常用消毒劑對雞場分離大腸桿菌的消毒效果研究

袁曉娟/湖南省長沙市農業綜合行政執法局 410013

大腸桿菌疾病是一類傳染病籠統的總稱，致病菌是大腸埃希氏菌內部的一些血清型，是非常重要的一類胚胎疾病。在整個生產活動中，禽類活動的所有周圍環境里都有大腸桿菌，這種疾病在幼雞以及成年雞大腸桿菌疾病在臨床上分為許多種類，其中包含大腸埃希氏菌致病性的卵黃性腹膜炎、關節炎、腦病、孵化率低、死胚、敗血癥、氣囊炎、心包炎、腫頭綜合征、腸炎等。雞群發病的概率是，致死的概率是[3]。由此可見，家禽大腸桿菌疾病的爆發嚴重損害了養殖戶的利益，造成了養殖戶經濟上的巨大損失。

該病原體對于畜禽的生產安全造成了嚴重的損害，而最有效的防控措施就是消毒。本試驗通過測量幾種類型的消毒藥劑對于分離的病原菌的最小殺菌濃度、消毒藥劑的濃度、作用時間對消毒效果的影響，對大規模集約經營養雞場現場進行消毒操作的實際效果觀測，為疫病的預防控制以及確定消毒的方案提供理論依據。

1 材料

1.1 試驗動物試驗用的染病雞來自某蛋雞企業養殖廠。

1.2 試驗材料LB培養基、伊紅美藍瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、TSA瓊脂培養基、腸桿菌科生化鑒定培養基，電熱恒溫培養箱、超凈工作臺、電子天平、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫空氣搖床、漩渦混合器、顯微鏡。

1.3 消毒藥劑百毒殺、84消毒液、菌毒靈、新潔爾滅、新歐福、氨酚。

2 方法

2.1 病料采集及涂片染色將送檢的病雞進行解剖，在無菌的環境中取具備明顯大腸桿菌病病變特點的組織器官比如氣囊、心包、肝表滲出物進行涂片，進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察，在無菌環境中用接種環把疑似的病料接種在液體培養基上，完成菌群擴增過程。

2.2 分離培養病原把接種過疑似菌種的培養基繼續接種在麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍瓊脂平板上，37℃培養24h；再在無菌的環境中，挑取表面生長為紅色菌落的半個菌落接種在營養瓊脂斜面培養基進行純培養，與此同時把另外半個菌落進行涂片，革蘭氏染色，顯微鏡下檢測；純培養物放置在4℃的冰箱以備之后使用。

2.3 消毒劑的配制將百毒殺、84、菌毒靈、新潔爾滅、氨酚、新歐福分別用滅菌生理鹽水按1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640的比例稀釋成為濃度各異的消毒試劑。

2.4 制備大腸桿菌菌懸液把已經完成分離測定的大腸桿菌接種在營養瓊脂培養基表面繼續進行擴大培養，取5mL滅菌生理鹽水加入培養基中，反復洗下菌苔至無菌管中，用漩渦混勻30s制成菌懸液，采用麥氏比濁管將菌懸液稀釋為107CFU/mL待測菌液，保存在4℃冰箱內備用，12h內使用。

2.5 消毒劑在不同時間內的殺菌結果及最小殺菌濃度確定逐一取上述種類濃度各異的消毒試劑2ml跟大腸桿菌的菌懸液0.1ml進行均勻混合，經過1min、10min、30min和1h、5h的時長，取菌液與消毒液的混合液0.5ml加入4.5ml中和劑的試管中混勻，經中和作用10min，從中取0.1ml的樣本涂布在營養瓊脂培養基里上，在37℃的恒溫培養箱內完成48h的培養，仔細觀察各濃度殺菌劑在不同時間內的殺菌效果，以無菌生長的最低倍數作為該消毒劑在該時間內對試驗菌的最小殺菌濃度。

3 結果

3.1 病料涂片染色鏡檢結果疑似病料經涂片染色鏡檢查得出：革蘭氏陰性、無芽孢短桿菌，多單個或成對存在。

3.2 細菌培養特性及形態特征分離出來的菌株在每一種培養基上長成典型的大腸桿菌應該呈現的菌落形態，可以判斷符合大腸桿菌典型的菌落形態特征。

3.3 消毒劑的消毒效果的測定結果百毒殺對某蛋雞企業養殖廠分離的大腸桿菌菌株的殺菌效果最好，1:160比例稀釋在5min內可以達到殺菌率100%；1:80比例的菌毒靈在5min內可以達到殺菌率100%；1:80比例的新潔爾滅在10min可以達到殺菌率100%；1:80比例的新歐福在5min可以達到殺菌率100%；1:40比例的氨酚在5min可以達到殺菌率100%。

4 討論

幾種消毒劑對大腸桿菌均具有殺菌能力，但稀釋倍數各不相同，殺菌能力與消毒劑濃度呈正相關，而且殺菌效果與殺菌時間呈正相關;本次試驗中6種消毒劑對大腸桿菌的殺菌效果與殺菌時間有關，作用10min后6種消毒劑都可以達到殺菌率100%。百毒殺的稀釋比例相對來說也是最大的，所以在養殖場的日常消毒中，建議使用百毒殺，但是如果長時間使用單一消毒劑，養殖廠中致病細菌會逐漸產生耐藥性，因此建議菌毒凈和百毒殺定期交替使用。