大花蕙蘭組織培養體系優化實驗初探

周永勝　胡松梅

摘 要 對大花惠蘭的原球莖進行增殖、分化、生根等過程的研究，篩選出最佳增殖培養基、分化培養基、生根培養基，優化大花蕙蘭組織培養育苗體系，達到繁殖系數高、成苗率高的目的。研究結果表明：最佳增殖培養基為6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1，增殖倍數為2.39;原球莖最佳分化培養基為MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1，苗整齊健壯，葉片大而濃綠;最佳壯苗生根培養基為MS+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1，生根率為100%。

關鍵詞 大花惠蘭;組織培養;優化

中圖分類號：S682.31 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.30.074

大花惠蘭花姿優美、花色艷麗、花期長久，在國際花卉市場上非常暢銷，也是我國栽培較多的洋蘭種類。大花惠蘭的常規繁殖方法為分株繁殖，但3年左右才能分株出1株苗，繁殖速度極慢，完全不能滿足花卉市場的需求。組織培養是大花惠蘭快速繁殖的有效途徑[1]。

1 材料與方法

1.1 材料

大花惠蘭原球莖。

1.2 培養條件

培養室溫度23～27 ℃，光照時間14 h·d-1，光照強度2 000 lx[2]。

1.3 方法

將200個大花惠蘭原球莖接種在3種增殖培養基上，40 d時統計增殖數并計算增殖率，篩選出最佳增殖培養基。將原球莖在最佳增殖培養基上增殖5代后轉接到3種分化培養基中，40 d時記錄分化率并觀察分化情況。選取高1 cm以上、長勢較一致的小苗，轉入3種壯苗生根培養基中，60 d后觀察統計瓶苗的生長狀況、生根率和平均生根數[3]。

原球莖增殖培養基配方為：1）MS+6-BA 3 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1;2）6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA?0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1;

3）6-BA 1mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1。原球莖的分化培養基配方為：1）MS+6-BA 1 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1;2）MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1;3）MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+IBA?0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1。

壯苗生根培養基配方為：1）MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1;2）MS+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1;3）MS+IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1。

2 結果與分析

2.1 大花蕙蘭原球莖的增殖培養

表1為不同培養基配方對大花蕙蘭原球莖增殖的影響。1號增殖培養基增殖倍數高，但原球莖呈淡綠色，有30%左右出現玻璃化現象，在分化培養中分化率不高（見圖1）。2號和3號培養基中原球莖呈墨綠色，原球莖直徑大，生長速度較快。2號和3號培養基既可以增殖，也能在培養70 d后開始分化成苗。

研究結果表明：增殖培養基為6-BA 2 mg·L-1+NAA?0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1效果最好，增殖倍數為2.39。

2.2 大花蕙蘭原球莖的分化培養

原球莖增殖培養5代后進行分化培養。3種分化培養基都能分化出苗（見圖2）。1號和2號培養基既能使原球莖增殖，也能誘導分化，但原球莖增殖數大于分化數，苗瘦弱，常有玻璃化苗。3號培養基（MS+6-BA?0.1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1）成苗率可達90%以上，原球莖基本不增殖，且苗健壯整齊，為最佳培養基。

2.3 大花蕙蘭的壯苗生根

表2為3種培養基配方對大花蕙蘭壯苗生根的影響。表2結果表明：3種壯苗生根培養基均能使大花蕙蘭試管苗生根，且生根率達100%，說明大花蕙蘭容易生根。

1號培養基中大花蕙蘭植株生長緩慢，節間較短，分析認為可能是生長素濃度偏高，抑制了植物的生長。2號和

3號培養基生長迅速，植株粗壯，根粗壯（見圖3）。在2號和3號培養基中培養20 d 左右，試管苗開始生根，30 d左右長出3～4條長約1.5 cm、粗約0.15 cm的白色肉質根（見圖4）。考慮移栽成活率，選擇低濃度的配方MS+IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1為最佳壯苗生根培養基。

3 結論

大花蕙蘭原球莖增殖培養中，細胞分裂素濃度較高時，增殖系數高，但苗易玻璃化[4-5]。隨著繼代次數的增加，玻璃化現象日益嚴重，分析其原因為6-BA在繼代中會逐漸累積，故生產中應在增殖培養中逐步降低6-BA的含量，以減免原球莖出現玻璃化現象。生根培養基中植物激素濃度低可以提高移栽成活率，但培養時間會較長，要特別注意環境污染。生根培養基中添加10%的土豆汁和紅薯汁，試管苗生長更健壯。

參考文獻：

[1] 劉洋，王玉英，李枝林，等.大花蕙蘭‘紅酒×蓮瓣蘭‘邊草素花雜交種組培快繁技術[J].廣西植物，2019（10）：1327-1333.

[2] 蔡寅川，李懿.天竺葵組織培養研究進展[J].福建農業科技，2015（3）：53-56.

[3] 胡松梅.鐵皮石斛抗寒品種的快速繁殖[J].天津農業科學，2015（12）：114-116.

[4] 宋蓮，王玉英，張宇歡，等.墨蘭綠墨素與大花蕙蘭世界和平雜交種組培快繁技術[J].江蘇農業科學，2017（24）：41-43.

[5] 黎霞，曹樺，聞永慧，等.大花蕙蘭與朱砂蘭雜種根狀莖增殖和分化的研究[J].中國農業科技導報，2017（2）：28-34.

（責任編輯：劉 昀）