動物源食品中獸藥殘留檢測前處理方法綜述

史秀玲

（河南省飼草飼料站，河南 鄭州 450008）

據統計，目前已有400多種獸藥用于預防和治療動物疾病以及提高飼料的利用效率，但濫用、非法使用獸藥，會導致動物源性食品中及環境中的獸藥殘留量超標，進一步導致消費者面臨致敏、致癌、致畸、致突變等風險，從而威脅公共衛生安全。因此，建立能夠快速、準確地檢測多種獸藥殘留的處理方法，對保障公共衛生安全有著重要意義。樣品前處理作為獸藥殘留檢測必不可少且至關重要的環節，其隨著各項相關技術的不斷進步也逐漸向更高效、經濟、簡便的方向發展。

1 固相萃取技術

1.1 固相萃取法（Solidphaseextraction，SPE）

固相萃取法是20世紀70年代后期興起的一種樣品前處理技術，它是利用分析物在不同介質中被吸附能力大小的差別將目標物提純，使其得到理想的分離。有回收效率高、富集倍數大、操作過程便捷等優點，成為目前殘留分析方法中使用頻率最高的樣品前處理方式。其一般操作過程是選擇填充不同類型固體吸附劑的針筒狀柱子并對吸附劑進行活化，再使提取得到的樣品溶液通過柱子，目標物和部分雜質保留在吸附劑上，用適當溶液淋洗去除雜質后加入適當的溶液將目標物洗脫下來，完成目標物的分離和富集。

Azzouz等利用SPE建立了一種靈敏度高、選擇性好、回收率高的氣相色譜-質譜聯用法，用于同時測定雞蛋和蜂蜜中的22種獸藥的殘留。樣品的前處理包括用離心和連續固相萃取進行凈化和預濃縮。該方法的檢測限為0.4～3.3ng/kg，在15～2000ng/kg的添加水平之間，蜂蜜和雞蛋樣品中的分析物回收率在87%～102%之間，相對標準偏差為2.6%～7.0%，有著較高的回收率和精密度。

1.2 分散固相萃取法（Dispersivesolidphaseextraction，DSPE）

分散固相萃取法是自1989年發展起來的一種快速樣品處理技術。為了從樣品基質中提取分析物使分析結果更加精確，如何盡量完全地去除基質中的雜質一直是亟須解決的問題。DSPE是利用固體吸附劑如無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺（PSA）等混合在樣品提取液中，以去除樣品中的極性雜質，如有機酸、極性染料和糖類等。DSPE在萃取過程中可實現不同化合物分離和凈化的過程。相比于傳統的SPE，基于DSPE的技術減少了沉淀、淋洗、洗脫等操作步驟，使前處理過程簡單快速、成本低廉。

QuEChERs法是DSPE的發展，是快速（quick），簡單（easy），經濟（cheap），高效（effective），可靠（rugged），安全（safe）的簡寫法，在21世紀初由Anastassiades等初次建立，其過程一般有三步。首先，樣品經過甲醇、乙腈、丙酮等有機溶劑提取，加入硫酸鎂、氯化鈉等進行鹽析分離有機相。其次，加入C18、PSA、GCB等吸附劑去除基質中的干擾物質，以達到凈化的目的，最后，將混合液離心得到的上清液直接進行檢測。但QuEChERs法也存在著凈化不完全，易受基質干擾的缺點。在對其進行提取液種類、吸附劑種類、pH選擇等方式的優化后，逐漸形成了一些成熟的QuEChERs試劑盒，在實際應用中對復雜基質中的目標化合物進行提取、凈化效果均較為理想。

羅泰輝等建立了畜禽肉中β-內酰胺類、磺胺類增效劑和抗寄生蟲類等63種獸藥殘留的檢測方法。用DSPE法處理畜禽肉類樣品，C18柱凈化豬肉、牛肉、雞肉三種不同基質的樣品提取液，結合HPLC-MS/MS法，結果顯示樣品前處理方法簡便，靈敏度高。LOD為0.1～3.0μg/kg，LOQ為0.5～10.0μg/kg，回收率為62.2%～112.0%，RSD為3.1%～16.3%，回收性能和穩定性良好。

1.3 基質固相分散萃取法（Matrixsolidphasedispersion，MSPD）

基質固相分散萃取是由Baker等在20世紀80年代末提出的一種樣品前處理方法。MSPD是將固相萃取吸附劑與固體、半固體或黏性狀態的樣品研磨至半干狀態，然后填料裝柱，再用不同的溶液淋洗去除雜質，再洗脫目標化合物。具有樣品和溶劑用量少、分析時間短及提取和凈化過程一步完成等優點。

