無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本核酸檢測(cè)法HBV病毒篩查對(duì)臨床輸血安全的影響

河南省駐馬店市中心血站（463000）孫四力

輸血現(xiàn)階段已成為了臨床中應(yīng)用較為廣泛的治療手段之一，其作用越來(lái)越突出，而對(duì)于血液工作者來(lái)講，保證臨床輸血安全則是工作重點(diǎn)[1]。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，病毒“窗口期”較長(zhǎng)是導(dǎo)致輸血感染的主要原因[2]；所以讓窗口期縮短，讓病毒檢出率提高就成為了現(xiàn)階段需要及時(shí)解決的問(wèn)題。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)逐漸發(fā)展和進(jìn)步的過(guò)程中，核酸檢測(cè)作為新型的檢測(cè)手段之一，開(kāi)始逐漸應(yīng)用于臨床檢測(cè)工作中，核酸檢測(cè)法不但能讓病毒檢測(cè)的窗口期明顯縮短，而且還能讓血液傳播病原體殘余風(fēng)險(xiǎn)顯著降低，在對(duì)隱匿性HBV病毒感染進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，核酸檢測(cè)法的作用非常重要[3]。本研究主要分析了無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本核酸檢測(cè)法HBV病毒篩查對(duì)臨床輸血安全的影響，現(xiàn)作如下分析。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料 選取某站2019年1月～7月采集的1500份無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：簽署知情同意書(shū)；脈搏和血壓正常，不存在嚴(yán)重疾病；男性≥50kg，女性≥45kg。排除標(biāo)準(zhǔn)：淋巴結(jié)腫大；皮膚感染；傳染性疾病。全部1500份無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本中，848例男性，652例女性；其年齡為23～39歲，平均為（29.4±3.2）歲；其體質(zhì)量指數(shù)為19.1～25.3kg/m2，平均為（22.3±1.4）kg/m2。采用丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）化學(xué)法和HBs-Ag快速試紙法初篩合格，每一位無(wú)償獻(xiàn)血者均留取血液標(biāo)本2管，分別采用酶聯(lián)免疫法和核酸檢測(cè)法對(duì)HBV病毒進(jìn)行篩查。

1.2 方法 （1）儀器、試劑：選擇上海浩源生物科技有限公司的全自動(dòng)核素監(jiān)測(cè)儀，瑞士FAME全自動(dòng)儀器（酶聯(lián)免疫法檢測(cè)儀）；上海浩源生物科技有限公司的HBV核酸提取試劑和檢測(cè)試劑；英科新創(chuàng)生物科技有限公司的HbsAg檢測(cè)試劑。（2）核酸檢測(cè)法：①初檢：選擇醫(yī)療專用試劑對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)單人份初檢；根據(jù)核酸檢測(cè)法的相關(guān)要求在分析擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)、試劑制備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)對(duì)相關(guān)污染事件進(jìn)行嚴(yán)格控制。在制備好24h內(nèi)，嚴(yán)格遵循試劑說(shuō)明書(shū)開(kāi)展HBV-PCR熒光定量檢測(cè)，進(jìn)行PCR加樣、擴(kuò)增、試劑準(zhǔn)備和樣品準(zhǔn)備等。PCR反應(yīng)程序的具體設(shè)置為：溫度設(shè)置為94℃，持續(xù)時(shí)間為3分鐘，溫度為50℃，時(shí)間為2分鐘，延伸65℃，時(shí)間為35秒，退火50℃，時(shí)間為10秒；變性94℃，時(shí)間為10秒，循環(huán)擴(kuò)增45次，在完成熒光檢測(cè)后，進(jìn)行64℃循環(huán)共40個(gè)，檢測(cè)通道為550nm、530nm。②追蹤監(jiān)測(cè)和復(fù)檢：如果標(biāo)本為酶聯(lián)免疫法（-）、核酸檢測(cè)法（+），則應(yīng)接受復(fù)檢，復(fù)檢標(biāo)本為新鮮全血分離冰凍血漿。有相同復(fù)檢結(jié)果的酶聯(lián)免疫法（-）、核酸檢測(cè)法（+）標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行追蹤檢測(cè)；再次采集血液標(biāo)本開(kāi)展酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，選擇專用試劑開(kāi)展核酸檢測(cè)法定量檢測(cè)，并開(kāi)展HBsAg確診檢測(cè)，按照上述結(jié)果對(duì)免疫學(xué)檢測(cè)窗口期進(jìn)行判斷。（3）酶聯(lián)免疫法檢測(cè)：在開(kāi)展HBsGa檢測(cè)時(shí)，在獻(xiàn)血標(biāo)本中分別加入2種酶聯(lián)免疫法試劑，應(yīng)同時(shí)具備陰性對(duì)照、空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控；S/CO≥1則判斷為陽(yáng)性，S/CO≤0.7則判斷為陰性，0.7≤S/CO≤1則為灰區(qū)[4]。

