60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑高效液相色譜分析方法研究

韋沙迪，張小敏，夏姍姍，莫俊銳，石偉賢，王愛臣

(惠州市銀農科技股份有限公司，惠州 516257)

60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑是一種混配殺菌劑，其有效成分為氟嗎啉{flumorph，(E,Z)-4-[3-(4-氟苯基)-3-(3, 4-二甲氧基苯基)丙烯酰]嗎啉}和唑嘧菌胺{ametoctradin，5-乙基-6-辛基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺}，其結構式如下：

惠州市銀農科技股份有限公司開展了氟嗎啉和唑嘧菌胺復配干懸浮劑用于葡萄霜霉病和馬鈴薯晚疫病的防治研究。目前有關氟嗎啉和唑嘧菌胺干懸浮劑的分析方法未見報道。本文采用高效液相色譜法測定了60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑中的有效成分含量。該方法具有操作簡便、快速、分離效果好等特點，準確度和精密度均能達到定量分析的要求，可作為企業生產過程中該產品質量控制方法。

1 試驗部分

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀配2489型紫外檢測器及 Empower 3色譜工作站和自動進樣器；JP040S超聲波清洗機(深圳潔盟超聲波設備有限公司)；XSE205DU型分析天平(0.01 mg，德國梅特勒)；ZORBAX Extend-C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm，不銹鋼柱)。

1.2 試劑

氟嗎啉標樣(質量分數≥99.2%，國家農藥質量監督檢驗中心)；唑嘧菌胺標樣(質量分數≥99.7%，德國 Dr.Ehrenstorfer)；甲醇(色譜純，Merck)；水：新蒸二次蒸餾水。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：對甲醇(流動相A)與水(流動相B)比例進行梯度設定[1-2]，見表 1。流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：236 nm；進樣體積：5 μL。在上述色譜條件下，氟嗎啉E-體、氟嗎啉Z-體和唑嘧菌胺的保留時間分別約為7.7、8.9、14.5 min。

表1 流動相A和B的比例

上述操作參數是典型的，可根據不同儀器特點，對給定的操作參數作適當調整，以期獲得最佳效果。典型的氟嗎啉標樣、唑嘧菌胺標樣和60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑試樣高效液相色譜圖分別見圖 1、圖2。

圖1 氟嗎啉和唑嘧菌胺標樣高效液相色譜圖

圖2 60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑試樣高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制

分別稱取0.05 g氟嗎啉標樣和0.05 g唑嘧菌胺標樣(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲5 min使溶解，冷卻至室溫，再用甲醇定容，以0.45 μm的濾頭過濾備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取含氟嗎啉0.05 g的試樣(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲5 min使其溶解，冷卻至室溫，再用甲醇定容，以0.45 μm濾頭過濾備用。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩定后連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針的相對響應值變化小于1.5%，即可按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定，記錄峰面積。

1.4.4 計算

將測得的2針試樣溶液及試樣前后2針標樣溶液中的氟嗎啉(或唑嘧菌胺)峰面積分別進行平均，試樣中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)的質量分數X(%)按下式計算：

式中：A1為2針標樣溶液中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)峰面積的平均值；A2為2針試樣溶液中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)峰面積的平均值；m1為氟嗎啉(或唑嘧菌胺)標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；P為標樣中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)的質量分數，%。

1.4.5 允許差

2次平行測定結果之差，氟嗎啉、唑嘧菌胺均應不大于0.5%，取其算術平均值為測定結果。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

通過島津LC-20AT高效液相色譜儀的光譜數據采集功能，獲得氟嗎啉和唑嘧菌胺的紫外波長掃描圖。由圖3可知氟嗎啉和唑嘧菌胺最大吸收波長分別在236 nm和292 nm左右，如果選擇唑嘧菌胺的最大吸收波長292 nm作為檢測波長，色譜圖中唑嘧菌胺的峰響應太高，氟嗎啉的響應值過低，而選擇236 nm作為檢測波長時，二者響應值接近，所以將檢測波長定為236 nm。色譜柱選擇常用的反相填料ZORBAX Extend-C18柱。流動相選擇甲醇和水，對二者不同比例進行試驗發現當甲醇比例較高時氟嗎啉和唑嘧菌胺出峰較快，氟嗎啉異構體和雜質難以達到基線分離；當甲醇比例較低時二者出峰較慢時，氟嗎啉異構體和雜質可以實現基線分離，但唑嘧菌胺出峰太慢，非常不利于樣品的日常檢驗；而在梯度濃度洗脫下，氟嗎啉異構體與雜質既能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩，又分析時間較短，利于日常生產監控，工作效率提高。

圖3 氟嗎啉和唑嘧菌胺的紫外波長掃描圖

2.2 線性關系

準確稱取0.052 48 g氟嗎啉標樣、0.051 26 g唑嘧菌胺標樣，置于25 mL量瓶中，移取上述標樣母液0.5、2.5、5、7.5 mL分別于不同的10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，制成濃度為10%～200%的線性溶液。在上述HPLC操作條件下，測定溶液。以標樣溶液的質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。試驗測得氟嗎啉線性方程Y=152 24.403 3x+3 540.243 5，線性相關系數為0.999 9，唑嘧菌胺線性方程Y=2 898.827 0x-1 481.019 1，線性相關系數為：0.999 9。

2.3 分析方法的精密度試驗

60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑中氟嗎啉占比30%、唑嘧菌胺占比30%。準確稱取5份60%氟嗎啉?唑嘧菌胺干懸浮劑試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，氟嗎啉精密度的標準偏差為0.12%，變異系數為0.39%；唑嘧菌胺精密度的標準偏差為0.17%，變異系數為0.59%。

圖4 氟嗎啉線性關系圖

圖5 唑嘧菌胺線性關系圖

2.4 分析方法的準確度試驗

首先，按照配方比例要求，將除氟嗎啉、唑嘧菌胺原藥外的所有成分混合，攪拌均勻，為制劑空白。再稱取0.05 g氟嗎啉、0.05 g唑嘧菌胺原藥，按制劑標稱值添加到制劑空白中，按照上述方法共制成5個樣品，分別對每個樣品中的氟嗎啉、唑嘧菌胺含量進行測定。氟嗎啉和唑嘧菌胺平均回收率分別為99.4%、99.6%，該方法回收率良好，測定結果準確可靠。

3 結 論

試驗結果表明氟嗎啉濃度為104.96～2 099.20 μg/mL(r=0.999 9)、唑嘧菌胺濃度為102.50～2 050.40 μg/mL(r=0.999 9)時，本方法線性關系良好；氟嗎啉和唑嘧菌胺精密度變異系數分別為：0.59%和0.39%；氟嗎啉和唑嘧菌胺的平均回收率分別為99.4%和99.6%。本方法的準確度和精密度較高，線性關系良好，其具有簡便、快速、準確及分離效果好的優點，是一種可行的分析方法。