利用非手性－手性色譜－預測多反應監測法分析中藥前胡化學成分

許霞　李婷　曹麗波　賈金茹　龔興成　李軍　屠鵬飛　王一濤　宋月林

摘 要 前胡等中藥不僅化學成分組成復雜， 而且常含有大量對映異構體， 且對映異構體之間的含量常存在差異。本研究以中藥前胡為例， 建立了非手性-手性色譜-預測多反應監測法（Achiral-chiral LC-predictive MRM）， 實現了化學成分的化學選擇性和立體選擇性分析。非手性-手性色譜直接耦聯系統結合了RP-C18色譜柱的高效分離能力以及手性色譜柱的立體選擇性分離優勢， 有效避免了中心切割非手性-手性二維液相構造復雜、 精密度差等缺陷。采用小內徑核殼型RP-C18色譜柱作為前端化學分離柱， 實現了結構類似香豆素的高效化學選擇性分離; 通過在手性柱前引入稀釋泵， 優化適用于手性選擇性分離的洗脫程序; 采用反相大內徑AD-RH手性色譜柱， 實現了對映異構體的手性拆分。采用預測多反應監測模式實現化學成分的高靈敏度檢出， 并利用增強子離子掃描模式采集各色譜峰的二級質譜， 進行結構確證。從前胡中鑒定出61種化學成分， 其中包括11對對映異構體。Achiral-chiral LC-predictive MRM為含有對映異構體的中藥及其它復雜樣品的深入定性和定量分析提供了可靠的方法。

關鍵詞 非手性-手性色譜; 預測多反應監測模式; 對映異構體拆分; 角型吡喃香豆素; 中藥; 前胡

1 引 言

中藥和生物樣品等化學成分組成極其復雜， 常含有成百上千種化學成分[1]， 給分離提出了極大的挑戰。近年來， 隨著各種色譜填料的快速發展以及二維、 多維液相色譜的不斷涌現， 選擇性分離技術取得了較大進步。尤其是核殼色譜柱的出現， 為復雜體系的化學成分分析提供了有力的工具。液相色譜-質譜聯用技術（LC-MS）由于同時具備定性和定量分析的特點， 已被廣泛應用于中藥等復雜樣品的分離分析[2]。中藥化學成分組成復雜， 常含有大量的結構類似物， 并常含有對映異構體， 目前對于異構體的分離主要有色譜法和非色譜法， 色譜法主要包括高效液相色譜法（HPLC）[3，4]、 氣相色譜法（GC）[5]、 毛細管電泳法（CE）[6]以及超臨界流體色譜法（SFC）[7]， 非色譜法主要包括化學分離法[8]、 結晶分離法[9]、 膜分離法[10]以及動力學分離法等[11]。目前中藥中對映異構體的分離大多采用液相色譜法， 中心切割非手性-手性色譜分離系統[12，13]在實現手性分離的同時還可以對異構體的含量進行測量， 是最為常用的方法。然而， 該系統存在以下缺陷： 系統的構成復雜， 影響測定結果的準確性; 在第一維液相保留時間出現漂移時， 切換閥難以成功捕獲目標峰; 一般需要兩次或更多次樣品分析才能獲得對映異構體的含量; 如果在對映異構體的保留時間未設定柱切換， 則無法手性分離對映異構體。本研究組在前期工作中， 建立了反相色譜和親水作用色譜直接耦聯系統（RPLC-HILIC）[14～16]， 其同步保留大、 中、 小極性化學成分的能力與柱切換反相色譜和親水作用色譜[17，18]基本相當。RPLC-HILIC系統無需色譜柱切換， 儀器連接方便， 更適用于中藥復雜樣品的分離分析。

由于對映異構體常表現出不同的生物活性， 在樣品中也并非以外消旋體（Racemate）形式存在[19]， 表現為其中一種構型含量較高， 稱為優映體（Optimal enantiomer）。因此， 對這些對映異構體進行手性分離， 深入揭示對映異構體的含量差別， 具有重要的實用價值。為了闡明復雜樣品化學成分組成， 應在實現化學選擇性分離的基礎上， 建立高效的手性分離系統， 深入揭示對映異構體的含量差別和生物活性差異。然而， 手性色譜柱往往不具備較強的化學分離能力[20]， 而常用的RP-C18色譜柱雖然具有高效的分離能力， 但無法實現對映異構體的手性分離。

