CXCR4、VEGF在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義

趙苑池 莫秋榮 易華宇 梁云彩 宋柳萍

摘要：目的探究非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中趨化因子受體-4（CXCR4）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)及意義。方法回顧性分析2019.03～2020.02本院70例NSCLC組織標(biāo)本及20例正常肺組織標(biāo)本，均采用免疫組化SP法檢測CXCR4、VEGF的陽性表達(dá)，觀察兩種組織、不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達(dá)情況，對比高表達(dá)率。結(jié)果NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達(dá)率分別為42.86%、67.14%，均高于正常肺組織的5.00%、25.00%（P<0.05）;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達(dá)率分別為58.33%、80.56%，均高于Ⅰ+Ⅱ期的26.47%、52.94%（P<0.05）。結(jié)論CXCR4、VEGF在NSCLC組織中的表達(dá)水平高于正常肺組織，且與NSCLC患者的臨床分期存在一定的聯(lián)系。

關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌;CXC趨化因子受體-4;血管內(nèi)皮生長因子;TNM分期

【中圖分類號】R734.2 ?【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）14--01

非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是主要的肺癌類型，多數(shù)患者就診時已處于中晚期階段，所有肺癌患者的5年生存率僅達(dá)到19.7%，侵襲和轉(zhuǎn)移是臨床治療失敗的重要因素[1]。目前認(rèn)為，趨化因子受體-4（CXCR4）參與腫瘤器官的特異性轉(zhuǎn)移，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。因此，了解NSCLC組織中上述指標(biāo)的表達(dá)，對于疾病的早期診斷、治療及預(yù)后均有著積極意義。為進(jìn)一步深入臨床對NSCLC的深入認(rèn)識，本研究對NSCLC與正常肺組織、不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達(dá)情況進(jìn)行觀察，分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析以免疫組化SP法檢測CXCR4、VEGF陽性表達(dá)的70例NSCLC組織標(biāo)本及20例正常肺組織標(biāo)本，對應(yīng)的研究對象分別為NSCLC患者及肺部良性病變者，均選自2019.03～2020.02期間。納入標(biāo)準(zhǔn)：NSCLC患者及肺部良性病變者均經(jīng)病理檢查確診;既往無惡性腫瘤病史;未接受過放療、化療;無其他肺部感染性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：患免疫系統(tǒng)疾病;行姑息性切除者;術(shù)中未行淋巴結(jié)清掃者。NSCLC患者：男46例，女24例;年齡41～75歲，平均（60.23±6.59）歲;有吸煙史32例;TNM分期：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為9、25、29、7例。肺部良性病變者：男12例，女8例;年齡41～75歲，平均（60.14±6.52）歲;有吸煙史8例。兩組性別、年齡、吸煙史對比無差異（P>0.05）。

1.2 方法

使用4%中性甲醛固定液對所有組織標(biāo)本進(jìn)行固定（6～48h），脫水包埋后石蠟切片，厚度3μm。采用免疫組化SP法進(jìn)行檢測：切片65℃烤片30min以上;環(huán)保透明劑連續(xù)脫蠟10min×4;梯度乙醇洗脫環(huán)保透明劑5min×4，將切片在流水中沖洗5min;使用已稀釋成工作液的EDTA抗原修復(fù)液在電磁爐（2100W）上進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，噴氣后1.5～2min停止加熱;待高壓鍋?zhàn)匀焕鋮s10min后，用流水沖洗高壓鍋外壁加速冷卻取出切片;切片取出后在流水下沖洗1～3min;滅活內(nèi)源性過氧化氫阻斷10min;PBS緩沖液浸洗3min×4;使用免疫組化筆標(biāo)記切片組織范圍;滴加一抗CXCR4（abcam公司，稀釋濃度為1：150）、VEGF（福州邁新試劑），室溫孵育3h;PBS緩沖液浸洗切片3min×4;滴加二抗并在室溫下孵育15min;PBS緩沖液浸洗切片3min×4次;DAB顯色3～10min;流水浸洗1～5min;蘇木素染色10～30s;分化5s;返藍(lán)5s，梯度乙醇脫水透明后封片。實(shí)驗(yàn)過程中設(shè)置陰性對照，使用PBS緩沖液代替一抗。嚴(yán)格按照試劑盒相關(guān)操作執(zhí)行。

