雞新城疫的現場檢疫和實驗室檢驗

孫振明

（農安縣農安鎮畜牧獸醫站，吉林 農安 130200）

雞新城疫又稱為“偽雞瘟”“亞洲雞瘟”，其病原體為副黏病毒，其主要臨診特征為神經紊亂、呼吸困難、腹瀉、黏膜或漿膜出血。現場檢疫包括流行病學調查、活體檢疫、肉尸檢疫。雞新城疫檢疫的常見檢驗方法有病毒分離鑒定、血凝抑制試驗。前者用于新城疫的診斷；后者用于新城疫的免疫抗體測定和免疫監測。

1 現場檢疫

（1）流行病學。雞對本病易感性最高，各種品種、年齡的雞均有易感性，幼雛和中雛的易感性比成年雞更高。近年來國內已有鵪鶉、鴿及觀賞鳥發病的報道。本病的主要傳染源是病雞以及流行間歇期的帶毒鳥類，經呼吸道和消化道向外大量排出病毒而傳播。本病一年四季均可發生，但以冬春兩季較多。免疫雞群也可能發生新城疫，出現非典型癥狀，但雛雞和成年雞的發病率和病死率不高。

（2）活體檢疫。①最急性型：發病突然，無顯著癥狀而快速死亡。②急性型和慢性型：病雞表現為明顯的咳嗽，流涕，呼吸困難，張口呼吸，并發出“咯咯”的叫聲。口中有黏液，常見搖頭和吞咽動作，企圖將黏液甩出。嗉囊有液態黏稠物，倒提即從口內流出。糞便常呈黃綠或黃白色，偶見帶血的糞便。病程稍長的病雞出現腳、翅麻痹、歪頭扭頸、站立不穩等神經癥狀。③非典型新城疫：主要發生于免疫雞群，由于免疫水平偏低或免疫力不整齊，幼雞和育成雞出現輕微的呼吸道癥狀。成年雞產蛋量下降，持續性的零星死亡。

（3）肉尸檢疫。主要病變是淋巴系統腫脹、出血或壞死，全身黏膜和/或漿膜有出血點、出血斑。典型病變：①腺胃黏膜乳頭及其周圍出血、潰瘍或壞死，肌胃角質層下也常見有出血點或出血帶；②盲腸、扁桃體腫大、出血或壞死。腸黏膜有大小不等的出血點以及纖維素性滲出物。病程較長者有的形成假膜，假膜脫落后即成“棗核狀”潰瘍。氣管黏膜增生，并有滲出物。若雞群已進行了免疫處理，則發生新城疫時僅見黏膜呈卡他性炎癥，直腸黏膜和盲腸扁桃體出血，病變相對較輕，其他病變不典型。

2 實驗室檢驗

（1）病毒分離鑒定。①樣品采集及處理：取病死禽的腦或心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、氣囊等組織，用生理鹽水研成1∶5乳液，加入青霉素（至終濃度為100 IU·mL-1）、鏈霉素（使終濃度為1 000 μg·mL-1）。采取的氣管拭子和泄殖腔拭子（或糞拭子），置于2～3 mL含有青、鏈霉素的生理鹽水中（青、鏈霉素的用量提高5倍），反復擠壓至無水滴滲出棄之。調節pH至7.0～7.4，37 ℃作用1 h，以1 000 r·min-1離心10 min，取上清液4 ℃保存備用。②病毒分離鑒定：取處理后的樣品上清液0.1 mL經尿囊腔接種9～10日齡SPF雞胚，培養4～7 d，無菌收集尿囊液；與標準陽性血清作血凝抑制試驗，判定是否感染新城疫病毒。③病毒致病力測定：用生理鹽水連續10倍稀釋尿囊液至1×10-9，從1×10-6～1×10-9，每個稀釋度接種9～10日齡的SPF雞胚5個，0.1 mL·胚-1，于37 ℃溫度條件下孵化。8 h后以同樣方法接種第2批雞胚。連續7 d觀察雞胚死亡時間，并記錄。判定依據：引起接種雞胚死亡的最大稀釋倍數為該病毒的最小致死量。④結果判定：以40～70 h死亡為強毒，140 h以上死亡為弱毒。

（2）進行血凝抑制試驗。①需準備的器材：96 孔U 型微量板、微量移液器、微型振蕩器。pH 7.0～7.2的磷酸鹽緩沖液；濃縮抗原或被檢培養物尿囊液（病毒鑒定）；陽性和陰性標準血清由指定單位提供。制作0.5%雞紅細胞懸液：于成年雞的翅根處采血，用20倍體積的磷酸鹽緩沖液洗滌3～4次，以2 000 r·min-1離心3～4 min，吸棄上層血漿、白細胞 等， 最 后 一 次 離 心5 min， 制 成0.5% 懸 液。②抗原血凝效價測定（血凝試驗）：用微量移液器在微量板上每孔加入磷酸鹽緩沖液50 μL，共4排。取1∶5倍稀釋抗原或被檢物液（病毒鑒定）加入每排第1孔，50 μL·孔-1；后由左至右稀釋至第11孔，再從第11孔中吸取50 μL棄之不用。最后1 孔不加抗原，目的是作為血細胞對照。加入0.5%紅細胞懸液50 μL·孔-1。將試液置于微量振蕩器中，混合1 min 后，于18～20 ℃的室溫環境下靜置30 min，仔細觀察血凝圖像。以出現完全凝集的抗原最大稀釋度為該抗原的血凝效價。每次4 排重復，經幾何均值確定抗原的血凝效價。③試驗操作：抗原稀釋倍數=血凝效價/4。在微量板每排第1孔分別加入磷酸鹽緩沖液50 μL，每排第2孔加入濃度為8個單位的抗原50 μL，第3至12孔依次加入濃度為4個血凝單位的抗原50 μL。每排第1孔分別加被檢血清50 μL，混勻后吸取50 μL 加入第2 孔；依次倍比稀釋至第12孔，混勻后棄去50 μL。置于18～20 ℃的室溫環境下持續20 min。滴加0.5%紅細胞懸液50 μL·孔-1，充分混勻后于室溫下靜置30 min 并觀察結果。④判定結果：紅細胞對照、陽性血清對照結果應為不凝集紅細胞；陰性血清對照、抗原對照應出現凝集現象。

3 病死雞的處理

若經尸檢發現病死雞的內臟有病變而肉尸無病變者，其內臟作工業用或銷毀，肉尸高溫處理后可用；出現全身病變者，肉尸與內臟全部作工業用或銷毀，血液及羽毛消毒后出場。