索磷布韋片在中國(guó)健康人體中生物等效性和安全性評(píng)價(jià)

劉廣文， 高振月， 于 爽， 薛金玲， 梁文忠， 蘭 靜， 楊海淼

1 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 Ⅰ期臨床試驗(yàn)研究室， 長(zhǎng)春 130021； 2 正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，s南京 210000； 3 上海藥明康德新藥開發(fā)有限公司， 上海 215000

HCV是一種感染覆蓋全球的肝炎病毒[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV感染率約3%，感染人數(shù)高達(dá)1.95億人[2]。據(jù)報(bào)道，到2025年相關(guān)死亡率將增加2倍[3]，我國(guó)的HCV發(fā)病率為0.06‰，2010年福建部分地區(qū)高達(dá)6.01%[4]，每年由HCV導(dǎo)致的肝硬化、肝細(xì)胞癌死亡大約有70萬人[5-6]。 目前國(guó)際上尚無有效且有針對(duì)性的丙型肝炎疫苗可供使用，因此抗HCV藥物治療對(duì)防治CHC顯得尤為重要[7]。 長(zhǎng)時(shí)間以來，干擾素聯(lián)合利巴韋林是我國(guó)抗病毒治療無禁忌證的所有基因型HCV感染者的主要方案[8]，直接抗病毒藥物(DAA)的出現(xiàn)標(biāo)志著慢性丙型肝炎的抗病毒藥物治療取得重大進(jìn)展。

在我國(guó)基因1型HCV感染者的治療方案中，以索磷布韋為基礎(chǔ)的DAA聯(lián)合應(yīng)用占有很大比重[9]。國(guó)外臨床研究[10]顯示，索磷布韋對(duì)HCV具有較好的抑制作用，不僅如此，還具有服藥方便，適應(yīng)證廣、周期短、作用快、不良藥物反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)[11]。截至目前，我國(guó)尚無國(guó)產(chǎn)仿制的索磷布韋片獲批上市，亦未見在中國(guó)健康人群中開展仿制藥物的生物等效性相關(guān)報(bào)道和信息數(shù)據(jù)。本研究根據(jù) 《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[12]以及美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局2013年頒布的“行業(yè)指南：根據(jù)ANDA草案指南提交的具有藥代動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)的藥物的生物等效性研究”[13]，評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口的兩種藥物的生物等效性，為臨床合理選用藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器 受試藥物：索磷布韋片，規(guī)格0.4 g/片，批號(hào)180514302，正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)；參比藥物：索磷布韋片索華迪(SOVALDI)400 mg/片，批號(hào)17SB001D，Gilead Sciences Ireland UC公司生產(chǎn)。

LC-30AD 高效液相色譜系統(tǒng)由Shimadzu公司提供，API 6500和API 6500+檢測(cè)器由Applied Biosystems/Sciex制造商提供。

1.2 受試者選擇 健康受試志愿者均通過長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床試驗(yàn)招募報(bào)名平臺(tái)征集，空腹組和餐后組分別在2018年9月18日和9月28日集中進(jìn)行受試者的篩選體檢，體檢結(jié)果符合納入標(biāo)準(zhǔn)后入組。空腹組和餐后組各入選40例，其中空腹組有1例完成第一周期試驗(yàn)后退出，最終39例完成試驗(yàn)；餐后組有1例完成第一、二周期試驗(yàn)后退出，最終39例完成試驗(yàn)。空腹組40例中男19例，占比47.5%，年齡(42.6±6.54)歲，BMI(24.39±2.22)kg/m2。餐后組40例中男21例，占比52.5%，年齡(38.3±7.7)歲，BMI(24.39±2.22)kg/m2。

受試者均符合研究方案中所規(guī)定的入選標(biāo)準(zhǔn)，均無既往病史，無藥物濫用史。受試者給藥前檢查結(jié)果均為正常或無臨床意義異常，藥物濫用篩查結(jié)果未見陽性。試驗(yàn)前2周內(nèi)未服用任何其他藥物，受試者入住病房期間均統(tǒng)一飲食，禁止劇烈活動(dòng)，整個(gè)試驗(yàn)期間禁煙、禁酒、咖啡、茶等可能影響藥物代謝的食物或飲料。

