藏藥濕生扁蕾不同部位中木犀草素、當藥醇苷及當藥黃素含量測定

蔡皓 張二豪 祿亞洲 王忠斌 張露之

摘要：目的：對藏藥濕生扁蕾不同部位中木犀草素、當藥醇苷和當藥黃素的含量進行測定分析。方法：采用高效液相色譜法進行含量測定，色譜柱為Supfex RP-C18（4.6×250 mm， 5.0 μm），柱溫30 ℃，流速0.8 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長254 nm，流動相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）：在0～20 min內， A：B=40：60～63：37，線性梯度洗脫;在20～50 min內，A：B = 63：37等度洗脫。結果：在上述條件下，3種成分分離良好，木犀草素線性范圍為0.9878-2.1732 ug，回歸方程Y=4513X+0.762（r=1），當藥醇苷線性范圍為0.1062-1.6997 ug，回歸方程：Y=4887X-1.413（r=1），當藥黃素線性范圍為0.1054-1.6872 ug，回歸方程：Y=2064X+19.37（r=0.9999），三者線性關系良好。精密度、重復性和穩定性的 RSD均<3.0 %。含量測定發現葉中木犀草素含量最高，種子中含量最低;當藥醇苷含量最高的是莖，其次是根，葉、花及種子中未檢測出;當藥黃素在花中含量最高，其次是根和莖，葉及種子中未檢測出。結論：藏藥濕生扁蕾不同部位中所含有效成分木犀草素、當藥醇苷及當藥黃素含量存在差異，本文將為濕生扁蕾的深入研究提供理論依據。

【中圖分類號】R28 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）14--01

濕生扁蕾為龍膽科扁蕾屬一年生草本植物濕生扁蕾Gentianopsis paludosa （Munro） Ma.的干燥全草，夏季花盛期采收，又稱為龍膽草、沼生扁蕾，屬于傳統藏藥，其性寒、味苦，具有清熱利濕、解毒之功。臨床主要用于治療肝炎、膽囊炎、腎盂腎炎、感冒發熱、目赤腫痛、小兒腹瀉等病癥。濕生扁蕾主要生長在1180～4900 m 之間的河灘、林下、山坡草地及潮濕沼澤地，在我國華北、西北及西南均有分布，尤其是青海及甘肅的南部、云南、四川、西藏等地分布廣泛[1-4]。研究發現，濕生扁蕾中含有酮類、萜類和黃酮類等多種化合物，是其發揮生物活性的主要物質，其中木犀草素屬于黃酮類化合物，其對番瀉葉誘導的小鼠腹瀉模型具有較好止瀉作用，當藥醇苷為酮苷類化合物，具有抑制結核菌的作用，當藥黃素是黃酮苷類化合物，對鼠傷寒桿菌具有中度抑制作用[5]。關于濕生扁蕾不同部位中此三種有效成分含量的差異性未有文獻報道，本文采用高效液相色譜法同時測定濕生扁蕾葉、花、莖、根、種子5種不同部位中木犀草素、當藥醇苷和當藥黃素的含量，旨在為藏藥濕生扁蕾藥材質量控制、產品開發及其它深入研究提供理論依據。

1 實驗材料

1.1實驗儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;KQ-700DE數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;EX2202ZH/E型電子天平（奧豪斯儀器有限公司）;FW135型中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2藥品與試劑

木犀草素對照品（批號：810D022，純度≥98%），購自北京索萊寶科技有限公司;當藥醇苷對照品（批號：DSTDDOO8301，純度≥98%），當藥黃素對照品（批號：DST200817-084，純度≥98%），均購自成都樂美天醫藥科技有限公司。甲醇為色譜純;水為超純水;其余試劑（甲醇、磷酸等）均為分析純。濕生扁蕾采自西藏自治區林芝市色季拉山，經羅建教授鑒定為龍膽科植物Gentianopsis paludosa （Hook. f.） Ma。

2方法與結果

2.1色譜條件[6-7]

色譜柱為Supfex RP-C18（4.6×250 mm， 5.0 μm），柱溫30℃，流速0.8 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長254 nm，流動相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）：在0～20 min內， A：B=40：60～63：37，線性梯度洗脫;在20～50 min內，A：B = 63：37等度洗脫。在上述色譜條件下，分別精密吸取混合對照品溶液及供試品溶液進樣，得到色譜圖1。

1-當藥黃素，2-當藥醇苷，3-木犀草素

1-Swertisin， 2-Swertianolin， 3-Luteolin

2.2 混合對照品的制備

分別精密稱取對照品當藥黃素5.38 mg、當藥醇苷5.42 mg、木犀草素5.04 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得到濃度分別為當藥黃素0.211 mg/mL、當藥醇苷0.212 mg/mL、木犀草素0.198 mg/mL的混合對照品溶液，備用。

