HCV-核心抗原及HCV RNA檢測(cè)在慢性丙型肝炎診斷中的價(jià)值分析

鞠偉

（遼寧省朝陽(yáng)市朝陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 朝陽(yáng) 122000）

慢性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）感染所致的傳染性疾病，可通過(guò)輸液、注射、密切接觸等途徑傳播，嚴(yán)重威脅人類健康[1-2]。慢性丙型肝炎早期發(fā)病隱匿，且缺乏特異性臨床表現(xiàn)，部分患者就診時(shí)已經(jīng)發(fā)展為肝硬化。對(duì)于HCV 感染，臨床多使用熒光定量檢測(cè)法測(cè)定HCV RNA、酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)HCV-核心抗原進(jìn)行篩查，各有優(yōu)缺點(diǎn)。本研究選取2018 年1 月至2019 年6 月就診于本院的140 例疑似慢性丙型肝炎行抗HCV抗體檢測(cè)陽(yáng)性患者為研究對(duì)象，分析HCV-核心抗原及HCV RNA 檢測(cè)在慢性丙型肝炎診斷中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月至2019年6月就診于本院的140例疑似慢性丙型肝炎行抗HCV抗體檢測(cè)陽(yáng)性患者為研究對(duì)象，其中男75 例，女65 例；年齡31～70 歲，平均年齡（51.19±6.08）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《丙型肝炎防治指南》[3]：HCV 感染＞6 個(gè)月，無(wú)肝炎史、發(fā)病日期不明，但肝臟組織病理學(xué)檢查符合慢性肝炎；入組患者均自愿加入本研究，經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并簽署知情同意書(shū)；認(rèn)知功能正常且無(wú)語(yǔ)言交流障礙；年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝細(xì)胞癌者；肝硬化者；心功能嚴(yán)重不全者；精神異常者；血液系統(tǒng)疾病者；入組前3個(gè)月內(nèi)接受相關(guān)藥物治療者；甲、乙、戊型肝炎者。

1.2 方法 抽取患者晨起空腹靜脈血3 mL，3 000 r/min離心5 min，獲取上清液放置于-20 ℃冰箱中待測(cè)。使用熒光定量檢測(cè)法測(cè)定HCV RNA，采用杭州博日公司的Line-GeneⅡ熒光定量PCR擴(kuò)增儀。HCV RNA載量正常值為＜1×103copy/mL，在150 μL 裂解液中加入50 μL 氯仿、50 μL 血清，充分混勻，13 000 r/min 離心10 min，取上清液，隨后加入等量異丙醇，離心，用乙醇（75%）清洗，沉淀中加入PCR 反應(yīng)液、Tap 酶后，擴(kuò)增和逆轉(zhuǎn)錄一起完成：42 ℃，30 min；95 ℃，3 min；95 ℃，5 s；60 ℃，30 s；40 個(gè)循環(huán)，反應(yīng)體系50 μL。若檢測(cè)結(jié)果為1×103copy/mL及以上，則結(jié)果評(píng)定為陽(yáng)性。試劑盒購(gòu)自上海科華生物有限公司。使用ELISA 測(cè)定HCV-核心抗原，使用蒸餾水稀釋濃縮洗滌液稀釋至20倍，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組各2孔，空白對(duì)照組孔直接加入200 μL樣品稀釋液，陽(yáng)性對(duì)照組和進(jìn)行對(duì)照孔加入100 μL樣品稀釋液，并相應(yīng)孔內(nèi)粉筆加入陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和待測(cè)樣品100 μL，隨后依次行溫育、洗板、加酶、溫育、洗滌、顯色、測(cè)定等操作。HCV-核心抗原超過(guò)2.0 PE IU/mL，則結(jié)果評(píng)定為陽(yáng)性，試劑盒購(gòu)自湖南景達(dá)制藥有限公司。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。以抗HCV抗體為金標(biāo)準(zhǔn)，使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定，儀器為VITROS 3600全自動(dòng)免疫分析儀，檢測(cè)結(jié)果為S/CO≥1.000表示有反應(yīng)性，提示患者存在抗HCV抗體。

1.3 觀察指標(biāo) ①以臨床癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室、病理組織學(xué)檢查和影像學(xué)檢查結(jié)果綜合分析結(jié)果作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析分析HCV RNA、HCV-核心抗原檢測(cè)慢性丙型肝炎敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。以n 表示總例數(shù)，a表示真陽(yáng)性，b 表示假陰性，c 表示假陽(yáng)性，d 表示真陰性。準(zhǔn)確度=（a+d）/n，敏感度=a/（a+b），特異度=d/（c+d），陰性預(yù)測(cè)值=d/（b+d），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=a/（a+c）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用“±s”表示，予以t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)/Fisher精確檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床診斷結(jié)果 經(jīng)臨床檢查結(jié)果綜合分析顯示，140例慢性丙型肝炎患者中陽(yáng)性131例，陰性9例。

