人乳頭狀瘤病毒L1蛋白在宮頸上皮內瘤樣病變中的表達及臨床意義

唐振利

（北京市垂楊柳醫院，北京 100021）

子宮頸癌是婦女常見惡性腫瘤，其發病率在婦科癌癥中居第三位，全球每年有50多萬新發病例和近30萬死亡病例，發展中國家占85%以上。高危型人乳頭狀瘤病毒（Human Papilloma Virus，HPV）持續感染是引起子宮頸癌前病變和子宮頸癌的最主要原因。其發生要經過低級別鱗狀上皮內病變（LSIL）、高級別鱗狀上皮內病變（HSIL）發展為浸潤癌[1]，但并不是所有的子宮頸上皮內瘤變（CIN）都會進展為癌。為防止對患者進行不必要的治療，分析其生物學行為將具有重要意義。HPV Ll蛋白是近年來研究HPV感染狀態的有效指標[2]，本研究通過檢測HPV L1蛋白在宮頸病變的表達，探討其與CIN的相關性，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年12月至2015年12月北京市垂楊柳醫院收治的宮頸檢查發現HPV病毒感染，病理組織學確診為CIN的76例患者，年齡30～67歲，平均年齡（38.46±0.81） 歲。納入標準：①有性生活史；②既往無惡性腫瘤病史、無盆腔放化療病史；③無子宮手術史；④非妊娠期婦女，有宮頸液基細胞學結果。排除標準：①有子宮內膜病變病史；②有免疫系統抑制性疾病史；③服用免疫抑制劑史。

1.2 方法

標本采集：①宮頸細胞的采集：采用ThinPrep專用取樣刷及宮頸細胞保存液，于宮頸處順時針旋轉3周，采集并保存宮頸脫落細胞標本。樣本放于-20 ℃冰箱長期保存。② 宮頸組織的采集：選取入組患者陰道鏡活檢宮頸組織，蠟塊（病理科提供），切片備用。

L1蛋白的測定：以免疫細胞化學技術、非同位素標記核酸分子雜交技術為基礎的免疫水平與核酸水平的雙重檢測。主要試劑： L1蛋白檢測的主要試劑：CytoReact賽泰-細胞/組織人乳頭瘤病毒（Broad SPectrum HPV L1）染色試劑盒。L1殼蛋白為核蛋白質，細胞核呈紅色染色為HPV L1蛋白的特異性陽性染色，其他部位的紅染均為非特異性染色。僅有一個被紅染的細胞核即可判斷為L1呈陽性。

1.3 觀察指標

①比較不同宮頸上皮內瘤樣病變HPV L1蛋白表達的陽性率。②分析HPV L1蛋白在預測不同級別宮頸上皮內瘤樣病變的敏感度、特異度、陽性預測值及陰性預測值，并與TCT進行比較。

1.4 統計學分析

采用SPSS 21.0統計軟件對數據進行分析。計數L1蛋白的表達情況，用χ2檢驗進行數據分析，明確 L1蛋白表達與宮頸癌前病變的關系，各種率的比較采用Pearsonχ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 L1蛋白與宮頸上皮內瘤樣病變的關系

HPV L1蛋白LSIL陽性率44.12%（15/34），HSIL陽性率11.90%（5/42），LSIL組HPV L1蛋白陽性率大于HSIL組，差異有統計學意義（χ2=10.04，P＜0.005），見表1、見圖1。

表1 L1蛋白與宮頸上皮內瘤樣病變的關系[例（%）]

2.2 HPV L1蛋白檢測與TCT檢測預測組織學診斷HSIL病變價值的比較

在高危型HPV陽性婦女中，宮頸組織HPV L1蛋白預測組織學診斷HSIL病變的特異度顯著低于TCT檢測（P＜0.01），但其敏感度和陰性預測值均顯著高于細胞學檢查（P＜0.01）；兩者的陽性預測值比較無統計學意義（P＞0.05），見表2。

