頂空氣相色譜法測定左卡尼汀原料藥中三甲胺的含量

宋文姬，劉印，扈長青，王東岳，吳寧

(山東齊都藥業有限公司，山東省腦神經保護類藥物重點實驗室，山東 淄博 255400)

1 儀器與試劑

1.1 儀器 島津GC-2010Plus氣相色譜儀(島津公司)，配HS-10頂空進樣器，檢測器為氫火焰離子化檢測器(FID)，島津化學工作站，20 mL帶有密閉塞的頂空瓶；電子天平(CPA225D，賽多利斯)。所用儀器和量具均經檢定和校正。

1.2 試劑 左卡尼汀(山東齊都藥業有限公司，批號：181002、180701、180702、180703)；45%的三甲胺水溶液(分析純，Sigma-Aldrich)；甲醇(色譜級，TEDIA)；乙醇(色譜級，天津科密歐化學試劑有限公司)；丙酮(分析純，萊陽康德化工有限公司)；氫氧化鈉(分析純，天津市恒興化學試劑制造有限公司)；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Pora PLOT Amines毛細管色譜柱(25 m×0.32 mm×10 μm)；程序升溫過程：初始溫度110 ℃保持2 min，以15 ℃·min-1升到210 ℃，保持10 min；進樣口溫度：230 ℃；檢測器溫度：250 ℃；載氣為N2；分流比為5∶1；進樣體積：1 mL；柱流速：3.0 mL·min-1；氫火焰離子化檢測器(FID)；頂空進樣器條件：頂空瓶平衡溫度80 ℃，定量環溫度95 ℃，傳輸管線溫度：110 ℃，頂空瓶平衡時間30 min，進樣時間1.0 min，瓶壓150 kPa。

2.2 溶液配制 三甲胺標準儲備液：精密稱定45%的三甲胺水溶液約44.5 mg，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1 mL至20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

三甲胺標準溶液：精密量取三甲胺標準貯備液1 mL 至10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

樣品溶液：稱取左卡尼汀約200 mg，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，加水5 mL，密封，振搖，使樣品充分溶解，即得。

2.3 專屬性試驗 左卡尼汀原料藥合成工藝中使用了甲醇、乙醇和丙酮這3種溶劑。為了防止甲醇、乙醇和丙酮干擾，因此專屬性中增加這3種溶劑的定位。

各對照品儲備液：精密稱取甲醇24 mg、乙醇40 mg和丙酮40 mg，分別置20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

混合標準溶液：分別精密量取各對照品儲備液和三甲胺標準儲備液各1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

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各對照品溶液：精密量取各對照品儲備液各1 mL，分別置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

分別精密量取空白溶液、各對照品溶液、三甲胺標準溶液和混合標準溶液各5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封。在上述檢測條件下分別進樣分析，空白溶液不干擾三甲胺出峰，各對照品溶液中甲醇的保留時間為9.064 min、丙酮的保留時間為10.673、乙醇的保留時間為11.406 min，三甲胺標準溶液中三甲胺保留時間為7.857 min，混合標準溶液(見圖1)中各組分分離度良好，專屬性符合可接受標準。

2.4 定量限和檢測限測定 取三甲胺標準溶液逐步稀釋，進樣測定，按S/N≥10及S/N≥3分別計算定量限及檢測限。通過試驗確定三甲胺定量限濃度為0.083 4 μg·mL-1，檢測限濃度為0.025 0 μg·mL-1。符合可接受標準。

2.5 線性關系測定 精密量取三甲胺標準溶液2 mL到50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成1#線性溶液。分別精密量取三甲胺標準儲備液1、2、3 mL到40 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成2#～4#線性溶液。分別精密量取三甲胺標準儲備液2、3 mL到20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成5#和6#線性溶液。精密量取三甲胺標準儲備液2 mL到10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成7#線性溶液。精密量取1#～7#線性溶液各5.0 mL，置20 mL頂空瓶中密封，分別進樣。線性關系見表1。三甲胺在0.081 6～4.079 7 μg·mL-1，線性關系良好，相關系數為0.999 1，符合可接受標準。

表1 三甲胺的線性關系

2.6 回收率試驗 精密稱取供試品(批號：181002)12份，每份0.2 g，分別置12個20 mL頂空瓶中，其中3份加入5 mL水溶解，密封，作為空白供試品溶液，進樣測定。空白供試品溶液中檢出三甲胺，平均峰面積為620。其余的9份樣品分3組各3份，分別加入線性項下的3#、5#、6#線性溶液5.0 mL，密封，溶解，依次進樣測定，計算加樣回收率。結果見表2，回收率均在80%～115%之間，符合可接受標準。

表2 三甲胺加樣回收率試驗結果(n=9)

2.7 精密度測定 精密稱取供試品(批號：181002)9份，每份0.2 g，分別置9個20 mL頂空瓶中，其中3份加入5 mL水溶解，密封，作為空白供試品溶液，進樣測定。其余的6份樣品加入線性項下的5#線性溶液5.0 mL，密封，溶解，作為加標供試品溶液，依次進樣測定，計算加樣回收率。

為考察隨機變動因素對精密度的影響，另一名分析人員于不同的日期單獨建立系統，按重復性溶液配制方式重新配制中間精密度測試溶液，進行檢測。通過考察重復性試驗與中間精密度試驗共12次測定結果，三甲胺回收率的RSD應不大于10%。結果見表3，三甲胺回收率的RSD為1.7%，符合可接受標準。

表3 三甲胺精密度試驗結果(n=12)

2.8 耐用性試驗

2.8.1 改變頂空條件 分別改變頂空瓶平衡溫度±5 ℃；平衡時間±5 min，其他產地條件不變，將三甲胺標準溶液、供試品溶液和加標供試品溶液分別進樣測定，三甲胺回收率的RSD應不大于10%。見表4，三甲胺回收率的RSD為3.5%，符合規定。

表4 頂空條件耐用性試驗結果

2.8.2 改變GC測定條件 分別改變柱流速±0.1 mL·min-1；改變進樣口溫度及檢測器溫度±5 ℃，其他測定條件及頂空條件不變，將三甲胺標準溶液、供試品溶液和加標供試品溶液分別進樣測定，三甲胺回收率的RSD應不大于10%。三甲胺回收率的RSD為1.7%(見表5)，符合規定。

表5 頂空條件耐用性試驗結果

綜上，測定條件耐用性較好。

2.9 左卡尼汀中三甲胺含量測定 精密稱取供試品(批號:181002、180701、180702、180703)0.2 g，分別置20 mL頂空瓶中，分別精密量取5.0 mL水，密封溶解后進樣測定，按外標法計算供試品中三甲胺含量。結果見表6。

3 討論

左卡尼汀原料藥在《中國藥典》及國外藥典(EP10、BP2020、USP43-NF38)中均有收載，但未見對三甲胺進行控制。我們根據三甲胺特性，選擇適用于胺類化合物和氨氣分析的高保留Pora PLOT Amines氣相專用柱，通過優化升溫程序，從而獲得較好峰型。本文建立的頂空氣相色譜法準確度高，耐用性好，適合左卡尼汀原料藥中三甲胺測定。在標準中增加對三甲胺的控制，可更加有效地控制藥品質量。

表6 左卡尼汀中三甲胺含量測定結果