗科；2.神經內科，浙江 溫州 325000)

缺血性腦卒中是因血管阻塞而導致的腦組織缺血性損傷，具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率的特點[1]。缺血性腦卒中多由細胞炎癥因子、氧化應激反應等導致的冠脈粥樣硬化引起[2]。有研究[3]表明，早期強化治療可提高缺血性腦卒中患者日常生活活動能力的恢復速度，故早期診斷缺血性腦卒中顯得尤為重要。應急誘導蛋白家族-2(Sestrin2)對維持機體代謝穩(wěn)定具有重要意義。Sestrin2沉默后，缺血性腦卒中小鼠模型的腦損傷程度會加重，Sestrin2的抗氧化活性可保護神經，是腦卒中發(fā)生后潛在的內源性保護因子之一[4]，對缺血性腦卒中的早期診斷具有潛在作用。研究[5]表明，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(胱抑素C)與缺血性腦卒中存在相關性。本文檢測缺血性腦卒中患者血清中Sestrin2與胱抑素C含量，評價血清Sestrin2與胱抑素C在缺血性腦卒中早期診斷及預后評估中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月—2019年2月于溫州市中醫(yī)院神經內科住院接受診治的缺血性腦卒中患者119例，均經頭顱CT或MRI證實、符合中華醫(yī)學會神經病學分會關于缺血性腦卒中診斷標準[6]。根據《中國腦血管病指南》[7]標準，將發(fā)病時間48 h內歸為急性組，發(fā)病時間大于2周歸為慢性組。急性組57例：男31例，女26例；年齡49～94歲，平均(72.2±10.7)歲；慢性組62例：男42例，女20例；年齡42～93歲，平均(71.3±9.9)歲。

另根據影像學梗死面積分組[7]，小面積梗死組(直徑<1.5 cm)37例，中面積梗死組(直徑1.5～3 cm)55例，大面積梗死組(直徑>3 cm且累及1個以上腦葉)27例。排除其他原因引起的顱內病變(如大腦短暫性缺血及其他神經系統(tǒng)疾病等)患者，排除心血管疾病(如冠心病、心力衰竭、心梗等)、腎臟疾病(如腎小球腎炎、腎病綜合征、腎功能衰竭等)、內分泌系統(tǒng)性疾病(如垂體甲狀腺激素分泌異常等)、自身免疫性疾病及腫瘤等其他嚴重的器質性病變患者。

另選取同期頭顱CT或MRI掃描結果均未見異常，無神經系統(tǒng)疾病、心梗、腦梗等既往病史的健康志愿者為對照組共59人，男40人，女19人；年齡47～90歲，平均(71.7±10.0)歲。缺血性腦卒中急性組、慢性組和對照組的性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，缺血性腦卒中小面積梗死組、中面積梗死組和大面積梗死組的性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，所選患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 所有研究對象禁食12 h后采集空腹靜脈血約3 mL，置于分離膠促凝管內，室溫放置不超過2 h后，3 500 r/min 離心5 min，離心半徑10 cm，收集血清。血清胱抑素C含量采用羅氏Roche cobas c701全自動生化分析儀根據免疫比濁法測定，檢測試劑盒購自浙江伊利康生物技術有限公司。血清Sestrin2含量測定采用酶聯免疫吸附法(ELISA)，試劑盒購自上海江萊生物公司。

2 結果

2.1 研究對象血清Sestrin2和胱抑素C水平比較 急性組血清Sestrin2水平高于慢性組和對照組，慢性組血清Sestrin2水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。急性組血清胱抑素C水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 研究對象血清Sestrin2和胱抑素C水平比較

2.2 不同梗死面積組血清Sestrin2和胱抑素C水平比較 小面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均低于大面積梗死組和中面積梗死組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。中面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均低于大面積梗死組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同梗死面積組血清Sestrin2和胱抑素C水平比較

