HCV-核心抗原及HCV RNA檢測在慢性丙型肝炎診斷中的價值分析

鞠偉

（遼寧省朝陽市朝陽市中心醫院檢驗科，遼寧 朝陽 122000）

慢性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）感染所致的傳染性疾病，可通過輸液、注射、密切接觸等途徑傳播，嚴重威脅人類健康[1-2]。慢性丙型肝炎早期發病隱匿，且缺乏特異性臨床表現，部分患者就診時已經發展為肝硬化。對于HCV 感染，臨床多使用熒光定量檢測法測定HCV RNA、酶聯免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測HCV-核心抗原進行篩查，各有優缺點。本研究選取2018 年1 月至2019 年6 月就診于本院的140 例疑似慢性丙型肝炎行抗HCV抗體檢測陽性患者為研究對象，分析HCV-核心抗原及HCV RNA 檢測在慢性丙型肝炎診斷中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月至2019年6月就診于本院的140例疑似慢性丙型肝炎行抗HCV抗體檢測陽性患者為研究對象，其中男75 例，女65 例；年齡31～70 歲，平均年齡（51.19±6.08）歲。納入標準：符合《丙型肝炎防治指南》[3]：HCV 感染＞6 個月，無肝炎史、發病日期不明，但肝臟組織病理學檢查符合慢性肝炎；入組患者均自愿加入本研究，經醫學倫理委員會批準，并簽署知情同意書；認知功能正常且無語言交流障礙；年齡≥18歲。排除標準：肝細胞癌者；肝硬化者；心功能嚴重不全者；精神異常者；血液系統疾病者；入組前3個月內接受相關藥物治療者；甲、乙、戊型肝炎者。

1.2 方法 抽取患者晨起空腹靜脈血3 mL，3 000 r/min離心5 min，獲取上清液放置于-20 ℃冰箱中待測。使用熒光定量檢測法測定HCV RNA，采用杭州博日公司的Line-GeneⅡ熒光定量PCR擴增儀。HCV RNA載量正常值為＜1×103copy/mL，在150 μL 裂解液中加入50 μL 氯仿、50 μL 血清，充分混勻，13 000 r/min 離心10 min，取上清液，隨后加入等量異丙醇，離心，用乙醇（75%）清洗，沉淀中加入PCR 反應液、Tap 酶后，擴增和逆轉錄一起完成：42 ℃，30 min；95 ℃，3 min；95 ℃，5 s；60 ℃，30 s；40 個循環，反應體系50 μL。若檢測結果為1×103copy/mL及以上，則結果評定為陽性。試劑盒購自上海科華生物有限公司。使用ELISA 測定HCV-核心抗原，使用蒸餾水稀釋濃縮洗滌液稀釋至20倍，設置陽性對照、陰性對照組和空白對照組各2孔，空白對照組孔直接加入200 μL樣品稀釋液，陽性對照組和進行對照孔加入100 μL樣品稀釋液，并相應孔內粉筆加入陰性對照組、陽性對照組和待測樣品100 μL，隨后依次行溫育、洗板、加酶、溫育、洗滌、顯色、測定等操作。HCV-核心抗原超過2.0 PE IU/mL，則結果評定為陽性，試劑盒購自湖南景達制藥有限公司。嚴格按照說明書進行操作。以抗HCV抗體為金標準，使用增強化學發光免疫法測定，儀器為VITROS 3600全自動免疫分析儀，檢測結果為S/CO≥1.000表示有反應性，提示患者存在抗HCV抗體。

1.3 觀察指標 ①以臨床癥狀、體征、實驗室、病理組織學檢查和影像學檢查結果綜合分析結果作為“金標準”，分析分析HCV RNA、HCV-核心抗原檢測慢性丙型肝炎敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值。以n 表示總例數，a表示真陽性，b 表示假陰性，c 表示假陽性，d 表示真陰性。準確度=（a+d）/n，敏感度=a/（a+b），特異度=d/（c+d），陰性預測值=d/（b+d），陽性預測值=a/（a+c）。

