核苷(酸)類似物治療下產(chǎn)生的HBV病毒顆粒不具有感染性

【據(jù)《Hepatology》2020年2月報道】題：核苷(酸)類似物治療下產(chǎn)生的HBV病毒顆粒不具有感染性(作者Liu Y等)

核苷(酸)類似物(NAs)被廣泛用于慢性乙型肝炎(CHB)的臨床治療。NAs通過與dNTP競爭結(jié)合，一旦摻入將抑制HBV P蛋白的逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性，不可逆地終止子代病毒HBV DNA新鏈的延伸、合成，產(chǎn)生基因組截短的HBV子代病毒。NAs治療下產(chǎn)生的子代病毒是否可以在肝細(xì)胞中建立感染，目前尚未見報道。

本研究采用實時熒光定量PCR、Northern Blot、Southern Blot、蔗糖梯度離心、體外細(xì)胞感染和體外內(nèi)源性DNA聚合酶鏈延伸等實驗方法，探討了NAs治療下產(chǎn)生的子代HBV DNA的性質(zhì)以及子代病毒的感染性。結(jié)果表明，在NAs處理下HepAD38細(xì)胞上清中的病毒顆粒或裸核衣殼中的HBV DNA主要為不可逆終止的3’末端截短的單負(fù)鏈DNA，且體外聚合酶鏈延伸實驗也證實了新鏈合成被不可逆終止。與之一致，子代HBV病毒顆粒幾乎不感染HepG2-NTCP細(xì)胞或人原代肝細(xì)胞(PHH)。同樣，從接受NAs治療的CHB患者血清制備的HBV顆粒對PHH也無感染性。同時，接受NAs治療的患者血清中HBV DNA水平按逆轉(zhuǎn)錄的起點開始從X、S、PreC/C到rcDNA逐漸降低。而血清中的HBV RNA水平則呈現(xiàn)出相反的趨勢，從X、S到PreC/C區(qū)域逐漸增加。這種趨勢也在接受替比夫定治療隨訪隊列中得到了驗證。

上述結(jié)果表明，由于DNA新鏈合成的不可逆終止造成了病毒基因組截短，NAs治療下產(chǎn)生的子代HBV顆粒主要是失去了感染性的復(fù)制缺陷型。此外，本研究還提示，由于不同廠家HBV DNA定量試劑所檢測的HBV基因組區(qū)域不同，臨床上，在NAs治療下的CHB患者的病毒載量檢測可能存在差異。而此時所謂的“病毒載量”是否真能夠反映感染性HBV病毒顆粒的真實水平，將是一個非常值得探討的問題。

摘譯自：LIU Y, LIU H, HU Z, et al. Hepatitis B virus virions produced under nucleos(t)ide analogue treatment are mainly not infectious because of irreversible DNA chain termination[J]. Hepatology, 2020, 71(2): 463-476.