1.3 給藥方案、血樣采集與檢測(cè)單位檢測(cè)采血點(diǎn) 本試驗(yàn)按單中心、隨機(jī)、開放、單次給藥、四周期、完全重復(fù)交叉健康人體空腹/餐后狀態(tài)下給藥設(shè)計(jì)。空腹組和餐后組受試者均隨機(jī)分為2組，口服受試藥物或參比藥物索磷布韋片，溫水240 ml送服。索磷布韋的消除半衰期約為0.4 h，清洗期設(shè)定為8 d，>7倍半衰期以上。

每周期藥代動(dòng)力學(xué)血樣采集第一天服藥前后2 h禁止飲水(高脂餐和服藥飲用水除外)，4 h后進(jìn)午餐，10 h后進(jìn)晚餐，中午、晚上均給標(biāo)準(zhǔn)餐，每周期的用餐計(jì)劃應(yīng)保持一致，給藥后，由研究人員對(duì)受試者口腔進(jìn)行檢查，以確保藥物服用。藥代動(dòng)力學(xué)血樣采集空腹組及餐后組均在給藥前0 h(60 min內(nèi))及給藥后5 min、10 min、15 min、20 min、30 min、45 min、1 h、1.25 h 、1.5 h、1.75 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h 共21個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集靜脈血。每點(diǎn)應(yīng)用EDTA-K2真空抗凝采血管采集4 ml,輕柔顛倒混勻5次，約2500 r/min離心，離心10 min后，分離血漿，先存入-40 ℃冰箱中，24 h內(nèi)轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱儲(chǔ)存，冷鏈運(yùn)輸至檢測(cè)單位待測(cè)。

檢測(cè)單位分別檢測(cè)原形物索磷布韋及其主要代謝物GS-331007。二者采血時(shí)間點(diǎn)如下，索磷布韋：給藥前0 h(60 min內(nèi))及給藥后5 min、10 min、15 min、20 min、30 min、45 min、1 h、1.25 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h共15個(gè)時(shí)間點(diǎn)。代謝物GS-331007：給藥前0 h(60 min內(nèi))及給藥后15 min、45 min、1.25 h、1.5 h、1.75 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h共16個(gè)時(shí)間點(diǎn)。

1.4 分析方法

1.4.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T3,1.8 μm, 2.1 mm × 100 mm ，柱溫設(shè)置為50 °C；流動(dòng)相A：0.1%甲酸，流動(dòng)相B：乙腈含/甲醇溶液(30/70，V/V)。流速：0.4500 ml/min，進(jìn)樣量：5.0 μl。

1.4.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源(ESI)，正離子模式(positive)，多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM)；3000 V；離子源溫度550 ℃；離子源噴霧電壓(IS)：4500 V；氣簾氣(CUR)：35 psi；離子源氣體1(GS1)：70 psi；離子源氣體2(GS2)：70 psi；分辨率Q1/Q3(Resolution Q1/Q3)：Unit/Unit；碰撞氣(CAD)：9.00 unit；選擇監(jiān)測(cè)離子對(duì)分別是530.2/243.1(索磷布韋)和534.2/247.1(GS-331007)，索磷布韋-13C-d3和GS-331007-13C-d3；去簇電壓(DP)分別為60 V、50 V、40 V、40 V；入口電壓(EP)均為10 V；碰撞能量(CE)分別為66 eV、63 eV、20 eV、25 eV；出口電壓(CXP)分別為29 V、15 V、14 V、14 V。

1.4.3 血漿樣品的預(yù)處理與測(cè)定 取含藥物血漿50.0 μl，搖板機(jī)上搖約5 min充分混勻，加入(25.0 μl內(nèi)標(biāo)工作溶，加入250 μl的乙腈/甲醇(3/1，V/V)溶液，搖板機(jī)上搖約15 min充分混勻，并在約4 ℃、4000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移50.0 μl上清液至一新的96孔板中，向樣本中加200 μl水溶液，搖板機(jī)上搖約10 min充分混勻，進(jìn)樣，進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備液與內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的配置 索磷布韋標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備液的配置：稱2.139 mg的索磷布韋標(biāo)準(zhǔn)品溶于2107.5 μl DMSO溶劑，得到校正后的終濃度為1.00 mg/ml的儲(chǔ)備液(15Nov18_A_S1)。GS-331007標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備液的配置：稱3.015 mg的GS-331007標(biāo)準(zhǔn)品溶于2945 μl DMSO溶劑，得到校正后的終濃度為1.00 mg/ml的儲(chǔ)備液(15Nov18_B_S1)。精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品儲(chǔ)備液，采用人血漿樣品稀釋，得到索磷布韋濃度為5、10、25、125、500、2000、4000、5000 ng/ml和GS-33100濃度為10、20、50、250、500、2000、4000、5000 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品濃度值。以上配置的儲(chǔ)備液裝入透明玻璃瓶中，于-20 ℃保存。

