虎人工繁育種群病毒性傳染病的流行病學與防制現狀

連曉歡 孫藝學 叢彥龍*

(1.吉林大學動物醫學學院，長春，130062；2.吉林省畜牧獸醫學研究院，長春，130062)

虎(Pantheratigris)作為一種珍貴的大型貓科(Felidae)動物，是亞洲特有的動物之一，也是中國國家Ⅰ級保護動物。作為我國的瀕危物種，虎具有重要的科研、觀賞和社會價值。20世紀五六十年代，由于人們的瘋狂捕殺，使得虎的數量急劇下降。虎只有一個種，目前生活在我國境內的有東北虎(Pantheratigrisaltaica)、印支虎(Pantheratigriscorbetti)、孟加拉虎(Pantheratigristigris)、華南虎(Pantheratigrisamoyensis)等4個亞種。全國圈養虎的數量約2 000只左右，但是每個亞種的野生數量極少。據2006年統計，我國東北虎只有30—35只，印支虎30—40只，孟加拉虎30—35只[1]。而2010年統計時，我國野生虎僅有50—60只[2]。截止到2016年的統計數據顯示，在中國和俄羅斯的邊境地區尚有20只左右的野生東北虎，在西雙版納有印支虎分布，但是數量十分稀少，而孟加拉虎已經蹤跡難覓，華南虎更是野外絕跡[3]。

近年來，我國對虎的生存保護措施已經逐步完善，但是由于病原的自然感染或食源性感染，能夠引發圈養虎發病甚至死亡的病毒性傳染病越來越多。貓泛白細胞減少癥、犬瘟熱、流感、貓傳染性鼻氣管炎、貓杯狀病毒感染、犬副流感等病毒性傳染病對虎的生存和種群的延續造成了嚴重威脅。為了認識和了解這些傳染病對虎的危害，本文歸納總結了這些虎傳染病的流行情況及其防治現狀，以期為虎的傳染病防護工作提供疫病的本底信息和參考依據。

1 虎重要病毒性傳染病

1.1 貓泛白細胞減少癥

貓泛白細胞減少癥(feline panleukopenia，FP)是由貓泛白細胞減少癥病毒(feline panleukopenia virus，FPV)引起的一種高度接觸性傳染病。FPV又稱貓細小病毒、貓傳染性腸炎病毒或貓瘟熱病毒。研究發現，FPV在自然條件下能夠感染多種野生貓科動物，如虎、獅(Pantheraleo)、豹(Pantherapardus)、浣熊(Procyonlotor)以及水貂(Neovisonvison)等[4]。臨床上該病以高熱、嘔吐、腹瀉、脫水、白細胞嚴重減少及出血性腸炎為主要特征[5]。研究表明，FPV能夠導致所有貓科動物產生致死性腸炎，特別對幼年的虎、獅等傳染性最強，在未免疫的虎群中具有高發病率和致死率[6-8]，極大地威脅圈養及野生虎等大型貓科動物的健康[9]。

1986年，夏咸柱等[10]首次在滬杭動物園的華南幼虎體內分離到FPV。2000年，邱薇等[11]用貓腎細胞F81從桂林某野生動物養殖場的感染幼虎糞便樣品中分離獲得了1株FPV。2008年，Yang等[6]對我國不同地區野生動物園的總計207只虎進行了FPV血清學調查，發現FPV抗體陽性率高達53.1%。2012年，Goodrich等[12]的血清流行病學調查顯示，俄羅斯野生東北虎的FPV抗體陽性率為68%。2012年，靳小霞等[13]檢測了來自我國各地151只虎的血清FPV抗體情況，結果顯示陽性率為47.7%。2017年，王海軍等[14]對哈爾濱、長春及沈陽3個虎園的75只東北虎的血清進行了檢測，發現FPV抗體陽性率均為100%。以上研究表明，貓泛白細胞減少癥自1986年以來一直普遍存在于我國虎群中。