尹怡等運用基質固相分散技術、固相分散技術分別和氣相色譜質譜聯用建立檢測己烯雌酚（DES）殘留量的分析方法。MSPD法中的固相分散劑是弗羅里硅土（Florisil），目標物經乙酸乙酯提取，Florisil柱子凈化，GC-MS法測定。結果表明兩種檢測方法均能滿足要求，但MSPD法萃取水產品中DES的殘留更簡便、省時、節省溶劑。

2 免疫親和色譜（Immunoaffinitychromatography，IAC）

IAC是基于抗原-抗體反應具有親合性和特異性的免疫分析技術。根據抗原抗體間有選擇性的、可逆性的相互作用的原理，將目標物質特異性地從復雜基質中分離出來，該方法使傳統復雜的前處理過程得到了極大的簡化。

Yao等制作了一種免疫親和攪拌棒，其上固定了一個具有廣泛特異性的單克隆抗體，將攪拌棒置于牛奶樣品中并渦旋震蕩處理，結合液相色譜熒光檢測法（LC-FLD）檢測了牛奶中的11種喹諾酮類藥物，該方法靈敏度高，LOD為0.05～0.1ng/g，批內變異系數為3.2%～11.9%，批間變異系數為5.2%～12.5%，具有良好的穩定性。該方法為首創，其優點為顯著簡化了樣品制備的過程，且免疫親和攪拌棒可重復利用，更加經濟環保。

3 液-液萃取（Liquid-liquidextraction，LLE）

液-液萃取又稱為溶劑萃取，其原理是利用化合物在兩種互不相溶的溶液中的溶解度不同，使目標化合物得到有效分離的傳統處理方式。隨著萃取方式的綠色化發展，傳統液-液萃取因所需溶劑較多且毒性較大，如使用含氯試劑等，已經不能滿足要求。因此，在LLE基礎之上發展起來的微萃取技術，利用離子液體、表面活性劑等作為新型的萃取溶劑，可大大降低傳統萃取劑的毒性，適應綠色萃取的發展趨勢。

Song等利用離子液體萃取，與HPLC法相結合建立了一種檢測雞蛋中四環素類藥物的方法。其研究并優化了影響萃取效率的參數，包括離子液體種類及其體積，分散劑溶劑及其體積，離心和萃取時長，提取液pH大小和鹽添加量。在最優條件下該方法對四環素藥物的富集倍數高達12～44倍，LOD在2.0～12ng/g之間，雞蛋樣品的添加回收率為58.6%～95.3%，RSD<6.2%。

4 快速溶劑萃取（Acceleratedsolventextraction，ASE）

快速溶劑萃取技術是基于1996年美國Dionex公司研制出的快速溶劑萃取儀發展起來的前處理方法。利用高壓（10.3～20.6Mpa）、高溫（50～200℃）的條件，采用不同的萃取溶劑對不同基質進行萃取。高溫高壓能夠改變萃取溶劑的特性，減少溶劑的使用量，縮短萃取時間。該技術還能實現全自動控制，具有較好的安全性，但是快速溶劑萃取儀高昂的價格限制了其應用。

于輝等通過優化ASE萃取參數，建立了檢測雞肉中5種磺胺類獸藥殘留量的ASE－HPLC法，其選擇乙腈作為萃取溶劑，在10.0MPa，120°C的條件下靜止萃取10min完成萃取，其建立的方法加標回收率在86.0%～101.7%之間，檢出限在3～9μg/kg，可滿足磺胺類藥物的檢測分析要求。

5 超臨界流體萃取（Supercriticalfluidextraction，SFE）

超臨界流體萃取技術將有機溶劑萃取與蒸餾技術結合起來，利用超臨界流體實現萃取物與基質的分離、純化。超臨界流體同時具有液體的溶解能力和氣體的滲透能力，在處理過程中通過改變溫度和壓力來控制流體的密度，進而改變溶解能力，使得待分離組分依次按照沸點高低、分子量大小和溶解能力的差別被分離攜帶出來。該方法提取效率高、無溶劑殘留，尤其適合熱敏性成分的分離純化，但是不適用于含有強極性或大分子量的物質。

Danaher等利用SFE技術檢測動物肝臟中的多種獸藥，樣品與堿性氧化鋁混合后，用CO2萃取，在100℃，300bar的條件下，成功分離出了伊維菌素、阿維霉素等多種藥物。

6 小結

本文對目前獸藥殘留檢測過程中常用的前處理方法進行了綜述，這些方法各有優缺點與適用性，需要根據被分析藥物的性質、基質的種類以及后續采用的分析儀器類型進行匹配與選擇，以便達到更高的回收效率，更好的處理效果，更準確精密的處理結果。□