1.3觀察指標(biāo)

于高倍視野下進(jìn)行觀察，參照Andre評分標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取5個高倍視野（×400），胞漿內(nèi)觀察到一致的淡黃色至棕褐色顆粒為陽性，計算染色腫瘤細(xì)胞百分率。根據(jù)半定量方法，結(jié)合染色陽性細(xì)胞百分率及染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評定，評定標(biāo)準(zhǔn)[2]：①陽性細(xì)胞：0分：陽性細(xì)胞占0%～5%;1分：陽性細(xì)胞占6%～30%;2分：陽性細(xì)胞占31%～60%;3分：陽性細(xì)胞占61%～100%;②染色強(qiáng)度：0分：無著色;1分：淡黃色;2分：棕色;3分：棕褐色。取上述兩項(xiàng)評分之和，總分0～3分：低表達(dá);總分4～6分：高表達(dá)。①觀察NSCLC組織及正常肺組織中CXCR4、VEGF的表達(dá)情況;②觀察不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

以SPSS21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料以%表示，采用X2檢驗(yàn);計量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05代表差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種組織中CXCR4、VEGF的表達(dá)情況

NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達(dá)率分別為42.86%、67.14%，與正常肺組織中的5.00%、25.00%對比均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），見表1。

2.2 不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達(dá)情況

Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達(dá)率分別為58.33%、80.56%，與Ⅰ+Ⅱ期的26.47%、52.94%對比均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），見表2。

3 討論

近年來，靶向藥物的應(yīng)用為惡性腫瘤患者提供一種新的治療途徑，在改善預(yù)后方面取得良好的效果，故趨化因子成為臨床研究的熱點(diǎn)。由于不同臨床分期，NSCLC的治療方案存在差異，而對于早期患者，其相對而言可采取手術(shù)治療，在促進(jìn)預(yù)后方面有一定的積極意義。鑒于此，本研究主要從NSCLC組織與正常肺組織、NSCLC組織不同TNM分期兩個方面進(jìn)行比較，為NSCLC的診斷及治療提供參考。

CXCR4是G蛋白耦聯(lián)的7次跨膜蛋白受體，可與配體基質(zhì)細(xì)胞衍生因子（SDF-1）相結(jié)合，促進(jìn)靶細(xì)胞支架的重構(gòu)，CXCR4/SDF-1反應(yīng)軸可能在胚胎發(fā)育、骨髓造血、細(xì)胞遷移、器官發(fā)育等病理生理過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[3]。高磊[4]等表示，CXCR4在NSCLC中呈高表達(dá)狀態(tài);是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同TNM分期NSCLC組織中的CXCR4陽性率均存在顯著差異，證實(shí)該蛋白與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有著密切聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織中CXCR4的高表達(dá)率為42.86%，高于正常肺組織的5.00%;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中CXCR4的高表達(dá)率為58.33%，高于Ⅰ+Ⅱ期的26.47%，與上述研究相似，說明CXCR4在NSCLC組織中呈高表達(dá)，且與腫瘤的發(fā)展存在密切聯(lián)系。VEGF是一種血管生成促進(jìn)因子，可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤血管生成，在腫瘤細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，目前以VEGF為靶點(diǎn)的抗血管生成藥貝伐珠單抗用于晚期NSCLC的治療[5]。本研究發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中VEGF的高表達(dá)率為67.14%，高于正常肺組織的25.00%;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中VEGF的高表達(dá)率為80.56%，高于Ⅰ+Ⅱ期的52.94%，提示VEGF在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有著重要意義。

綜上所述，CXCR4、VEGF在NSCLC組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有著一定的促進(jìn)作用。

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課題名稱：崇左市科技計劃項(xiàng)目合同（崇科攻2019020）