目前，已經有市售FP的弱毒疫苗和滅活疫苗，但是未見有這些疫苗應用于虎的報道。國內對虎源FPV的疫苗研究主要集中在滅活苗和新型疫苗的研制。2006年，楊松濤課題組通過Western-blotting實驗證明了在畢赤酵母中表達的FPV VP2部分蛋白片段，能夠與抗FPV血清發生特異性反應，說明利用原核表達的VP2蛋白用于虎FPV感染的特異性診斷及FPV亞單位疫苗的研制具有廣闊的前景[15]。2009年，于亞麗等[16]以FPV-HLJ為種毒研制出FPV滅活疫苗，給幼虎三免后抗體效價多數能達到1∶1 024，表現出較為理想的免疫效果。

1.2 犬瘟熱

犬瘟熱(canine distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(canine distemper virus，CDV)引起的犬科(Canidae)、鼬科(Mustelidae)和浣熊亞科(Procyoninae)動物的一種急性、烈性、致死率極高的傳染病[17-19]。該病的特征是雙相熱型，各黏膜的卡他性炎癥，后期可發生非化膿性腦膜腦脊髓炎，出現神經癥狀。目前，CD已呈世界性分布，以其高致病性與傳染性對全球犬只、毛皮動物和野生動物構成了巨大威脅[20-21]。

近年來，有關虎感染CDV自然發病的報道逐漸增多。1992年，美國舊金山Angeles國家保護公園暴發了一起虎和其他貓科動物感染CDV的案例，死亡率達22.97%[22]。1996年，上海動物園暴發了一起14只虎相繼感染CDV的案例，由此可以看出CDV在虎群中已經具有較強的傳播能力[23]。2003年，俄羅斯出現首例東北虎因感染CDV而死亡的病例[24]。同年，北京市某動物園的1只虎因感染了CDV而死亡[25]。2010年，俄羅斯錫霍特山脈自然保護區發現5只東北虎死于CDV感染[26]。2013年，Seimon等[27]通過RT-PCR對俄羅斯2001、2004、和2010年因CDV感染致死的5只東北虎的腦和淋巴組織樣品中分別擴增出CDV的H和P基因。2017年，王海軍等[14]對哈爾濱、長春及沈陽3個虎園75只東北虎的血清進行了檢測，結果顯示CDV的抗體陽性率達16.00%。自2010年以來，全球有近20只東北虎和孟加拉虎死于CD，因此，CD已經成為野生和圈養虎種群最新危害性疾病[28]。

目前，針對CD的防制已經有市售弱毒苗、滅活苗，以及單苗和聯苗可供選擇，針對虎的CD疫苗也有研究報道。例如，張賀等[21]將虎源CDV的F和H基因克隆至pcDNA3.1(+)表達載體上，經證實該重組疫苗可以誘導產生抗CDV的中和抗體，但免疫小鼠后血清抗體效價較低，因此，虎CD疫苗仍需研制。

1.3 流感

流感是由流感病毒(influenza virus，IV)引起的一種急性呼吸道人獸共患傳染病。由于其傳播速度快、傳播能力強，因此成為國際上第一個實現全球監測的傳染病[29]。目前，流感病毒分為A、B、C、D共4個血清型，其中A型流感病毒(influenza A virus，IAV)可自然感染鳥類(Aves)、豬(Sus)、馬(Equuscaballus)、東方蝙蝠(Vespertiliosinensis)、水貂、大熊貓(Ailuropodamelanoleuca)、貓科動物、海洋哺乳動物以及人類(Homosapiens)[30-31]，并且常在動物群體和人群中呈地方性流行甚至大流行，其中禽流感的危害最大[32-33]。