前胡（Peucedani Radix）為我國傳統中藥， 《中國藥典（2015年版）》規定基原為傘形科植物白花前胡Peucedanum praerupterum Dunn的干燥根， 其性味苦， 辛， 微寒， 歸肺經， 具散風清熱， 降氣化痰之功效。臨床上主要用于風熱感冒、 咳嗽痰多、 哮喘和胸悶等證[21，22]。角型吡喃香豆素類化合物（Angular-type pyranocoumarins， APs）是前胡中的主要化學成分群[19，22～27]， 也是前胡降氣化痰、 舒張血管的主要活性成分[28，29]， 如白花前胡甲素（dl-praeruptorin A）、 白花前胡乙素（dl-praeruptorin B）等。此外， 前胡中還含有簡單香豆素、 呋喃香豆素等化學類型。除各類結構相似的香豆素外， 文獻還報道了前胡中的多組對映異構體[19，25，27]， 這些對映異構體并非以外消旋體的形式出現， 而是存在優映體。并且， 對映異構體間往往呈現不同藥理活性。如白花前胡丙素（d-praeruptorin A）為優映體， 其在前胡中的含量、 擴張血管的活性以及代謝穩定性均優于其對映體l-praeruptorin A[19，28，30，31]。因此， 在對中藥前胡進行化學成分輪廓分析時， 不但要對各種結構類似的香豆素類成分進行有效分離， 還應對各組對映異構體進行手性拆分。

為了建立一種適用于復雜樣品化學成分分析的整合體系， 深入闡明前胡的化學組成成分， 本研究構建了非手性色譜與手性色譜直接耦聯系統（Achiral-chiral LC）， 可同步實現前胡中結構類似化學成分和對映異構體的高效分離。核殼色譜柱因其具有更高的柱效、 更低的反壓以及更高的分析效率， 可進行結構類似物和非對映異構體的化學選擇性分離; 涂敷型手性色譜柱填料可實現對映異構體立體選擇性分離。由于前胡化學成分的相關報道已較多， 本研究采用預測多反應監測模式（Predictive MRM）[32，33]實現化學成分的高靈敏度檢出。本研究構建的Achiral-chiral LC-predictive MRM體系為含有對映異構體的中藥化學成分深入定性與定量分析提供了可靠的方法。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

賽默飛U-3000雙三元高效液相色譜儀（美國Thermo-Fisher公司）， 配備兩個三元泵（左泵和右泵）、 柱溫箱、 自動進樣器和紫外檢測器; SCIEX Qtrap5500質譜儀（美國SCIEX公司）， 配備ESI離子源， 質譜檢測由自動進樣器觸發;? XS105型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）; Milli-Q超純水系統（美國Millipore公司）; XW-80A漩渦混合器（海門其林貝爾儀器制造有限公司）; PREMIXER ASSY混合器（日本Shimadzu公司）。

甲醇（色譜純）、 甲酸和乙腈（質譜純）， 購于美國Thermo-Fisher公司; 實驗用水為Milli-Q純水系統制備的超純水（18.2 MΩ·cm）; 甲醇（分析純， 北京化工廠）。中藥前胡購于北京同仁堂，經北京大學藥學院屠鵬飛教授鑒定為白花前胡（Peucedanum praeruptorum Dunn.）的干燥根， 標本存放于北京中醫藥大學中藥學院中藥現代研究中心標本庫。

2.2 實驗方法

2.2.1 溶液的配制 前胡藥材切成片， 在40℃烘箱中干燥處理4天后， 用粉碎機粉碎并過篩。精密稱取1.0 g干燥粉末于具塞三角瓶中， 加入50%甲醇定容至50 mL， 稱定重量， 超聲處理30 min， 放冷， 再次稱定重量， 用50%甲醇補足失重， 搖勻， 靜置， 上清液過0.22 μm濾膜， 吸取續濾液500 μL， 待測。