2.2 HCV RNA、HCV-核心抗原診斷慢性丙型肝炎價(jià)值 HCV RNA診斷慢性丙型肝炎的敏感度、準(zhǔn)確度、特異度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值略高于HCV-核心抗原，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1～3。

表1 HCV-核心抗原檢測(cè)結(jié)果（n）Table 1 HCV-core antigen test results (n)

表2 HCV RNA檢測(cè)結(jié)果（n）Table 2 HCV RNA test results (n)

表3 兩種檢測(cè)方法的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值比較Table 3 Comparison of sensitivity, specificity, accuracy, negative predictive value, and positive predictive value of the two detection methods

3 討論

慢性丙型肝炎作為臨床常見(jiàn)的病毒性感染，可經(jīng)性傳播、母嬰傳播、血液傳播等多種途徑傳播，表現(xiàn)為易疲勞、食欲欠佳、腹脹等，病理改變與乙肝極為相似，以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、肝細(xì)胞壞死為主[4-6]。慢性丙型肝炎呈全球性流行，全球HCV的感染率約為3%，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬(wàn)例，隨著病情發(fā)展可造成肝臟纖維化和慢性炎癥壞死，部分患者可進(jìn)展為肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌，對(duì)患者健康及生命安全危害極大[7-9]。對(duì)于慢性丙型肝炎，臨床多經(jīng)使用抗HCV抗體進(jìn)行初篩，但其具有“窗口期”長(zhǎng)等不足，最早在感染后15 d被檢測(cè)到，最晚則出現(xiàn)在感染80 d，易出現(xiàn)漏診[10-13]。此外，各廠家試劑間的特異性、敏感性存在一定差異，直接影響檢查結(jié)果，且抗體產(chǎn)生后長(zhǎng)期存在，即使結(jié)果呈陽(yáng)性，亦無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分患者是既往感染或現(xiàn)癥感染。

本研究結(jié)果顯示，HCV RNA 診斷慢性丙型肝炎的敏感度、準(zhǔn)確度、特異度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值略高于HCV-核心抗原，提示HCV RNA 檢測(cè)慢性丙型肝炎病毒復(fù)制可靠性更高。PCR 檢測(cè)HCV 病毒核酸檢測(cè)分析是處于病毒復(fù)制期獻(xiàn)血者和HCV 抗體陽(yáng)性患者確診的最終標(biāo)準(zhǔn)，可直接反映病毒復(fù)制和傳染性，其陽(yáng)性是判斷HCV 感染的最直接證據(jù)。HCV 感染后1～2 周即可在血中檢出，“窗口期”短，陽(yáng)性出現(xiàn)早，具有特異、早期等優(yōu)點(diǎn)。但前期處理過(guò)程相對(duì)復(fù)雜且對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求較高，可能會(huì)出現(xiàn)HCV RNA 被污染或滅活不良現(xiàn)象，而發(fā)生誤診[14-17]。長(zhǎng)期觀察HCV發(fā)現(xiàn)，其感染后病毒血癥存在3 種模式，分別為一過(guò)性、持續(xù)性、間隙性等，病毒可潛伏一段時(shí)間再?gòu)?fù)制，HCV RNA 檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)陰陽(yáng)交替間隙性；HCV RNA 水平受到進(jìn)食的影響，影響診斷結(jié)果；慢性持續(xù)-感染時(shí)，HCV RNA可能存在短時(shí)間低水平復(fù)制階段，難以被檢測(cè)出，進(jìn)而出現(xiàn)誤診或漏診[18-20]。此外，HCV RNA在樣本采集、儲(chǔ)存和檢測(cè)等方面要求嚴(yán)格，對(duì)儀器、實(shí)驗(yàn)方法、設(shè)備和試劑等有較高的要求，難以在基層醫(yī)院推廣。HCV-核心抗原是能夠反映病毒復(fù)制的重要指標(biāo)，也是HCV 早期感染的標(biāo)志物，幾乎與HCV RNA 同時(shí)出現(xiàn)。HCV-核心抗原“窗口期” 短，HCV RNA 出現(xiàn)后1～2 d 外周血中便會(huì)出現(xiàn)HCV-核心抗原，其水平與外周血中HCV RNA相關(guān)性較好，可作為檢測(cè)HCV復(fù)制的標(biāo)志物。ELISA 測(cè)定HCV-核心抗原具有操作簡(jiǎn)單、無(wú)需特殊儀器、方便、無(wú)嚴(yán)格的準(zhǔn)入制度等優(yōu)點(diǎn)，且整個(gè)實(shí)驗(yàn)可在3 h內(nèi)完成，適合在基層醫(yī)院開(kāi)展。

綜上所述，HCV RNA 是判斷HCV 感染的可靠指標(biāo)，與HCV RNA相比，HCV-核心抗原檢測(cè)敏感度、特異度和準(zhǔn)確度相似，可為臨床診斷慢性丙型肝炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，且具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、無(wú)需昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，值得臨床信賴和推廣。