索磷布韋-13C-d3儲(chǔ)備溶液的配置：將1 mg的索磷布韋-13C-d3標(biāo)準(zhǔn)品溶于986 μl DMSO溶劑。得到校正后的終濃度為1.00 mg/ml的儲(chǔ)備液。GS-331007-13C-d3儲(chǔ)備溶液的配置：稱1 mg的GS-331007-13C-d3標(biāo)準(zhǔn)品溶于990 μl DMSO溶劑得到校正后的終濃度為1.00 mg/ml的儲(chǔ)備液。

1.5 倫理學(xué)審查 本試驗(yàn)方案由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批號(hào)：CCZYFYLL2018S審字-90，所有受試者均在充分知情后自愿簽署知情同意書。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)采用WinNonlin 7.0版本的非房室模型(non-compartmental analysis，NCA)，根據(jù)實(shí)際采樣時(shí)間點(diǎn)計(jì)算，包括索磷布韋Cmax、AUC0-t、AUC0-inf、Tmax、λz、t1/2、CL/F、Vd/F、%AUCex和代謝物(GS-331007)Cmax、AUC0-t、AUC0-inf、Tmax、λz、t1/2、CL/F、Vd/F、%AUCex。使用SAS 9.4軟件版本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用90%CI分析數(shù)據(jù)。與參比制劑比較，受試制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(Cmax、AUC0-t、AUC0-inf)的幾何平均值90%CI均在80%～125%，可以認(rèn)為2種制劑的藥動(dòng)學(xué)主要參數(shù)無顯著性差異，即生物等效。空腹和餐后狀態(tài)的生物等效性試驗(yàn)分開進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)評(píng)價(jià)

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法學(xué)驗(yàn)證由上海藥明康德新藥開發(fā)有限公司完成，該方法符合中國(guó)藥典生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則[14]的要求。

2.1.1 專屬性 通過分別測(cè)試索磷布韋和GS-3310076對(duì)6個(gè)不同來源空白基質(zhì)、待測(cè)物對(duì)內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)對(duì)待測(cè)物均無干擾。說明具有良好的專屬性。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量下限 以分析物(索磷布韋和GS-331007)與內(nèi)標(biāo)(索磷布韋-13C-d3和GS-331007-13C-d3) 的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)，用加權(quán)(W=1/x2)最小二乘法以血漿中分析物的質(zhì)量濃度(x)與峰面積比(y)進(jìn)行線性回歸，索磷布韋血藥濃度在5～5000 ng/ml呈良好線性關(guān)系，最低定量下限(LLOQ)為5 ng/ml；GS-331007血藥濃度在10～5000 ng/ml呈良好線性關(guān)系，LLOQ為10 ng/ml。

2.1.3 精密度和準(zhǔn)確率 按照標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備液的操作流程，配置索磷布韋5個(gè)濃度(5、15、250、2500和3750 ng/ml)和GS-331007的5個(gè)濃度(10、30、500、2500和3750 ng/ml)的質(zhì)控樣品；均按照血漿的預(yù)處理與測(cè)定進(jìn)行處理和分析，分批次制備并分別測(cè)定3 d得到質(zhì)控樣品的濃度，計(jì)算本方法的精準(zhǔn)度和準(zhǔn)確率，結(jié)果見表1 。