2.2.2 液相色譜條件 液相系統連接方式如圖1所示[16]。使用U-3000雙三元色譜儀的左泵和右泵提供稀釋溶劑， 利用PEEK管將非手性柱和手性柱在線連接。為了解決非手性柱和手性柱流動相不兼容的問題， 引入右泵提供豐富的水和乙腈溶劑; 為了防止來自左泵和右泵的兩股流動相在混合時產生氣泡， 選用PREMIXER ASSY混合器將兩股流動相充分混合， 混合后的溶劑直接進入手性柱進行在線洗脫。具體參數如下：? Capcell core RP-C18非手性色譜柱（150 mm×2.1 mm， 2.7 μm， 日本Shiseido公司）;? AD-RH手性色譜柱（150 mm×4.6 mm， 5.0 μm， 日本Daicel公司）。左泵輸送泵流動相A（0.1%甲酸）和流動相B（乙腈）， 梯度洗脫程序： 0～4 min， 10%B; 4～15 min， 10%～25%B; 15～23 min， 25%～50%B; 23～28 min， 50%～57%B; 28～34 min， 57%～67%B; 34～44 min， 67%～68%B; 44～56 min， 68%B; 56～60 min， 68%～95%B; 60～60.1 min， 95%～10%B; 60.1～66 min， 10%B; 總流速為0.3 mL/min。右泵輸送泵流動相C（0.1%甲酸）和流動相D（乙腈）， 梯度洗脫程序：? 0～4 min， 95%～86%B; 4～15 min， 86%～70% B; 15～23 min， 70%～50% B; 23～28 min， 50%～47% B; 28～34 min， 47%～43%B; 34～44 min， 43%～42%B; 44～56 min， 42%B; 56～60 min， 42%～21%B; 60～60.1 min， 21%～95%B; 60.1～66 min， 95%B; 總流速為0.7 mL/min。色譜柱均置于35℃柱溫箱中， 進樣量2 μL。

2.2.3 Qtrap-MS條件 電噴霧離子源（ESI）， 正離子多反應監測模式。氣簾氣： 35.0 psi （1 psi=6.89 kPa）; 碰撞氣： 高; 噴霧電壓： 5500 V; 霧化氣： 55 psi; 輔助氣： 55 psi; 霧化溫度： 550℃; 脫離子簇電壓（DP）： 100 V; Q1和Q3均為單位分辨率（0.6～0.8 Da）。每個離子對的采集時間（Dwell time）為10 ms。所有預測離子對、 相關質譜參數及對應的化學結構均來自于課題組前期報道[23]。每個化合物均采用兩對離子對（定量離子對和定性離子對）進行檢測。由于對映異構體質譜行為完全一致， 而同分異構體的定量離子對和定性離子對豐度比值常存在顯著差異[15，34]。因此， 本研究通過兩對離子對響應值比例（QQR）判定兩個色譜信號是否為對映異構體[34]。利用數據依賴性采集模式（IDA）觸發增強子離子掃描（EPI）模式采集各母離子的MS2圖譜。EPI實驗參數設置為： 碰撞能（CE）， 40 eV; 碰撞能量分散（CES）， 35 eV。利用Analyst 1.6.2軟件對質譜數據進行分析。

3 結果與討論

3.1 液相色譜方法的建立

在前期建立反相色譜和親水作用色譜直接耦聯系統的過程中[16]， 測試了多個色譜柱， 選擇內徑小、 柱效高的反相色譜柱作為前端分離柱， 分離效果更佳。因此， 本實驗篩選了多個候選色譜柱， 并利用Predictive MRM模式進行化學成分的測定， 以色譜峰的形狀、 分離度作為指標衡量色譜柱的分離效能。較之Phenomenex Kinetex-C18 shell column （100 mm×2.1 mm， 2.6 μm， 美國Phenomenex公司）、 ACE UltraCore 2.5 Super C18 column （150 mm×3.0 mm， 2.5 μm， 英國Advanced Chromatography Technologies公司）、 Waters Acquity UPLC HSS T3 column （100 mm×2.1 mm， 1.8 μm， 美國Waters公司）等多款核殼型或新型填料高效色譜柱， 本研究選擇的Capcell core RP-C18色譜柱能夠較好地分離具有相似結構的APs， 包括同分異構體， 如Pteryxin （Pte）和Praeruptorin A （PA）、 Imperatorin和Isoimperatorin等。進一步優化了流動相洗脫程序、 流動相流速及流動相改性劑， 結果表明， 2.2.2節的洗脫程序和流速能使大多數色譜信號達到基線分離， 并且0.1%甲酸作為水相改性劑可以有效改善峰形， 典型圖譜如圖2A所示。