1.4 統計學方法 采用SPSS 21.0統計軟件進行數據分析，計量資料采用“±s”表示，予以t檢驗，計數資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗/Fisher精確檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床診斷結果 經臨床檢查結果綜合分析顯示，140例慢性丙型肝炎患者中陽性131例，陰性9例。

2.2 HCV RNA、HCV-核心抗原診斷慢性丙型肝炎價值 HCV RNA診斷慢性丙型肝炎的敏感度、準確度、特異度、陰性預測值、陽性預測值略高于HCV-核心抗原，差異無統計學意義，見表1～3。

表1 HCV-核心抗原檢測結果（n）Table 1 HCV-core antigen test results (n)

表2 HCV RNA檢測結果（n）Table 2 HCV RNA test results (n)

表3 兩種檢測方法的敏感度、特異度、準確度、陰性預測值、陽性預測值比較Table 3 Comparison of sensitivity, specificity, accuracy, negative predictive value, and positive predictive value of the two detection methods

3 討論

慢性丙型肝炎作為臨床常見的病毒性感染，可經性傳播、母嬰傳播、血液傳播等多種途徑傳播，表現為易疲勞、食欲欠佳、腹脹等，病理改變與乙肝極為相似，以淋巴細胞浸潤、肝細胞壞死為主[4-6]。慢性丙型肝炎呈全球性流行，全球HCV的感染率約為3%，每年新發丙型肝炎病例約3.5萬例，隨著病情發展可造成肝臟纖維化和慢性炎癥壞死，部分患者可進展為肝硬化，甚至肝細胞癌，對患者健康及生命安全危害極大[7-9]。對于慢性丙型肝炎，臨床多經使用抗HCV抗體進行初篩，但其具有“窗口期”長等不足，最早在感染后15 d被檢測到，最晚則出現在感染80 d，易出現漏診[10-13]。此外，各廠家試劑間的特異性、敏感性存在一定差異，直接影響檢查結果，且抗體產生后長期存在，即使結果呈陽性，亦無法準確區分患者是既往感染或現癥感染。

本研究結果顯示，HCV RNA 診斷慢性丙型肝炎的敏感度、準確度、特異度、陰性預測值、陽性預測值略高于HCV-核心抗原，提示HCV RNA 檢測慢性丙型肝炎病毒復制可靠性更高。PCR 檢測HCV 病毒核酸檢測分析是處于病毒復制期獻血者和HCV 抗體陽性患者確診的最終標準，可直接反映病毒復制和傳染性，其陽性是判斷HCV 感染的最直接證據。HCV 感染后1～2 周即可在血中檢出，“窗口期”短，陽性出現早，具有特異、早期等優點。但前期處理過程相對復雜且對檢測設備要求較高，可能會出現HCV RNA 被污染或滅活不良現象，而發生誤診[14-17]。長期觀察HCV發現，其感染后病毒血癥存在3 種模式，分別為一過性、持續性、間隙性等，病毒可潛伏一段時間再復制，HCV RNA 檢測結果會出現陰陽交替間隙性；HCV RNA 水平受到進食的影響，影響診斷結果；慢性持續-感染時，HCV RNA可能存在短時間低水平復制階段，難以被檢測出，進而出現誤診或漏診[18-20]。此外，HCV RNA在樣本采集、儲存和檢測等方面要求嚴格，對儀器、實驗方法、設備和試劑等有較高的要求，難以在基層醫院推廣。HCV-核心抗原是能夠反映病毒復制的重要指標，也是HCV 早期感染的標志物，幾乎與HCV RNA 同時出現。HCV-核心抗原“窗口期” 短，HCV RNA 出現后1～2 d 外周血中便會出現HCV-核心抗原，其水平與外周血中HCV RNA相關性較好，可作為檢測HCV復制的標志物。ELISA 測定HCV-核心抗原具有操作簡單、無需特殊儀器、方便、無嚴格的準入制度等優點，且整個實驗可在3 h內完成，適合在基層醫院開展。

綜上所述，HCV RNA 是判斷HCV 感染的可靠指標，與HCV RNA相比，HCV-核心抗原檢測敏感度、特異度和準確度相似，可為臨床診斷慢性丙型肝炎提供實驗依據，且具有操作簡單、價格低廉、無需昂貴儀器等優點，值得臨床信賴和推廣。