表1 精準(zhǔn)度和準(zhǔn)確度結(jié)果

2.1.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 配制中間溶液，參照樣品處理過程，計(jì)算真實(shí)質(zhì)控樣品(L、M、H)萃取后化合物與內(nèi)標(biāo)最終在儀器進(jìn)樣的理論濃度值，根據(jù)理論濃度進(jìn)行稀釋，精確量取10.0 μl LQC、MQC、HQC工作液和100 μl內(nèi)標(biāo)工作液混合，使用5490 μl的水分別稀釋得到N-LQC、N-MQC、 N-HQC。經(jīng)提取后的樣品用配制的真實(shí)質(zhì)控樣品(L、M、H)按照樣品處理過程萃取后獲得。提取回收率計(jì)算：在提取后的質(zhì)控樣品中待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的峰面積除以空白血漿提取物與凈溶液混合后待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值。提取的樣品中，高濃度待測(cè)物索磷布韋提取回收率均值118.5%，CV為2.9%，高濃度待測(cè)物GS-331007提取回收率均值95.6%，CV為4.8%。中濃度待測(cè)物索磷布韋提取回收率均值118.6%， CV為1.8%，中濃度待測(cè)物GS-331007提取回收率均值93.5%，CV為2.2%。低濃度待測(cè)物索磷布韋提取回收率均值112.3%，CV為5.5%，低濃度待測(cè)物GS-331007提取回收率均值91.8%，CV為4.4%。內(nèi)標(biāo)索磷布韋-13C-d3提取回收率均值114.4，CV為4.7%，內(nèi)標(biāo)GS-331007-13C-d3提取回收率均值93.1，CV為3.5%。

配制中間溶液，參照上述過程分別稀釋得到N-LQC、 N-MQC、 N-HQC。生物基質(zhì)相基質(zhì)效應(yīng)樣品的配制，在96孔板中加入50.0 μl 空白單個(gè)人血漿，按照樣品處理過程處理，提取上清后加入200 μl低、中、高溶液(N-LQC、N-MQC、N-HQC)，使其濃度與萃取后真實(shí)質(zhì)控樣品(L、M、H)中化合物和內(nèi)標(biāo)的理論濃度相同。使用生物基質(zhì)相面積和溶劑相面積比較得到待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)面積比，獲得歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子。索磷布韋的內(nèi)標(biāo)化平均歸一化基質(zhì)效應(yīng)為L(zhǎng)QC 1.00、MQC 0.98、HQC 0.98。GS-331007的內(nèi)標(biāo)化平均歸一化基質(zhì)效應(yīng)為L(zhǎng)QC 1.12、MQC 1.01、HQC 1.04，分析物索磷布韋經(jīng)內(nèi)標(biāo)歸一化的基質(zhì)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.0%、1.2%、0.5%。GS-331007基質(zhì)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為7.0%、1.7%、2.0%，均滿足相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過15%的接受標(biāo)準(zhǔn)，表明無明顯基質(zhì)效應(yīng)。

2.1.5 穩(wěn)定性 低、高濃度質(zhì)控樣品在室溫放置23.9 h，-20 ℃冷凍放置24 d，-20 ℃連續(xù)5次凍融循環(huán)，80 ℃連續(xù)5次凍融循環(huán)，生物樣品前處理過程中在白光室溫2 h、黃光冰浴下22 h，制備后樣本6 ℃放置147 h，待測(cè)物血漿樣品在20 ℃條件下儲(chǔ)存18 d、44 d和80 ℃條件下儲(chǔ)存44 d、132 d后進(jìn)行測(cè)試分析，結(jié)果表明準(zhǔn)確度偏差均小于15%，說明具有良好的穩(wěn)定性。

2.2 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 空腹?fàn)顟B(tài)下40例健康受試者口服受試制劑或參比制劑后，不同時(shí)點(diǎn)測(cè)定索磷布韋的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖1，測(cè)定GS-331007平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2。餐后狀態(tài)下40例受試者口服受試制劑或參比制劑后，不同時(shí)點(diǎn)測(cè)定索磷布韋的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖3，GS-331007平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖4。

2.3 生物等效性評(píng)價(jià)