由于手性色譜柱對手性化合物手性中心的化學環境選擇性較高， 因此， 本研究選用已被證明對APs對映異構體具有較好分離效果的AD-RH色譜柱[19，25，27，35]進行立體選擇性分離， 其反相分離機制所需的流動相組成可與RP-C18兼容， AD-RH色譜柱和Capcell core RP-C18色譜柱都基于反向色譜分離機制， 樣品從第一維洗脫后， 由于流動相不匹配， 需要經過稀釋， 降低流動相中溶劑的強度， 二者均使用水和乙腈作為流動相， 通過優化洗脫程序， 兩者耦聯時溶劑可具有良好的兼容性。在前期研究中， 還發現3′S構型能被AD-RH色譜柱率先洗脫[19]。C-3′和C-4′的取代基團越大， 分離效果越差， 需采用更低比例的有機相、 提高洗脫時間才能達到較好分離， 而這些分離度較差的對映異構體在RP-C18色譜柱上常表現出較好的色譜保留。因此， 本研究在RP-C18和AD-RH色譜柱之間引入稀釋泵， 逐步降低有機相比例， 并采用0.7 mL/min的流速梯度洗脫， 實現對映異構體良好的手性分離。Achiral-chiral-predictive MRM典型色譜圖見圖2B 。

3.2 異構體的判別

在沒有標準品的情況下， 雖然保留時間可以作為化合物判定的依據， 但確認所檢測的信號是否來自目標分析物仍具有挑戰。通過定量離子對和定性離子對比值（QQR）結合MS2質譜信號對化合物進行雙重鑒定以增加結構判定的準確性。本研究組前期工作已經證明3′S構型能被AD-RH色譜柱率先洗脫[19]， 根據定量離子對和定性離子對的比值判定是否為對映異構體[15，34]， 并且對映異構體在achiral-chiral系統上的保留時間大于在單柱RP-C18色譜柱上的保留時間， 本研究發現cis-Khellactone （CKL， 5 vs. 6）、 Qianhucoumarin G （QC-G， 7 vs. 8）、 Oxypeucedanin hydrate （OPH， 9 vs. 10）、 3′-Angeloyloxy-4′-oxo-3′，4′-dihydroseselin （AOD， 27 vs. 30）、 Pte （35 vs. 40）、 PA （37 vs. 41）、 cis-3′-Isovaleryl-4′-acetylkhellactone （IAK， 39 vs. 44）、 Qianhucoumarin J （QC-J， 42 vs. 45）、 Praeruptorin B （PB， 52 vs. 54）、 Praeruptorin E （PE， 55 vs. 58）、 cis-3′，4′-diisovalerylkhellactone （DIK， 59 vs. 60） 共11對對映異構體， 均獲得了較好的立體選擇性分離。除QC-G和OPH為線性呋喃香豆素類化學成分， 其余9對對映異構體均為APs， 且為CKL的衍生物。以PA為例， 定量離子對和定性離子對分別為m/z 409>227和m/z 409>245， 首先通過針泵注射將化合物注入質譜儀， 對PA標準品進行含量測定， 經過計算PA的QQR=1.82。隨后對前胡樣品進行分析， 利用構建的Achiral-chiral系統實現化學成分的立體選擇性分析， 發現PA通過手性柱拆分得到兩種成分， 分別為（3′S）-PA和（3′R）-PA，? 計算得到兩者的QQR均為1.82， 結合碎片離子進行驗證， 判定二者為對映異構體?；衔颬A的定量和定性分析色譜圖如圖3A所示， MS2質譜信息如圖3B所示。值得注意的是， Pte和PA的對映異構體在中心切割非手性-手性二維液相中未能獲得較好分離， 但在Achiral-chiral系統中獲得了較好的手性分離。

3.3 結構鑒定及質譜裂解規律

3.3.1 前胡化學結構表征 由于本研究采用預測多反應監測模式檢測各化學成分， 預測離子對在編入檢測離子隊列（Monitoring list）均對應了可能的化學結構（Putative identity）。因此， 只需要利用EPI提供的MS2圖譜中的主要碎片離子結合質譜裂解規律對化合物結構進行確證即可。同時， 利用3.2節規定的對映異構體的定量離子對和定性離子對的比值應完全一致判定對映異構體[15，34]。對所有響應值大于500 cps且信噪比（S/N）大于100的信號進行結構確證， 初步鑒定了61種化學成分。各化合物的保留時間、 預測離子對、 主要碎片離子以及可能的化學結構見表1。