2.3 血清Sestrin2和胱抑素C的診斷性能 Sestrin2和胱抑素C的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.754、0.684，臨界值分別為13.74 ng/mL、0.86 mg/L，見圖1。經多因素回歸分析建立Sestrin2和胱抑素C組合的Logistic回歸模型，AUC為0.763，臨界值分別為13.56 ng/mL、0.89 mg/L，靈敏度為71.9%，特異度為71.2%，見表3。

圖1 血清Sestrin2和胱抑素C對缺血性腦卒中診斷的ROC曲線

表3 血清Sestrin2和胱抑素C對缺血性腦卒中的診斷性能

3 討論

Sestrins2屬于高度保守的蛋白質家族，可在人神經母細胞瘤細胞缺氧條件下被激活[8]，可作為抗氧化劑來清除過量的活性氧(ROS)。在缺血、缺氧條件下，Sestrins2作為P53的靶蛋白可通過調節(jié)AMPK -mTOR信號傳導通路，誘導自噬，共同起到保護細胞的作用[9]，是一種能夠保護細胞免受各種損傷的應激誘導蛋白。有研究[10]發(fā)現，腦卒中發(fā)病與氧化應激存在著密切聯系，卒中病情也與氧化應激存在一定相關性。胱抑素C可抑制半胱氨酸蛋白酶，任何含胞核的細胞均可以分泌胱抑素C。胱抑素C具有多種生物學特性，與Sestrin2蛋白在維持機體穩(wěn)態(tài)方面具有重要意義。胱抑素C蛋白的代謝過程較為簡單，主要經腎小球濾過，無腎小管的重吸收，全部由腎排出體外，經常被作為評價腎功能的指標。近年來發(fā)現胱抑素C在缺血環(huán)境下，由神經膠質細胞分泌，作為拮抗缺血、缺氧的保護因子參與動脈粥樣硬化和缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展[11]。

本研究結果顯示，急性組Sestrin2水平明顯高于慢性組和對照組，這可能是由于Sestrin2需要通過AMPK和mTOR-S6K途徑清除細胞內的氧自由基及激活自噬途徑來避免神經細胞發(fā)生凋亡[12]。也有研究[13]表明，Sestrin2是一種應激傳感器，可抵抗應激誘導的細胞凋亡，并結合Akt的促生存功能和mTOR的負調控，達到保護腦組織作用。本研究結果還顯示，急性組胱抑素C水平明顯高于對照組，可能由于大腦缺血刺激神經細胞釋放，并對半胱氨酸蛋白酶起到抑制作用，對腦組織起到保護作用。也有研究[14]認為，缺血性腦卒中血管破損及炎性反應會導致胱抑素C 水平升高。慢性組胱抑素C水平相較對照組差異不明顯，可能是由于隨著時間推移，胱抑素C自然代謝下降的原因。另外，本研究結果顯示，小面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均明顯低于大面積梗死組和中面積梗死組，中面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均明顯低于大面積梗死組。Sestrin2高表達可能由于梗死面積越大，神經損傷越多而導致氧化應激反應越大，這與張金枝等[15]研究結果相似。胱抑素C也隨著腦組織缺血損傷程度加深而分泌增加，實現保護和修復神經作用[16]。同樣有研究[17]結果顯示，梗死面積大的患者胱抑素C高表達。

同為腦卒中的神經保護因素，Sestrin2的AUC為0.754，胱抑素C的AUC為0.684。本研究為評估兩指標聯合檢測的診斷性能，運用二元Logistic回歸，利用兩指標的線性組合計算預測概率[18]，結果顯示聯合檢測的AUC高于單項檢測。

綜上所述，血清Sestrin2和胱抑素C可作為缺血性腦卒中的潛在生物標志物，可對早期診斷急性腦卒中提供有效參數，兩者聯合檢測更具有診斷價值。本研究尚有不足之處，后期需進一步擴大樣本量，為缺血性腦卒中早期診斷及病情預測提供客觀的理論依據。