2.3.1 空腹 以索磷布韋及其代謝物(GS-331007)的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0-t、AUC0-inf評(píng)價(jià)受試制劑與參比制劑的生物等效性，Cmax、AUC經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，索磷布韋Cmax、AUC0-t、AUC0-inf幾何均值比值分別為90.55%、97.26%和94.62%，GS-331007Cmax、AUC0-t、AUC0-inf幾何均值比值分別為98.91%、98.98%和99.46%，均在80.00%～125.00%；方差分析結(jié)果顯示序列、周期、制劑對(duì)Cmax、AUC0-t、AUC0-inf均無顯著影響(P值均>0.05)；個(gè)體間存在差異(表2、3)。按照生物等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，可判定2種制劑生物等效。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)（n）和率（%）表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)；采用Logistic回歸模型實(shí)施多因素分析；P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3.2 餐后 以索磷布韋及其代謝物(GS-331007)的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0-t、AUC0-inf評(píng)價(jià)受試制劑與參比制劑的生物等效性，Cmax、AUC經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，索磷布韋Cmax、AUC0-t、AUC0-inf幾何均值比值分別為83.3%、91.53%和93.28%，GS-331007Cmax、AUC0-t、AUC0-inf幾何均值比值分別為100.63%、100.84%、101.01%，均在80.00%～125.00%；方差分析結(jié)果顯示序列、周期、制劑對(duì)Cmax、AUC0-t、AUC0-inf均無顯著影響(P值均>0.05)；個(gè)體間存在差異(表4、5)。按照生物等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，可判定2種制劑生物等效。

2.4 安全性評(píng)價(jià) 40例受試者全部進(jìn)入安全性數(shù)據(jù)分析集，一般狀況良好，無明顯不良反應(yīng)，空腹組有10例受試者出現(xiàn)11例次不良事件，其中貧血3例(7.5%)，尿隱血4例(10%)。餐后組有14例受試者出現(xiàn)20例次不良事件，其中貧血6例(15%)，尿隱血4例(10%)。所有不良事件均未經(jīng)治療恢復(fù)正常，試驗(yàn)結(jié)果顯示受試制劑與參比制劑安全性均較好。

表2 空腹?fàn)顟B(tài)下服用索磷布韋片受試制劑和參比制劑后索磷布韋的生物等效性評(píng)價(jià)結(jié)果

表3 空腹?fàn)顟B(tài)下服用索磷布韋片受試制劑和參比制劑后GS-331007的生物等效性評(píng)價(jià)結(jié)果

表4 餐后狀態(tài)下服用索磷布韋片受試制劑和參比制劑后索磷布韋的生物等效性評(píng)價(jià)結(jié)果

3 討論

本次索磷布韋片在空腹和餐后狀態(tài)下口服0.4 g/片受試制劑和參比制劑后藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)顯示，受試制劑和參比制劑空腹試驗(yàn)及餐后試驗(yàn)藥代動(dòng)力學(xué)變化趨勢(shì)相同，食物對(duì)藥物的Cmax無影響，其受試制劑安全性良好，兩種制劑在空腹和餐后狀態(tài)下均具有生物等效性。索磷布韋是第一個(gè)上市的核苷類NS5B、RNA聚合酶抑制劑，對(duì)人類的DNA和RNA聚合酶、線粒體RNA無明顯的抑制作用，故少有不良反應(yīng)[15]。本研究中出現(xiàn)的貧血不良事件與國(guó)外數(shù)據(jù)[16-18]和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[19]在治療慢性丙型肝炎患者中出現(xiàn)貧血事件相符合，說明該藥物在患者和健康人中均會(huì)出現(xiàn)貧血的不良事件。在該項(xiàng)研究中共出現(xiàn)10例尿隱血不良事件，目前未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，值得今后的試驗(yàn)研究中特別關(guān)注。

本研究采用了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定K2EDTA人血漿中索磷布韋和代謝物GS-331007濃度，該生物分析方法采用蛋白沉淀法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下，基于電噴霧電離技術(shù)，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析測(cè)定樣品濃度。LC-MS/MS方法具有高選擇性、高靈敏度，適于廣泛應(yīng)用。

隨著DAA的不斷研發(fā)和應(yīng)用，更加高效、短療程、易耐受、服用方便的藥物也必將不斷被發(fā)掘，索磷布韋等抗病毒藥物必將為全人類丙型肝炎患者造福，消滅慢性丙型肝炎指日可待。

作者貢獻(xiàn)聲明：劉廣文、高振月負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，資料分析，撰寫論文；于爽、薛金玲、梁文忠、蘭靜參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；楊海淼負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。