2.3供試品溶液的制備

稱取濕生扁蕾不同部位藥材細粉（過4號篩）約5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHZ）45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液，按“2.1”項下色譜方法測定。

2.4線性關系考察

分別精密吸取“2.2”項下混合對照品溶液0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 μL依次注入高效液相色譜儀，測定各對照品的峰面積。以對照品溶液濃度的（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程，見表2。

2.5 精密度考察

精密吸取“2.2”項下同一混合對照品溶液，分別重復進樣5次，測得各成分的峰面積，計算得各對照品峰面積的RSD分別為1.45% 、1.89%、1.92%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩定性考察

取“2.3”項下同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h時進樣，測定計各色譜峰峰面積計算當藥黃素、當藥醇苷和木犀草素含量，計算得各成分含量RSD 分別2.28%、1.86%、1.77%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.7 重復性考察

取濕生扁蕾根藥材細粉（過四號篩），按照“2.3”項下樣品處理方法平行制備供試品溶液5份。分別測定當藥黃素、當藥醇苷和木犀草素的含量，計算得RSD分別為 2.58%、2.16%、2.23%，表明此方法重復性良好。

2.8 濕生扁蕾藥材不同部位有效成分的含量測定

將濕生扁蕾藥材不同藥用部位粉碎過篩，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定各成分的峰面積，并分別計算各成分的含量，結果見表3。由表中可以發現，濕生扁蕾藥材不同藥用部位中所含有效成分木犀草素、當藥醇苷及當藥黃素含量存在差異，其中葉中木犀草素的含量最高，種子中含量最低，順序依次為：葉>花>莖>根>種子;當藥醇苷含量最高的是莖，其次是根，葉、花及種子中未檢測出;當藥黃素花中含量最高，其次是根和莖，葉及種子中未檢測出。

3 結論與討論

濕生扁蕾為傳統的臨床常用藏藥，使用歷史悠久，現代藥理學研究發現其還具有抗炎鎮痛，保肝利膽，抑菌，抗結腸纖維化，抗腫瘤等多方面的生物活性。木犀草素、當藥醇苷和當藥黃素是其發揮生物活性的主要物質基礎，本文對其不同部位中該3種有效成分進行了測定分析，結果發現濕生扁蕾不同藥用部位中所含3種成分含量存在差異性，主要呈現出以下特點，葉中木犀草素的含量最高，種子中最低，不同部位含量順序為：葉>花>莖>根>種子;當藥醇苷含量最高的是莖，其次是根，葉、花及種子中未檢測出;當藥黃素在其花中含量最高，其次是根和莖，葉及種子中未檢測出。因此，推斷濕生扁蕾發揮生物活性是其各不同部位綜合作用的結果。此外，含量測定所使用的檢測方法操作簡便，結果準確且重復性好。本研究為藏藥濕生扁蕾質量控制及其它深入研究提供了參考依據。

參考文獻：

[1] 寇亮， 劉越敏， 柳娜， 等. 濕生扁蕾乙醇提取物中總酮含量測定的不確定度評定[J]. 中藥新藥與臨床藥理， 2021， 32（03）： 400-405.

[2] 李玥. 濕生扁蕾的利膽有效成分研究[J]. 西北藥學雜志， 2013， 28（04）： 346-349.

[3] 劉越敏， 寇亮， 柳娜， 等. 藏藥濕生扁蕾藥理作用研究進展[J]. 甘肅中醫藥大學學報， 2020， 37（04）： 84-86.

[4] 景明， 景威棟， 張尚智， 等. 藏藥濕生扁蕾研究[M]. 甘肅： 甘肅科學技術出版社， 2017： 1-2.

[5] 盧年華， 趙慧巧， 景明， 等. HPLC與HPCE結合測定復方濕生扁蕾膠囊中6種化學成分含量[J]. 中國中醫藥信息雜志， 2016， 23（12）： 86-90.

[6] 王煥弟， 譚成玉， 趙靜玫， 等. HPLC法測定藏藥濕生扁蕾中2種有效成分的含量[J]. 藥物分析雜志， 2007， 27（3）：421-423.

[7] 趙慧巧， 陳暉， 景明， 等. RP-HPLC法同時測定濕生扁蕾中木犀草素，當藥黃素和當藥醇苷的含量[J]. 中華中醫藥學刊， 2016， 34（3）：603-605.

基金項目：西藏自治區自然科學基金項目-2020廳校聯合基金項目-青年項目（766660038）

作者簡介：蔡皓199003，男，漢，單位，西藏農牧學院，郵編860000，學歷，碩士。

通訊作者：王忠斌，E-mail： 251392216@qq.com，男，1983年，漢族，寧夏彭陽人，副教授，博士研究生，西藏農牧學院，野生動物與自然保護地、區域旅游發展。