APs為中藥前胡的主要化學類型， 此外還含有少量的線性呋喃香豆素（LFs）、 角型呋喃香豆素（AFs）、 簡單香豆素（SCs）等其它化學類型[22]。對于線性呋喃香豆素、 角型呋喃香豆素、 簡單香豆素等化學類型[36，37]， 其質譜裂解規律已被廣泛報道， 特征性裂解途徑主要由取代基引起。在正離子模式下， 香豆素類化合物易產生準分子離子峰[M+H]+或加合離子峰[M+Na]+及[M+NH4]+。大部分APs的C-3′和C-4′為順式構型， 由結構母核cis-khellactone在C-3′和C-4′的羥基結合不同的酰基（R和R′）生成， 如當歸?；?、 千里光?；?乙酰基、 正丁酰基、 異戊酰基等[22]。對于LFs， 主要由于C-5和C-8位取代基的不同， 從而生成不同的化學結構， 如異戊氧基、 甲氧基、 糖基等。

3.3.2 角型吡喃香豆素類 從前胡提取物中共鑒定出46個APs， 包括9對對映異構體（5和6、 27和30、 35和40、 37和41、 39和44、42和45、52和54、 55和58、 59和60）， 大部分為CKL的衍生物， 通過QQR和MS2碎片對比驗證，? 確定對映異構體的結構。對于APs， C-3′和C-4′的羥基結合不同的取代基生成不同的化學結構， 母離子進入碰撞池（Collision cell）后， 具有較大共軛體系分散電荷的子離子常顯示出較高的豐度。由于C-4′處于香豆素母核的芐位， 可通過香豆素母核分散電荷， 形成更為穩定的子離子。因此， APs先從C-4′中性丟失R′COOH， 進而從C-3′中性丟失（R-H）CO形成特征性碎片離子m/z 245， 并進一步通過中性丟失水分子形成另一個特征性碎片離子m/z 227。例如， Praeruptorin E（PE）為CKL的雙酯化產物， 在C-3′和C-4′位分別為當歸?；彤愇祯；〈?分子式為C24H28O7， 準分子離子峰m/z 451[M+Na]+， 主要的碎片離子為m/z 329[M+H-C4H9COOH]+、 m/z 327[M+H-C4H7COOH]+、 m/z 245[M+H-C4H9COOH-C4H6CO]+和m/z 227[M+H-C4H9COOH-C4H7COOH]+， 分別由母離子中性丟失C5H10O2（100 Da）、 C5H8O2（100 Da）和C4H6CO（60 Da）， 進一步中性丟失H2O（18 Da）而得， 最終得到特征性碎片離子m/z 245和m/z 227。從PE二級質譜圖（圖4A）中可知，? m/z 327的碎片離子響應很高， 說明具有較大共軛體系分散電荷的子離子顯示出較高的豐度。PE二級質譜圖和可能的裂解途徑如圖4所示。當C-3′或C-4′為羰基時， 如AOD， 還可觀察到m/z 261和m/z 243的特征性碎片離子。

3.3.3 線型呋喃香豆素類 除APs外， 前胡中還含有少量的LFs化學成分。從前胡中共鑒定出12個LFs，? 其中包括2對對映異構體， 分別為化合物QC-G （7 vs. 8）和OPH （9 vs. 10）， 為首次從前胡中鑒定得到的對映異構體。LFs通常在C-5或C-8位有取代基取代， 常見的取代基有異戊氧基、 甲氧基、 羥基、 糖基等。C-5或C-8取代基通過中性丟失而形成碎片離子 m/z 203， 隨后進一步中性丟失CO （28 Da）和CO2（44 Da）， 分別產生m/z 175 和m/z 159的特征性碎片離子。以歐前胡素（Imperatorin）為例， 其分子式為C16H14O4， 準分子離子峰m/z 271[M+H]+， C-5位具有異戊氧基取代， MS2圖譜可見m/z 203[M+H-C2H6O]+、 175[M+H-C2H6O-CO]+、 159[M+H-C2H6O-CO2]+、 147[M+H-C2H6O-2CO]+的碎片離子， 提示中性丟失C2H6O（46 Da）、 CO（28 Da）和CO2（44 Da）。Imperatorin二級質譜圖和可能的裂解途徑如圖5所示。化合物水合氧化前胡素（Oxypeucedanin hydrate）也為線性呋喃香豆素， C-5位具有2′′，3′′-二羥基異戊氧基取代， 其主要質譜行為由此取代基產生。母離子m/z 305[M+H]+進入碰撞池后， 首先發生中性丟失C2OH6（46 Da）， 進一步中性丟失C2O2（56 Da）， 分別產生子離子m/z 259和m/z 203。

