動物源金黃色葡萄球菌分離株mecA基因的表達及耐藥性分析

在自然界中SA廣泛存在，可形成數種毒力因子，為人畜共患的一種常見病原菌。SA作為食源性致病菌，已經成為影響公共衛生的重大難題之一。MRSA具有多重耐藥性，檢出率有逐日增加的趨勢，動物源MRSA有經環境或動物食品消費鏈向人類傳播的風險。金葡菌是誘發牛乳腺炎的主要病原菌，現階段針對牛源金黃菌耐藥性的研究較多，但對其他動物源的金黃菌耐藥性研究較少見。本文篩選出MRSA菌株，利用PCR檢測mecA基因，現將檢測情況作出如下報告。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 由項目組實驗室提供動物源金葡菌，共計45株。藥敏試驗質控株ATCC25922、ATCC43300。

1.1.2 儀器與設備 MIC藥敏板、培養箱及PCR儀等。

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗 利用微量肉湯稀釋法對10種藥物的敏感性進行檢測。在具體操作時使用滅菌棉簽蘸取3～5個待測單菌落，使其懸浮在NaCI溶液中（3mL 0.45%），用比濁儀把細菌濃度調整至適宜區間內，混合搖勻，由MHB試管內吸取50μL并將其安放在藥敏板各孔，在36℃恒溫箱中培養24h后，判斷結果。

1.2.2 檢測MRSA菌株 采用頭孢西丁制片法進行。嚴格依照CLSI有關規定，把待測菌株涂擦在瓊脂平板上后，將頭孢西丁紙片貼上，恒溫培養后利用反射光閱讀紙片試驗結果。

1.2.3 檢測mecA基因 依照ZHANG等方法合成mecA引物，目標片斷為146bp，工作濃度為20pmol/L，-20℃低溫環境下保存。利用DNA模板取多個菌落并將其放置于EP管內，水浴、離心處理后，取上層清液作為模板，保存待用。提取8μL PCR產物，用2%瓊脂糖凝膠電泳，在成像儀上觀察結果。

2 結果

2.1 藥敏試驗 金黃菌對莫匹羅星、萬古霉素的耐藥率為0，對利福平的耐藥率為3.8%，對青霉素、鏈霉素、甲氧氨芐嘧啶、泰妙菌素、氯霉素的耐藥率依次為80.7%、74.3%、78.3%、68.1%、56.5，對紅霉素的耐藥率為92.7%。

2.2 MRSA檢測情況 共檢出23株MRSA菌株，檢出率為51.1%。其中，發病樣品、健康畜禽的糞便樣品、環境樣品中分別檢出5、11、7株，其中發病樣品只由豬內臟中檢出MRSA。

2.3 mecA基因檢出情況 納入本次研究的樣品中，共計檢測出含有mecA基因的菌株23例，占51.1%，包括MRSA21株、MSSA2株。MRSA內mecA陽性21株，陰性2株，mecA比例為91.3%；MSSA中mecA陽、陰性分別有2株、18株，mecA比例為10.0%。MRSA內mecA基因攜帶率明顯高于MSSA。

3 結論

本次試驗研究表明，除了萬古霉素、莫匹羅星外，金葡菌對其他藥物均產生了耐藥性。對利福平的耐藥率為3.8%，對青霉素、鏈霉素、甲氧氨芐嘧啶的耐藥率均在70～81%之間，而對紅霉素的耐藥率高于90.0%。頭孢西丁紙片法檢測出MRSA共計23株，占51.1%；并且發病樣本中只從豬內臟樣品中檢測出MRSA，這可能是因為生豬在疾病預防、治療過程中未能科學使用抗生素所引發的。

mecA基因檢出率為51.1%，MRST內mecA基因攜帶率明顯高于MSSA，與國內部分研究結果相一致。MSSA中有2株檢測出mecA基因，藥敏試驗表明其對氯霉素敏感，但耐藥情況比不攜帶mecA基因更為嚴重[2]。

結合本文研究的內容發現，攜有mecA基因的金葡菌具有較廣泛的耐藥性、敏感性等數個表現，MRSA、MSSA內均能檢測出mecA基因。采用PCR能快捷、精確的檢測到mecA基因，但如果依照mecA基因去鑒別MRSA，則應關注假陰性的情況。