不同炮制方法對(duì)川澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B的影響

蔡沓栗 林艷萍

【摘 要】 目的：通過(guò)對(duì)三種川澤瀉（厚片）含量測(cè)定結(jié)果的對(duì)比，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。方法：用HPLC法測(cè)定澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B的含量。色譜條件流動(dòng)相乙腈-水（73∶27）;流速為1 mL/min;柱溫30 ℃。結(jié)果：23-乙酰澤瀉醇B和其他色譜峰分離程度達(dá)到要求，在0.107～1.498 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，回收率105.84%，RSD為2.01%（n=6）。添加鹽水炒制的厚片其23-乙酰澤瀉醇B含量最高，為1.75 mg/g，經(jīng)麩炒的厚片次之，為1.40 mg/g。結(jié)論：HPLC法靈敏度高，重復(fù)性高，高效測(cè)定結(jié)果清晰，操作簡(jiǎn)便。炮制工藝對(duì)川澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量有影響。

【關(guān)鍵詞】? 川澤瀉;炮制;含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R283?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）21-0045-04

Effects of different processing methods on 23-O-Acetylalisol B in Rhizoma Alismatis from Zichuan

CAI Dali1 LIN Yanping2

1.Fuzhou Dermatosis Prevention Hospital， Fujian 350025， China;

2.Fujian Provincial Geriatric Hospital，F(xiàn)ujian 350009， China

Abstract：Objective To camparing the content determination in three kinds of Rhizoma Alismatis from Zichuan to evaluate their quality.Methods Establishing a HPLC method for the quantitative determination of 23-O-Acetylalisol B. Acetonitrile-water （73∶27） was used as mobile phase.The flow rare was 1.0 mL/min and column temperature was maintained at 30 ℃.Result Under this condition， the separation degree of 23-O-Acetylalisol B and other chromatographic peaks meets the requirements and peak area was good in 0.107～1.498 μg， the average was 105.84%，RSD 2.01%（n=6）. The 23-O-Acetylalisol B of the thick slices fried with salt have the highest level，is 1.75 mg/g.The second is the thick slices fired with bran，it contain 1.40 mg/g. Conclusion The method is simple，sensitive and well repeatable.Its determination result is clear. The processing technology had an effect on the content of 23-O-Acetylalisol B.

Key words：Rhizoma Alismatis; Processing Drugs;Content Determination

澤瀉是常用中藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》中列為上品[1]，具有利水滲濕，泄熱，化濁降脂的功效，用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛，高脂血癥[2]。澤瀉的炮制加工主體分為生制、麩炒、鹽制等。三者在外觀性狀上差異主要表現(xiàn)在澤瀉厚片外表皮黃白色或淡黃棕色，切面黃白色;麩炒澤瀉厚片外表皮淡黃棕色，切面黃棕色;鹽澤瀉厚片外表皮淡黃棕色，切面深黃棕色，味淡淡咸味，微甘。實(shí)驗(yàn)[3]證明，澤瀉經(jīng)加工炮制后，有利于有效成分的煎出。但藥理研究[4]表明，生品與麩炒、土制品均有一定的利尿作用，而鹽澤瀉幾乎不見(jiàn)利尿作用。2020年版《中國(guó)藥典》在之前的基礎(chǔ)上，對(duì)澤瀉的相關(guān)規(guī)定作了改變，但2010年版、2015年版和2020年版均對(duì)澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量測(cè)定作了相關(guān)規(guī)定[5-6]。因此，通過(guò)HPLC對(duì)三種不同川澤瀉（厚片）23-乙酰澤瀉醇B的含量進(jìn)行測(cè)定并分析，并對(duì)三者的性狀進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 樣品于2015年購(gòu)自于四川成都荷花池藥材市場(chǎng)，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室楊成梓教授鑒定為澤瀉科澤瀉Alisma plantago-aquatica Linn.的干燥塊莖。

樣品包括三種，A：澤瀉厚片;B：麩炒澤瀉厚片;C：鹽澤瀉厚片。見(jiàn)圖1。

1.2 儀器 LC-20AT高效液相色譜分析儀（日本島津公司）;KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;電子分析天平（奧豪斯儀器（上海）有限公司）;電子分析天平（METTLER TOLEDO，Made in Switzerland）;DFY-C-500快速開(kāi)蓋萬(wàn)能高速粉碎機(jī)（大德中藥機(jī)械有限公司）。

1.3 試劑 23-乙酰澤瀉醇B（ID：OLN7-TT2S，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度大于99.5%），乙腈（批號(hào)：20140421，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），超純水。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Platisil-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;以乙腈-水（73∶27）為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫;流速為1mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為208nm;室溫條件下，測(cè)理論板數(shù)按23-乙酰澤瀉醇B峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;柱溫30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶液的制備 用乙腈至50 mL量瓶中，定容至刻度，待用。空白HPLC圖譜見(jiàn)圖2。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取23-乙酰澤瀉醇B 1.07 mg至50 mL量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成21.4 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜見(jiàn)圖3。