4 結 論

建立了Achiral-chiral LC-predictive MRM系統， 并將其應用于富含對映異構體的中藥前胡化學成分組成的深入解析。非手性-手性色譜直接耦聯系統集成了RP-C18色譜柱的高效分離能力以及手性色譜柱的立體選擇性分離優勢， 有效地避免了中心切割非手性-手性二維液相構造復雜、 精密度差等缺陷。采用小內徑核殼型RP-C18色譜柱作為前端化學分離柱， 實現了結構類似香豆素的高效化學選擇性分離; 通過在手性柱前引入稀釋泵， 構建適用于手性選擇性分離的洗脫程序; 采用反相大內徑AD-RH手性色譜柱， 實現了對映異構體的手性拆分。采用預測多反應監測模式實現化學成分的高靈敏度檢出， 并利用增強子離子掃描模式采集各色譜峰的MS2圖譜， 結合質譜裂解規律進行結構確證。從中藥前胡中鑒定了61種化學成分， 包括11對對映異構體， 其中46種化學成分為角型吡喃香豆素類化合物。Achiral-chiral LC-predictive MRM為含有對映異構體的中藥前胡及其它復雜樣品的深入定性與定量分析提供了可靠的方法。

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Chemical Profiling of Peucedani Radix by Achiral-chiral

Liquid Chromatography-Predictive Multiple Reaction Monitoring

XU Xia1， LI Ting1， CAO Li-Bo1， JIA Jin-Ru1， GONG Xing-Cheng1， LI Jun1，2，

TU Peng-Fei1， WANG Yi-Tao3， SONG Yue-Lin1，2

1（Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine， School of Chinese Materia Medica，

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

2（Beijing Key Lab for Quality Evaluation of Chinese Meteria Medica，

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

3（State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine， Institute of Chinese Medical Sciences，

University of Macau， Taipa 999078， Macao， China）

Abstract Peucedani radix and other herbal medicines are not only complex in chemical composition， but also often contain a large number of enantiomers， and there are often differences in content of enantiomers. In this work， a new analytical platform namely achiral-chiral liquid chromatography （LC）-predictive multiple reaction monitoring was firstly configured for chemo- and enantio-selective separation of the components in Peucedani Radix， a well-known herbal medicine. Serially coupled achiral LC and chiral LC integrated the robust separation potential of RP-C18 column along with the enantio-separation advantage from chiral column， thus addressing the disadvantages of heart-cutting achiral-chiral two dimensional LC in terms of sophisticated instrumentation and unsatisfactory precision. The narrow-bore core-shell RP-C18 column was served as the front tool to accomplish efficient chemo-selective separation within those coumarins bearing similar chemical structures， a dilution pump was introduced between the two columns to facilitate the optimization of optimum elution program from the chiral column， and a wide-bore chiral column offered the enantio-separation potential for those enantiomers. Predictive MRM mode was deployed to sensitively detect the chemical components， and the enhanced product ion program was utilized to acquire MS2 spectra for all signals. Structure confirmation was conducted by matching the fragment ion species with the well-proposed fragmentation rules. As a result， 61 components， in total， were found from Peucedani Radix， including eleven pairs of enantiomers. Above all， achiral-chiral LC-predictive MRM is a promising tool for the quantitative and qualitative analysis of the complicated matrices， beyond herbal medicines， which are featured by enantiomerically enriched mixtures.

Keywords Achiral-chiral liquid chromatography; Predictive multiple reaction monitoring; Enantioseparation; Angular-type pyranocoumarins; Chinese medicine; Peucedani radix

（Received 11 August 2020; accepted 14 September 2020）

This work was supported by the National Key Research and Development Project of China （No. 2018YFC1707300）， the National Natural Science Foundation of China （Nos. 81773875， 81530097）， the Young Elite Scientists Sponsorship Program by CAST （No. 2017QNRC001）， the Young Scientist Program by Beijing University of Chinese Medicine （No. BUCM-2019-QNKXJB006）， and the Fundamental Research Funds for the Central Universities， China （No. 2020-JYB-ZDGG-041）.

2020-08-11收稿; 2020-09-14接受

本文系國家重點研發計劃項目（No. 2018YFC1707300）、 國家科學自然基金項目（Nos. 81973444， 817738757）、 中國科協青年人才托舉工程項目（No. 2017QNRC001）、 北京中醫藥大學青年科學家培育計劃項目（No. BUCM-2019-QNKXJB006）和中央高?；究蒲袠I務費專項資金（No. 2020-JYB-ZDGG-041）資助

* E-mail： syltwc2005@163.com