淺談雞禽流感實驗室檢測注意事項

程連山

（西華縣動物疫病預(yù)防控制中心，河南 西華 466600）

雞禽流感HA-HI實驗為當(dāng)前世界普遍選用的實驗方法，可有效鑒定出其內(nèi)里的病毒，并判斷其是否帶有免疫抗體，由于該實驗檢測會用到多個環(huán)節(jié)，每個環(huán)節(jié)的準(zhǔn)確度都會影響實驗結(jié)果，應(yīng)制定出合適的注意事項來加強(qiáng)檢測管理。

1 雞禽流感實驗室檢測的基本特點(diǎn)

針對雞禽流感實驗室中的檢測，由于流感病毒的表面會帶有血凝素蛋白，其帶有識別意識，并能依附在紅細(xì)胞的受體結(jié)構(gòu)中，血凝素又叫HA，因而該實驗也被稱為HA實驗。當(dāng)HA蛋白中的受體與抗體在結(jié)合后會干擾到HA蛋白與紅細(xì)胞的受體結(jié)合，也就是常說的HI實驗。在進(jìn)行該項實驗的過程中技術(shù)人員需嚴(yán)格遵照雞禽流感診斷技術(shù)，并嚴(yán)格遵守相應(yīng)的行為規(guī)范，從而增強(qiáng)實驗檢測效果。

在實行HA-HI實驗期間，基于其自身特點(diǎn)，也有著不同程度的優(yōu)勢與不足，針對該實驗的不足，出現(xiàn)HI現(xiàn)象的條件較苛刻，只會發(fā)生在抗體與抗原中HA亞型一致時，各亞型之間不會出現(xiàn)明顯的交叉反應(yīng)。與此同時，采用雞的紅細(xì)胞測試水禽或哺乳動物時，除了雞的血清外都要將其血清內(nèi)的非特異凝集素清除。針對不同的禽種要選擇該種類下的紅細(xì)胞，并在每次進(jìn)行實驗的過程中都要開展抗原標(biāo)準(zhǔn)化活動。對實驗室檢測的結(jié)果需進(jìn)行正確解讀，由于人為干擾因素較多，其室內(nèi)的解讀人員需擁有良好的解讀水準(zhǔn)，在某些時段可能會影響該實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

2 雞禽流感實驗室檢測的注意事項

2.1 配制紅細(xì)胞懸液

在開展雞禽流感實驗室檢測的過程中，工作人員需仔細(xì)配制紅細(xì)胞懸液，具體來說，檢測中的紅細(xì)胞懸液要達(dá)到相應(yīng)的實驗標(biāo)準(zhǔn)，其來源需為擁有健康體魄或無禽流感的健康公雞。值得注意的是，工作人員需仔細(xì)觀察當(dāng)前所測試的病原抗體是否在該雞體內(nèi)，需規(guī)范采集雞血液，保障此操作的無菌效果，防止出現(xiàn)因殺菌而帶去的污染。若實驗室內(nèi)發(fā)生污染可能造成抗原血清出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，在采血時會出現(xiàn)凝血現(xiàn)象，嚴(yán)重影響實驗室的檢測結(jié)果。

選取血細(xì)胞的量要依照實驗的需求而定，在洗滌血細(xì)胞的過程中要選擇透明狀的清液，并在洗滌時進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕靹蚺c輕柔吹打，并及時更換洗滌吸管，特別是在提取血細(xì)胞期間盡量做到一次一根。

在配制紅細(xì)胞懸液期間進(jìn)行多次洗滌，并適時開展紅細(xì)胞積壓活動，在完成洗滌工作后紅細(xì)胞懸液需被放置到4℃的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行1h左右的觀察，只有無溶血或其他異常情況時才會進(jìn)行相應(yīng)的實驗。

在進(jìn)行HA-HI實驗前，工作人員要詳細(xì)觀察家禽中的血清，觀測其是否與紅細(xì)胞發(fā)生非特異性聚集，若存有該類特征，利用雞的紅細(xì)胞及時吸附實驗血清，排除其非特異性聚集素，主要的吸附方式為將0.5ml抗血清添入0.025ml的紅細(xì)胞中，通過輕搖靜置的方法將其混合，待30min后進(jìn)行上清的收集，并處理相應(yīng)血清，增強(qiáng)該實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)度。

2.2 詳細(xì)掌握實驗細(xì)節(jié)

在進(jìn)行HA-HI實驗期間，工作人員需精準(zhǔn)掌握其過程中的各項細(xì)節(jié)，首先，針對反應(yīng)試劑的使用與保存，若該試劑處于凍干狀態(tài)，要按照其說明書中的方法進(jìn)行溶解與保存，為防止其出現(xiàn)細(xì)菌感染或反復(fù)凍融，需盡量采用無菌操作，并將整套的試劑分成多個小包裝，利用反復(fù)凍融可有效增強(qiáng)該試劑的使用性能。其次，在進(jìn)行實驗的過程中，為方便比較結(jié)果，需同時采用兩排病毒抗原測試，在選取實驗結(jié)果時可取二者的平均值，從而使血凝終點(diǎn)滴度值更為精準(zhǔn)。比如，兩組的血凝終點(diǎn)滴度值為1∶512與1∶256，在取其二者的平均值后該數(shù)值為1∶362。最后，在使用抗原與紅細(xì)胞懸液期間要將其不斷搖勻，使實驗狀態(tài)始終保持著均質(zhì)態(tài)勢。由于紅細(xì)胞的新鮮程度與實際數(shù)量會影響紅細(xì)胞表面的受體數(shù)量，也會對該實驗的準(zhǔn)確度產(chǎn)生較大影響，因而紅細(xì)胞數(shù)量與抗體效價有關(guān)，抗原量數(shù)量會決定著與其結(jié)合的抗體量的數(shù)量，此類實驗的最終測試結(jié)果能反映出抗體效價。

2.3 精準(zhǔn)解讀實驗結(jié)果

針對紅細(xì)胞懸液的添加順序，HA實驗中的順序為兩組細(xì)胞對照、高稀釋溶液倍數(shù)、低稀釋倍數(shù)；而HI實驗的順序與HA實驗相同，在完成低稀釋倍數(shù)后再增加抗原對照。

對于實驗中的靜置時間要嚴(yán)格控制，由于室內(nèi)溫度的變化工作人員需隨時觀察，當(dāng)紅細(xì)胞完全沉淀時應(yīng)立即對其判讀，通常來講，靜置環(huán)境的溫度為4℃，若放置的溫度過高，可放回4℃的環(huán)境中。在解讀實驗結(jié)果的過程中，工作人員可適當(dāng)將板子傾斜以加強(qiáng)結(jié)果的準(zhǔn)確度，在判定HI結(jié)果時若對照后的結(jié)果相似，則斷定其為抑制狀態(tài)。□