3 討論

HPV L1蛋白是HPV的主要衣殼蛋白，約占衣殼蛋白的90%以上，L1蛋白在所有的HPV類型中均高度保守，是主要的屬特異性抗原。而L1蛋白的表達缺乏不能有效地刺激機體產生免疫反應，即發生免疫逃逸，也就是說CIN細胞會逃脫機體的細胞免疫系統的監視和清除，從而持續存在，甚至進展到癌[3]。采用免疫組化技術檢測Ll蛋白的表達，可了解HPV DNA是否被整合到宿主細胞的染色體上，以判斷HPV感染引起的良性或惡性病變。因此，HPV L1蛋白的表達情況可能提示是否存在子宮頸病變。王家建等[4]結果顯示，HPV L1蛋白結果陽性婦女的子宮頸病變可自然轉歸，而結果陰性婦女的病變進一步發展。沈小靜等[5]研究發現HPV L1蛋白的表達可能與宮頸病變程度相關，CINⅠ陽性率最高，隨著子宮頸病變程度的增加，其陽性率呈下降趨勢。田智丹等[6]發現隨著宮頸病變的加重，HPV L1蛋白的表達越來越低。本研究也在高危型HPV初篩陽性婦女中發現這種現象，經組織病理學確診的LSIL組的HPV L1蛋白陽性率高于HSIL組（P＜0.05），隨著宮頸病變的嚴重程度的進展，HPV L1蛋白的表達率逐漸下降。這均表明HPV L1蛋白是否表達與子宮頸病變嚴重程度密切相關，顯示HPV L1蛋白檢測能在一定程度上分流高危型HPV初篩陽性婦女。本研究選擇病理組織作為檢查標本，防止因細胞丟失降低陽性率，因此結果更為可靠。

目前，采用子宮頸細胞學檢查對高危型HPV初篩陽性婦女進行分流，它的特異度高，但敏感度較低，其準確率具有主觀性，與細胞病理學醫師的經驗相關，因此，需要由經驗豐富和專業素養高的細胞病理學醫師來判斷，而這樣的醫師我國目前相對缺乏。對此，很多研究者探尋其他檢查方法來分流HPV初篩陽性婦女，并發現甲基化測定、miRNA檢測基因等標志物臨床價值比較高，但這些方法復雜，限制在臨床上的應用。王富偉等[7]研究發現子宮頸脫落細胞HPV L1蛋白檢測，其陰性與CINⅠ病變進展的風險增加無關，能在一定程度上預測LSIL/CIN I的轉歸，可用于初次就診的TCT≤LSIL且HPV陽性的LSIL/CIN I患者的分流。李莉等[8]發現HPV L1在幫助了解子宮頸鱗狀上皮病變嚴重程度，預測子宮頸鱗狀上皮病變的發展趨勢、轉歸、預后及選擇臨床處理方案中有一定參考價值。為探討HPV L1蛋白是否能預測宮頸高級別病變，能否更好地對宮頸高級別病變進行分流，本研究進一步評估了HPV L1蛋白檢測分流處理高危型HPV初篩陽性子宮頸上皮內瘤樣病變婦女的臨床價值，研究結果顯示雖然HPV L1蛋白檢測在預測組織學診斷HSIL病變時的特異度低于細胞學檢查，但其敏感度和陰性預測值較高，剛好可以彌補細胞學檢查的高特異度和低敏感度。因此宮頸組織HPV L1蛋白檢測與細胞學檢查相結合能提高HPV初篩陽性婦女的分流效能，減少不必要的有創治療，尤其對于宮頸高級別病變。

綜上所述，HPV L1蛋白可能成為高危型HPV陽性患者的一種合適的分流方法，與細胞學檢查互補，有助于提高宮頸上皮內瘤樣病變的篩查率，在指導宮頸病變的轉歸中具有一定的臨床意義。