2.2.3 供試品溶液的制備 取上述三種商品于40℃烘干至恒重，粉碎，過(guò)100目篩，精密稱定約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用乙腈補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取3.2.2項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)溶液5、10、20、30、50、70 μL，依次注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定峰面積。以對(duì)照品（23-乙酰澤瀉醇B）進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得對(duì)照品（23-乙酰澤瀉醇B）回歸方程。結(jié)果表明，回歸方程：Y= 20738X–3348.5（r=0.9999），在0.107～1.498 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 分別連續(xù)精密吸取同一對(duì)照品溶液5次，各20 μL，在2.1項(xiàng)色譜條件下分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定23-乙酰澤瀉醇B峰面積，計(jì)算峰面積的RSD為1.15 %，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密稱取同一樣品粉末（過(guò)100目篩）5 份，按2.2.3項(xiàng)方法處理，進(jìn)樣20 μL，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，測(cè)定23-乙酰澤瀉醇B峰面積，計(jì)算其含量，RSD 為1.57%，表明重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按上述色譜條件在0、2、8、16、24 h精密吸取20 μL分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定23-乙酰澤瀉醇B 峰面積的RSD為0.18%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知含量的澤瀉粉末（過(guò)100目篩），每份約0.1 g，分別精密加入等量的對(duì)照品，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定含量。測(cè)得23-乙酰澤瀉醇B平均回收率為105.84%，RSD 為2.01%。見(jiàn)表1。

2.8 樣品測(cè)定 分別取各樣品，按2.2.3項(xiàng)制備方法制備，進(jìn)樣20 μL，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，測(cè)得峰面積并代入回歸方程計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，見(jiàn)圖4～6。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn) 通過(guò)HPLC對(duì)川澤瀉藥材中23-乙酰澤瀉醇B進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，分離度良好，能得到理想的測(cè)定結(jié)果。其HPLC速度快，靈敏度高，重復(fù)性高，高效液相柱可反復(fù)使用，樣品使用量少，測(cè)定結(jié)果清晰，操作簡(jiǎn)便。

3.2 這三種川澤瀉（厚片）的炮制品外觀有明顯區(qū)別 澤瀉厚片，呈橢圓形或橢圓形厚片，外表皮黃白色或淡黃棕色，偶見(jiàn)細(xì)小突起的須根痕。切面黃白色，粉性有多數(shù)細(xì)孔。經(jīng)麩炒的澤瀉厚片，切面黃棕色。鹽澤瀉厚片切面較經(jīng)麩炒的厚片切面顏色更深，為深黃棕色。市場(chǎng)上買家可輕易分辨選擇購(gòu)買。

3.3? 三種不同規(guī)格澤瀉商品含量比較 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，23-乙酰澤瀉醇B與其峰面積在0.107～1.498 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，線性方程為Y=20738X–3348.5，（r=0.9999）。根據(jù)線性方程對(duì)相同重量的澤瀉厚片、麩炒的澤瀉厚片和鹽炙的澤瀉厚片進(jìn)行含量計(jì)算，結(jié)果顯示三種川澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B的含量有所差異。其中，添加鹽炙的澤瀉厚片其23-乙酰澤瀉醇B含量最高，經(jīng)麩炒的厚片次之，澤瀉厚片相對(duì)較低。

澤瀉現(xiàn)代的炮制加工品主要包括生澤瀉、清炒澤瀉、麩炒澤瀉及鹽炙澤瀉等。最常用的炮制品為麩炒澤瀉和鹽澤瀉，其中澤瀉生品以利水滲濕為主，麩炒澤瀉以滲濕和脾、降濁生清為主，鹽炙澤瀉引藥下行，增強(qiáng)滋陰瀉熱及利尿作用。研究[7]發(fā)現(xiàn)炮制澤瀉（經(jīng)麩炒的厚片，添加鹽水炒制的厚片）中23-乙酰澤瀉醇B含量明顯高于生制澤瀉（厚片）。曹柳等[8]采用HPLC研究清炒、麩炒、鹽炙對(duì)澤瀉中澤瀉醇、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B含量的影響，與生澤瀉比較，清炒品種上述4種成分含量均降低，麩炒品均增加，鹽炙品除23-乙酰澤瀉醇B外均有增加。鄭云楓等[9]發(fā)現(xiàn)，鹽炙澤瀉藥材中的三萜類主成分23-乙酰澤瀉醇B發(fā)生兩種轉(zhuǎn)變：一是氧環(huán)開(kāi)裂、重排，生成24-乙酰澤瀉醇A，再進(jìn)一步脫乙?；D(zhuǎn)化成澤瀉醇A;另一種變化是：先脫乙酰基生成澤瀉醇B，繼而氧環(huán)開(kāi)裂轉(zhuǎn)化成澤瀉醇A。可見(jiàn)澤瀉經(jīng)鹽炒、麩炒炮制后，其23-乙酰澤瀉醇B較生制品有不同程度的增加。

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（收稿日期：2021-03-15 編輯：劉 斌）