我國關于虎感染IAV的報道始于2003年，由夏咸柱等[34]首次從發病孟加拉虎的病料中分離到1株流感樣的病毒粒子，經生物學特性及基因檢測鑒定為A型H5N1亞型流感病毒。此后，國內外均有關于虎感染IAV的報道[35]。2004年，泰國的Suphanburi動物園虎群暴發了H5N1高致病性禽流感，418只虎中有146只被感染，并且表現出明顯的高熱、抽搐與肺炎等癥狀[36-37]。2010年，高玉偉等[38]對我國1998年以來，哈爾濱、桂林等多地304只圈養虎進行了H5亞型IAV抗體檢測和分析。結果顯示，2002—2003年采樣于上海、唐山、哈爾濱的34只虎中，有31只虎曾經有過典型的流感癥狀，其中24只虎H5血凝抑制抗體呈陽性，2只無臨床癥狀虎也為抗體陽性。2015年，崔艷芳等[39]從廣西壯族自治區南寧市動物園病死白虎的組織樣品中分離到一株H5N1禽流感病毒。2017年，王海軍等[14]發現東北三省75只東北虎H5和H9亞型禽流感抗體陽性率分別為9.33%和61.33%，但抗體呈陽性的東北虎均為健康個體，表明H5和H9亞型禽流感在東北虎群中呈隱性感染狀態，這對虎群的健康構成了嚴重威脅，已經成為影響虎群生存狀態的又一重要傳染病。目前，禽流感和人流感疫苗的研制工藝和防制效果均得到了公認，但是這些疫苗是否可以應用于虎則有待探究。

1.4 貓傳染性鼻氣管炎

貓傳染性鼻氣管炎(feline infectious rhinotracheitis，FIRs)又稱貓病毒性鼻氣管炎，是由I型貓皰疹病毒(feline herpesvirus type 1，FHV-1)感染引起的貓科動物的一種急性、高度接觸性傳染病，發病率可高達100%，死亡率達50%[40-41]。該病潛伏期短，感染動物臨床上以角膜結膜炎、上呼吸道感染和流產為特征[40]。患病動物可終生帶毒和排毒，且在一定的刺激下可以反復感染，更可垂直傳播，極具危害性[42]。

虎感染FIRs的臨床癥狀基本相似，初期表現為精神沉郁、打噴嚏、咳嗽、結膜炎、體溫升高等臨床癥狀[43-44]。2010年11月，陳大慶等[43]報道了蘇州動物園3只華南虎精神沉郁、食欲減退、流淚、流鼻涕等癥狀，經實驗室檢測結合臨床癥狀診斷為FIRs。2013年，肖建雄等[45]報道了廣東某動物園2只成年東北虎出現疑似感染FHV-1的癥狀，經抗生素治療無效，5 d后死亡，同時毗鄰的華南虎也出現疑似FIRs的癥狀，通過PCR等方法證明患病虎感染了FHV-1。2014年，Sun等[46]從1只華南虎的病料中分離到一株FHV-1。上述研究表明，FIRs不但具有感染虎的能力，而且能夠引起虎群的廣泛性感染，甚至能夠垂直傳播，因此對虎的繁育以及保護帶來極大威脅[45]。目前美國已有FHV-1弱毒苗可供應用，但該疫苗對虎的免疫防制尚未見報道。

1.5 貓杯狀病毒感染

貓杯狀病毒感染(feline calicivirus infection)是由貓杯狀病毒(feline calicivirus，FCV)感染引起的貓科動物的一種急性、高度接觸性傳染病[47]。患病動物可表現出精神沉郁、結膜炎、慢性口炎、呼吸道感染等多種臨床癥狀，與FIRs癥狀十分相似[48]。病貓和帶毒貓是該病的主要傳染源，病毒可隨宿主分泌物和排泄物排出體外，被感動物主要通過呼吸道結膜感染病毒[49]。

