梔榆洗劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

呂鎖忠 朱衛(wèi)萍 吳安飛 曹昌娥 鄧祎 鮑云惠

【摘 要】 目的：初步建立梔榆洗劑薄層色譜（TLC）和高效液相色譜（HPLC）檢查方法。方法：用TLC法確認(rèn)方中的苦參、防風(fēng);用HPLC法測(cè)定方中梔子苷。結(jié)果：TCL法分離效果好，專屬性強(qiáng)。HPLC法測(cè)定梔子苷的線性范圍在8.185～408.4μg/mL之間，r2=0.9998。平均回收率99.6%，RSD值1.09%（n=6）。結(jié)論：該方法可考慮納入梔榆洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】 梔榆洗劑;薄層色譜法;高效液相色譜法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】R285.5?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）21-0032-04

Study on Quality Standard of Zhiyu Lotion

Lu suozhong ZHU Weiping WU Anfei CAO Chang-e DENG Yi BAO Yunhui*

Qujing Hospital of traditional Chinese Medicine，Qujing 655000，China

Abstract：Objective To establish the qualitative and quantitative methods of Zhiyu lotion.Method Identify Radix Sophorae Flavescentis and Radix Saposhnikoviae in Zhiyu lotion? by TLC;? Determine the content of Geniposide in Zhiyu lotion by HPLC.Result Under the selected TLC conditions， the spots of the same color appeared on the corresponding positions of the test sample and the control sample， and the separation effect was good and the specificity was strong. The linear range of Geniposide determined by HPLC was 8.185-408.4 μg/mL （r=0.99998）. The average recovery was 99.6%， and the relative standard deviation was 1.09%（n=6）.Conclusion The methods are simple， specific and reproducible， and can be used for the quality control of Zhiyu lotion.

Key words：Zhiyu Lotion;TLC;HTLC;Quality Standard

梔榆洗劑是根據(jù)曲靖市中醫(yī)醫(yī)院皮膚科診治尋常型銀屑病經(jīng)驗(yàn)處方開發(fā)的院內(nèi)制劑，組方中包含地榆、梔子、苦參、防風(fēng)等。作為院內(nèi)制劑研究開發(fā)過程中，對(duì)方中主要藥味展開研究，為有效控制梔榆洗劑的質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津，LC-2040C）;電子天平（島津，AP225WD，0.1mg/0.01mg）;超聲波清洗器（南京壘君達(dá)，UP250YHE）

1.2 試劑 試藥苦參對(duì)照藥材（121019-201407）、防風(fēng)對(duì)照藥材（120947-201409）、梔子苷（110749-201919，供含量測(cè)定用，含量97.1%）均來源于中國食品藥品檢定研究院;甲醇[霍尼韋爾（上海）有限公司，Lot：T8LG1H]、乙腈（霍尼韋爾（上海）有限公司，Lot：T84A1H）均為色譜純;水為純化水。

1.3 供試品 梔榆洗劑3批樣品（配制批次分別為S2020002、S2020003、S2020004）及陰性樣品由曲靖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦參TLC鑒別方法

2.1.1 供試品溶液 制備取梔榆洗劑3批樣品各30 mL，分別濃縮至流浸膏狀，加1 mL濃氨溶液，30 mL三氯甲烷攪拌，30 min超聲提取后過濾，取三氯甲烷液蒸干為殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，制備為供試品溶液。

2.1.2 陰性樣品溶液 制備按處方比例取除苦參的梔榆洗劑所有中藥飲片粉碎混合均勻，取10 g，加2 mL濃氨溶液，60 mL三氯甲烷攪拌，30 min超聲提取后過濾，取三氯甲烷液，蒸干為殘?jiān)?.5 mL三氯甲烷使溶解為陰性對(duì)照品供試溶液。

2.1.3 對(duì)照藥材溶液 制備取1 g苦參標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照藥材，加3 mL濃氨溶液，80 mL三氯甲烷，30min超聲處理后過濾，濾液蒸成殘?jiān)? mL三氯甲烷溶解為對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 鑒別方法 吸取各5～10 μL供試品溶液和陰性樣品溶液、1～3 μL對(duì)照藥材溶液，點(diǎn)于同一硅膠G板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇-濃氨溶液（5∶0.6∶0.3）放置10 ℃以下的下層溶液，展開，噴以碘化鉍鉀溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品溶液無干擾，如圖1所示。

1 2 3 4 5

2.2 防風(fēng)TLC鑒別方法

2.2.1 供試品溶液 制備取梔榆洗劑三批樣品各30 mL，分別蒸干，殘?jiān)?0 mL甲醇，30 min超聲提取后過濾，濾液蒸干成殘?jiān)? mL乙醇使溶解為供試品溶液。

2.2.2 陰性樣品溶液 制備按處方比例取除防風(fēng)的梔榆洗劑所有飲片粉碎混合均勻，取5 g粉末，20 mL加甲醇，30 min超聲提取后過濾，濾液蒸干為殘?jiān)? mL乙醇使溶解為陰性對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 對(duì)照藥材溶液 制備取2 g防風(fēng)對(duì)照藥材粉末，加40 mL甲醇，30 min超聲提取后過濾，濾液蒸干為殘?jiān)? mL乙醇使溶解為防風(fēng)對(duì)照藥材溶液。

2.2.4 鑒別方法 吸取各5～10 μL供試品溶液和陰性對(duì)照溶液、2～5 μL對(duì)照藥材溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇（4∶1）溶液，按《中國藥典》薄層色譜法試驗(yàn)，噴以10%硫酸乙醇溶液，于365 nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品溶液無干擾，如圖2所示。