1.3 觀察指標(biāo) ①HBV病毒陽(yáng)性檢出率與漏診率進(jìn)行觀察；②對(duì)窗口期進(jìn)行觀察；③對(duì)檢測(cè)敏感性和特異性進(jìn)行觀察比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS21.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，組間數(shù)據(jù)比較進(jìn)行X2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV病毒陽(yáng)性檢出率與漏診率觀察 核酸檢測(cè)法的HBV病毒陽(yáng)性檢出率為0.67%，漏診率為0.13%；酶聯(lián)免疫法的HBV病毒陽(yáng)性檢出率為0.60%，漏診率為0.20%；在HBV病毒陽(yáng)性檢出率以及漏診率方面，核酸檢測(cè)法與酶聯(lián)免疫法比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 窗口期觀察 核酸檢測(cè)法的窗口期為（21.21±3.76）d，明顯短于酶聯(lián)免疫法的（35.17±4.83）d，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 敏感性和特異性觀察 核酸檢測(cè)法的敏感性為99.73%，特異性為99.47%；酶聯(lián)免疫法的敏感性為93.13%，特異性為93.40%；在檢測(cè)敏感性、特異性方面，核酸檢測(cè)法明顯高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05）。

3 討論

我國(guó)現(xiàn)階段已成為了一個(gè)HBV病毒感染大國(guó)，所以加強(qiáng)HBV病毒感染的預(yù)防和控制工作就顯得非常重要[5]。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，血液傳播是導(dǎo)致HBV病毒感染風(fēng)險(xiǎn)增加的主要原因，所以現(xiàn)階段在開(kāi)展輸血管理工作時(shí)，積極開(kāi)展HBV病毒篩查工作就顯得非常關(guān)鍵[6]。

酶聯(lián)免疫法是臨床中應(yīng)用比較廣泛的血清學(xué)檢測(cè)手段之一，是現(xiàn)階段臨床診斷HBV病毒感染的常用手段，在血液篩查和臨床診斷中的作用非常重要[7]。核酸檢測(cè)法則是最近幾年開(kāi)始逐漸應(yīng)用于臨床的新型診斷手段之一，對(duì)血液中是否存在病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而來(lái)對(duì)有無(wú)感染病原體進(jìn)行確診。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，采用核酸檢測(cè)法開(kāi)展血液篩查，能讓HIV病毒感染的臨床檢出率明顯提高，讓漏診事件明顯減少[8]。

分析本研究發(fā)現(xiàn)，在HBV病毒陽(yáng)性檢出率以及漏診率方面，核酸檢測(cè)法與酶聯(lián)免疫法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；核酸檢測(cè)法的窗口期明顯短于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05），而且在檢測(cè)敏感性、特異性方面，核酸檢測(cè)法明顯高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05）；結(jié)果表明，核酸檢測(cè)法能讓窗口期明顯縮短，診斷效能較高。核酸檢測(cè)法選擇二次擴(kuò)增套式PCR擴(kuò)增法，能讓假陽(yáng)性率明顯降低，讓檢測(cè)敏感性和特異性顯著提升。在實(shí)際的臨床檢測(cè)中，外周血中的病毒表現(xiàn)為間歇性存在，所以核酸檢測(cè)法也可能出現(xiàn)漏診的情況，聯(lián)合應(yīng)用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測(cè)則能有效彌補(bǔ)核酸檢測(cè)法的缺點(diǎn)。

總之，采用核酸檢測(cè)法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本進(jìn)行HBV病毒篩查，檢測(cè)敏感性和特異性較高，而且能讓窗口期明顯縮短，讓臨床輸血安全得以保證。