FCV目前已呈世界性分布，除了可以感染貓，還可以感染大型貓科動物，例如虎。1992年，Kadoi等[50]從舌和鼻患有潰瘍的東北虎的病料中分離到FCV。1997年，王祥生等[51]從南方某虎熊樂園60多只孟加拉虎、東北虎和華南虎體內首次分離到FCV。2000年，范泉水等[52]用貓腎傳代細胞從廣西地區的東北虎中分離到一株杯狀病毒樣病毒粒子，經序列比對鑒定為FCV。2003年，高玉偉等[53]從上海某動物園患有口腔潰瘍的虎的唾液中分離到該病毒。2019年，任燦斌等[47]報道了長沙生態動物園虎館中的3只白化孟加拉虎相繼感染了FCV。

目前國外已有FCV弱毒疫苗以及與FPV、FHV等組成的聯苗可供使用。目前應用于虎的多為FCV單價苗。Harrison等[54]研究發現，給9只虎免疫二價滅活苗后，其血清與VS-FCV毒株FCV-DD1的中和滴度更高，暗示二價疫苗可能具有更有效的保護力。

1.6 犬副流感

犬副流感(canine parainfluenza，CPI)是由犬副流感病毒(canine parainfluenza virus，CPIV)引起的一種犬的高度接觸性傳染病[55]。患病動物主要表現為體溫升高以及打噴嚏、咳嗽、流黏液性鼻涕等急性呼吸道炎癥，嚴重時可出現神經機能障礙，腦水腫甚至死亡。

CPIV的宿主范圍廣，從犬(Canis)、牛(Bos)、豬、鼠(Rattus)、兔(Lepus)、貓(Felis)到虎等野生動物[56]。1967年，Binn等[57]首次利用Vero細胞從患病犬的呼吸道中分離到該病毒。2003年，孫賀廷等[58]利用血凝抑制試驗證明在38份未免疫的虎血清中，有25份呈CPIV抗體陽性。2017年，翟俊瓊等[56]從廣州動物園疑似感染的東北虎、華南虎的血清樣品中分離獲得兩株病毒，經鑒定為CPIV。2019年，陳安妮等[59]于廣東省某動物園疑似感染CPIV死亡的孟加拉虎的病料中檢測到CPIV。雖然目前市場上有CPIV滅活疫苗及其多聯苗，但其對虎的防治效果尚待考證。

1.7 其他病毒病

除了上述6種比較重要的病毒性傳染病之外，還有很多病毒也能夠感染虎。2012年，李元果等[60]報道了某動物園數只美洲虎(Pantheraonca)出現厭食、委頓、偶見咳嗽、后肢運動遲緩等癥狀，通過特異性引物檢測，確診為偽狂犬病毒感染。2012年，Goodrich等[12]報道了一例虎同時感染貓冠狀病毒和貓免疫缺陷病毒的病例。2013年，Liu等[61]從1只突然發病死亡的華南虎的病料中分離到一株腦心肌炎病毒。2007年，吳長德等[62]采用PCR擴增了25只東北虎的朊病毒基因，結果發現大多數虎的朊病毒基因是高度保守的，但其中有2個核苷酸位點發生了變異。基因序列比對結果顯示，東北虎與綿羊(Ovisaries)的朊病毒基因具有很高的相似性，說明東北虎對羊癢病也可能具有易感性。

2 存在問題

野生動物保護關系到人類的生存與發展。華南虎和東北虎被“中國瀕危動物紅皮書”列為瀕危動物。針對虎的保護，亟須強化科技支撐，提高野生虎的種群數量。近年來，我國對虎，尤其是圈養虎的保護工作取得了重要進展，但仍面臨嚴峻挑戰，其中疫病本底不清、防控手段落后是亟待解決的主要問題之一。我國乃至世界對圈養虎病毒性傳染病的認識較晚，研究較少，仍然停留在臨床診斷、血清流行病學調查、病原分離等層面，缺乏系統的病毒溯源和遺傳演化分析，感染途徑亦不清楚。有些傳染病雖然已有商品化疫苗，但是它們主要適用于貓和犬，對虎的免疫防制效果還缺少科學評價，其中疫苗種毒與感染虎的病原在抗原性存在多大差異，這是是否有必要研制針對虎的特異性疫苗而有待回答的重要科學問題。