2.3 含量測(cè)定方法

2.3.1 色譜條件 色譜柱：GL Science C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫：40 ℃，流動(dòng)相：0.1%磷酸-乙腈（90∶10），流速：1.0 mL/min;檢測(cè)波長：238 nm，理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;進(jìn)樣量10 μL。

2.3.2 溶液制備

2.3.2.1 供試品溶液的制備 取梔榆洗劑供試品，混勻，精密量取10 mL定量至50 mL容量瓶中，混勻過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取梔子苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品8.43 mg，精密稱定，加甲醇溶液定量至10 mL量瓶中，得0.8186 mg/mL的梔子苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。

2.3.2.3 陰性樣品溶液的制備 按梔榆洗劑處方比例，稱取除梔子外其它全部飲片，照梔榆洗劑供試品生產(chǎn)工藝條件，制備缺梔子陰性對(duì)照樣品，再照供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照溶液。

2.3.3 線性關(guān)系 考察取梔子苷對(duì)照品溶液適量，精密量取，分別制成含梔子苷8.185、 16.33、 40.84、 81.67、408.4 μg/mL 的系列對(duì)照品溶液，照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件實(shí)驗(yàn)，橫坐標(biāo)（X）為對(duì)照品濃度，縱坐標(biāo)（Y）為峰面積，結(jié)果：在8.185～408.4 μg/mL范圍內(nèi)梔子苷濃度具有良好線性關(guān)系r2=0.9997。

2.3.4 精密度考察 取同一梔子苷對(duì)照品溶液（含梔子苷40.92 μg/mL），精密量取，在“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值。RSD為0.6%，表明儀器的精密度良好。結(jié)果見表1。

2.3.5 重復(fù)性考察 取梔榆洗劑（批號(hào)S2020004）6份，按“2.3.2.1”供試品制備方法處理，記錄峰面積，計(jì)算梔子苷含量，結(jié)果每1 mL樣品中的平均梔子苷含量為0.08229 mg，RSD為1.8%，表明本方法的重復(fù)性良好。結(jié)果見表2。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 取梔榆洗劑（批號(hào)S2019004）供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積。結(jié)果梔子苷的RSD為0.26%。表明在24 h內(nèi)供試品溶液質(zhì)量穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批梔榆洗劑（批號(hào)S2020004）5.00 mL共6份，精密量取，再分別精密加入濃度為0.0409 mg/mL的對(duì)照品溶液5.0 mL，按“2.3.2.1”項(xiàng)下的方法處理，制備供試液，分別測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表4。

2.3.8 專屬性試驗(yàn) 取陰性對(duì)照樣品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖如圖3所示。結(jié)果色譜圖中在梔子苷相應(yīng)出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

2.3.9 樣品測(cè)定 取不同批次的供試品3批，精密量取，分別制備成供試品溶液，制備方法見“2.3.2.1 ”項(xiàng)下，測(cè)定色譜條件見“2.3.1”項(xiàng)下。按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以外標(biāo)法計(jì)算梔子苷含量。通過試驗(yàn)確定3批梔榆洗劑中每1mL梔榆洗劑中含梔子以梔子苷計(jì)（C17H24O10）計(jì)，結(jié)果見表5。

結(jié)果分析：通過對(duì)梔榆洗劑中梔子苷的含量測(cè)定的方法學(xué)研究，可以看出采用的高效液相色譜法具有強(qiáng)專屬性、高靈敏度、重現(xiàn)性好、高準(zhǔn)確度的特點(diǎn)。

3 討論與結(jié)論

梔榆洗劑是由11味中藥飲片以水為溶媒經(jīng)滲漉、煎煮提取制成的醫(yī)院制劑，成份復(fù)雜。經(jīng)系統(tǒng)性預(yù)試驗(yàn)考察表明該制劑主要含有生物堿、黃酮類成分。

定性試驗(yàn)結(jié)果僅有苦參和防風(fēng)成分供試品與對(duì)照品在相應(yīng)位置上主斑點(diǎn)顯色清晰、陰性對(duì)照無干擾的。在此基礎(chǔ)上對(duì)有苦參、防風(fēng)薄層色譜方法的展開系統(tǒng)、供試品提取和前處理方法、點(diǎn)樣方式和點(diǎn)樣量進(jìn)行篩選優(yōu)化，再對(duì)方法的耐用性進(jìn)行考察。如苦參，參考文獻(xiàn)[1-2]分別用乙酸乙酯、甲醇、鹽酸加乙酸乙酯、濃氨加三氯甲烷共4種方法進(jìn)行前處理提取，結(jié)果以三氯甲烷提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果最理想。防風(fēng)參考文獻(xiàn)[3-4]分別用丙酮、乙酸乙酯、水飽和正丁醇、甲醇、乙醇對(duì)供試品蒸干殘?jiān)M(jìn)行提取，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以甲醇提取效果最好。最后根據(jù)實(shí)驗(yàn)綜合結(jié)果確認(rèn)了本次的實(shí)驗(yàn)方法。

定量檢測(cè)選擇梔子苷作為含量控制指標(biāo)。梔榆洗劑中君藥經(jīng)查詢文獻(xiàn)沒有特征性成分，梔子做為處方中的臣藥，其有效成份梔子苷[5]易溶于水，與梔榆洗劑以水為溶媒提取的工藝相適應(yīng)，故以梔子苷為控制梔榆洗劑的含量指標(biāo)進(jìn)行考察。通過方法學(xué)研究，結(jié)果表明，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.1%磷酸-乙腈（90∶10）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為238 nm。結(jié)果梔子苷在濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均加樣回收試驗(yàn)結(jié)果符合要求。

梔榆洗劑的薄層色譜鑒別方法和含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、簡單易行、節(jié)約時(shí)間和成本，可用于梔榆洗劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2021-03-15 編輯：劉斌）