臥龍自然保護區內一例病死野豬的病原檢測

施小剛，鐘銳，黃迪，周瀟瀟，李敏，彭廣能，張靜，何廷美*

（1.四川臥龍國家級自然保護區管理局，四川 汶川 623000；2.四川農業大學動物醫學學院，四川 成都 611130；3.四川省成都市動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041；4.四川省汶川縣臥龍特別行政區，四川 汶川 623000）

豬瘟、非洲豬瘟、藍耳病、口蹄疫、豬圓環病毒Ⅱ型（PCV2）感染、豬丹毒桿菌病、豬巴氏桿菌病、豬鏈球菌病是目前危害家豬比較嚴重的8 大疾病，這些疾病同樣對野豬種群存在威脅。2020年4 月2 日，臥龍自然保護區巡護工作人員于臥龍耿達鎮崔家磨子溝處發現一只野豬側躺于溝谷旁，呼吸微弱，未見明顯外傷，驅趕不能站立行走，后經搶救無效死亡。遂對病死野豬進行以上8種豬病病原檢測，以探明病因。

1 材料與方法

1.1 臨床和剖解癥狀 野豬體況較差，毛發根部有出血點，天然孔未見出血；體表有多量蜱蟲寄生，四肢、頭面部、肩胛部有大面積脫毛及皮屑。剖解可見腹腔中脾臟體積偏小，胃部有出血點，小腸輕微粘連，盲腸中有大量泥沙碎石沉積，體積膨大，未見腹水；胸腔臟器未見明顯異常。

1.2 病料 采集病死野豬的脾臟及血液樣本進行檢測。

1.3 病原檢測

1.3.1 樣品處理 取無菌的2 mL Lysing Matrix組織研磨管，加入1 mL PBS 液，再加入適量脾臟組織樣品，置于FastPrep-24?5G 研磨儀中研磨，8 000 r/min 離心1 min，取上清液保存于-20 ℃備用。脾臟研磨上清液待檢樣品編號01、02，血液上清待檢樣品編號03，相應陰性對照編號04，陽性對照編號05。

1.3.2 DNA/RNA 的抽提 參照北京世紀元亨生物科技有限公司的磁珠法病毒DNA/RNA 提取試劑盒說明書，配合KingFisher DUO自動化提取儀器，執行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序進行DNA抽提。程序執行完畢，取出DNA，用封口膜封好并保存于-20 ℃備用。

表1 核酸擴增體系及程序

1.3.3 擴增反應 參照不同通用型單重熒光PCR檢測試劑盒，對豬瘟病毒、非洲豬瘟病毒、藍耳病病毒、口蹄疫病毒、豬圓環病毒Ⅱ型、豬丹毒桿菌、豬巴氏桿菌、豬鏈球菌核酸進行qPCR或者qRT-PCR擴增，擴增體系和程序見表1。

2 結果

核酸結果顯示PCV2呈陽性（見表2），豬瘟病毒、非洲豬瘟病毒、藍耳病病毒、口蹄疫病毒、豬丹毒桿菌、豬巴氏桿菌、豬鏈球菌的核酸檢測結果均為陰性。最終診斷該野豬感染了PCV2。

表2 豬圓環病毒Ⅱ型熒光定量PCR結果判定

3 分析與討論

在豬身上已經有四種不同的圓環病毒亞型被鑒定出來，而PCV2 被認為是一種經濟上具有挑戰性的重要病原體［1］。PCV2 感染可能會導致機體內淋巴細胞凋亡、干擾素生成受阻，使機體免疫反應降低，嚴重的會引起免疫抑制和多系統病變［2］。PCV2病毒具有高進化率的特點，可能以突變的形式逃避免疫應答，使得免疫失效，所以對PCV2 的預防和治療難度較大［3-4］。本例病死野豬檢測出PCV2 呈陽性,推測可能是種群攜帶所致，溯源及流行情況需要更多的樣本來探究。野生動物由于環境壓力、食物限制以及天敵威脅等因素存在自然淘汰的現象，更應當注意并監測病毒攜帶情況，否則容易引起致病種群數量的驟減。

隨著經濟發展，野生動物棲息地與人類生活區域的重合范圍越來越廣，野生動物和家養動物之間傳播疫病的風險也隨之提高。有報道［5］指出野豬可能是PCV2的長期寄主，并且能將PCV2傳播到相對較遠的地區，其種群攜帶率可能超過50%。另有報道［6］顯示圓環病毒可以在家豬和野豬之間傳遞，這種傳遞對野生種群存在威脅，但仍需要更多的數據來支持并發現其傳播途徑，評估其對野生動物健康和生態的實際影響。