超高效液相色譜

張建平 呂警

關(guān)鍵詞水;吡蟲啉;代謝物;農(nóng)藥殘留

吡蟲啉，別名咪蚜胺，是一種新型高效氯代煙堿類廣譜殺蟲劑，優(yōu)點(diǎn)是高效、低殘留，是棉花、水稻、蔬菜及各種果樹防治害蟲的首選農(nóng)藥。作用機(jī)理為：吡蟲啉對昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)中的煙堿乙酰膽堿受體具有很強(qiáng)的殺蟲活性，干擾化學(xué)信號傳導(dǎo)，導(dǎo)致受體興奮、麻痹、死亡。吡蟲啉屬于易土壤降解農(nóng)藥，半衰期為4～11d，此外，水解也快，在堿性溶液中在比酸性溶液中水解更快，其在植物體內(nèi)主要代謝為吡蟲啉胍、吡蟲啉脲、烯式吡蟲啉、5-羥基吡蟲啉、6-氯煙酸。吡蟲啉在水域環(huán)境中分布廣泛，且對水生及陸生無脊椎動物（如底棲動物、蜉蝣稚蟲、甲殼蟲和蜜蜂等）具有致死作用。

吡蟲啉殘留的分析檢測方法較多，主要有液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，但其代謝物的檢測方法較少。研究了通過直接進(jìn)樣，用超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜快速測定水樣中吡蟲啉及其5種代謝物。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

Waters Acquity H-Class超高效液相色譜儀，xevo TQD三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源。

甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，所有實(shí)驗(yàn)用水均為超純水;吡蟲啉胍、吡蟲啉脲、吡蟲啉、烯式吡蟲啉、5-羥基吡蟲啉、6-氯煙酸標(biāo)準(zhǔn)品均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液

分別移取濃度為100Ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml，用乙腈在100ml棕色容量瓶中定容至刻度，得1.0Ng/ml標(biāo)準(zhǔn)儲備液。標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙腈水（1：1）稀釋成濃度為1 00 gg/l中間使用溶液混標(biāo);分別吸取0.20、1.00、2.00、5.00，10.00 ml上述中間使用溶液于10ml容量瓶中，用乙腈水（1：1）定容至刻度。此系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為2.0ml、10.0ml、20.0m1、50.0ml、100.0μg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3樣品采集與處理

試驗(yàn)用樣品為環(huán)境水樣，用干凈的100ml棕色玻璃瓶采集，4℃冷藏保存，72h內(nèi)分析。樣品用一次性注射器抽取水樣，用0.22μm PVDF濾膜過濾，然后加入等體積的乙腈，裝入進(jìn)樣瓶中直接分析。

1.4超高效液相色譜分析條件

色譜柱為AcquityUPLC RPl8（2.1mnlxl50 mm，1.7m）;柱溫為350c，流動相為乙腈（A）和0.1%甲酸水（B），進(jìn)樣量為5，流動相梯度洗脫程序見表1。

1.5串聯(lián)質(zhì)譜分析條件

離子源為電噴霧電離源（ESI）;毛細(xì)管電壓3.2 kV;離子源溫度120℃：脫溶劑氣溫度3200c;脫溶劑氣流量900 L/h：錐孔氣流量50 L/h：采用多反應(yīng)離子監(jiān)測模式（HRH），吡蟲啉及其5種代謝物的多反應(yīng)監(jiān)測（HRH）條件見圖1、表2。

1.6線性關(guān)系及檢出限

在上述色譜條件下，對不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，得到響應(yīng)值，以響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，吡蟲啉及其5種代謝物在2～100μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999，其線性方程、相關(guān)系數(shù)見表3。

按照HJ 168-2020要求，并考慮儀器靈敏度，重復(fù)7次空白試驗(yàn)，將測定結(jié)果換算為樣品中的含量，計算7次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差S，按公式MDL=3.143×S計算方法檢出限（表3）。

1.7精密度與準(zhǔn)確度

用蒸餾水按照以上檢測方法進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，添加3個不同水平的混合標(biāo)樣，每個添加濃度重復(fù)7次，計算添加回收率以及測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（表4）。精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)顯示采用該方法測定平均回收率在70.0%～100%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%～8.0%，符合殘留分析的要求。

2結(jié)論

建立了超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定水樣中吡蟲啉及其5種代謝物的多殘留檢測方法，該方法簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，具有良好的靈敏度和理想的精密度，具有顯著的實(shí)用價值。經(jīng)精密度試驗(yàn)和方法驗(yàn)證試驗(yàn)，證明該方法完全滿足殘留檢測的要求，適合于環(huán)境水樣中吡蟲啉及其代謝物殘留的同時檢測。