不同枸杞葉茶中黃酮、多酚及氨基酸組成分析

閆亞美，米佳，祿璐，羅青，李曉鶯，何軍，安巍，秦墾，曹有龍

（寧夏農(nóng)林科學(xué)院枸杞工程技術(shù)研究所，寧夏銀川750004）

枸杞的傳統(tǒng)藥用部位是果實(shí)，具有悠久的開發(fā)利 用歷史。除枸杞果實(shí)以外，枸杞葉俗稱天精草，是一味重要的中藥材，具有補(bǔ)虛益精、清熱止渴、養(yǎng)肝明目之功效。近年來，大量研究表明，枸杞葉富含多糖[1]、多酚和黃酮類[2]、亞精胺和萜類[3]等多種功效成分[4-5]，并具有抗氧化[3]、預(yù)防肥胖[6]、抗炎[7]、提高免疫力[8]、預(yù)防糖尿病[9]等多種功效作用，多被用于加工制成茶葉消費(fèi)[6]，也可作為新鮮蔬菜食用，市場(chǎng)應(yīng)用前景廣闊。

Zhao等研究表明不同產(chǎn)地的枸杞葉酚類物質(zhì)組成差異較大[10]。但不同品種、栽培條件和加工廠家/方式下枸杞葉中的成分差異性探討較少。另外，氨基酸也是枸杞葉茶中的重要的化學(xué)成分指標(biāo)。本文通過初步分析不同生產(chǎn)廠家、品種的枸杞葉及枸杞葉/芽茶樣本的總黃酮和總多酚的含量、氨基酸含量及組成情況，旨在為枸杞葉的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆丁（純度≥98%）：上海源葉生物科技有限公司；甲醇、無水乙醇：徐州天鴻化工有限公司；亞硝酸鈉：上海廣諾化學(xué)科技有限公司；氫氧化鈉、硝酸鋁：天津市大茂化學(xué)試劑廠；三氯化鋁：成都市科龍化工試劑廠。其它試劑均為分析純。

不同的枸杞葉及其葉/芽茶樣本信息如表1所示。枸杞葉茶指將枸杞葉/芽按照綠茶加工工藝制成的樣品，枸杞葉/芽指采摘后經(jīng)冷凍干燥制成的樣品。

表1 枸杞葉及葉茶樣品信息表Table 1 The information of leaves tea and leaves samples from

1.2 儀器與設(shè)備

Hitachi L-8900氨基酸分析儀、BS 224 S分析天平：德國賽多利斯公司；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；JP-1020全數(shù)字超聲波發(fā)生器：武漢嘉鵬電子有限公司；WHY-2往復(fù)式水浴恒溫振蕩器：常州市萬豐儀器制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 茶葉及枸杞葉/芽樣品提取

取各樣本200 g左右粉碎，準(zhǔn)確稱取樣品1.00 g（3個(gè)平行），分別置于250 mL平底燒瓶中，加入75%乙醇溶液50 mL，于70℃水浴中回流提取2 h，冷卻后過濾，棄濾渣，留濾液，再用75%乙醇定容至50 mL容量瓶中，4℃保存待用。

1.3.2 葉茶及枸杞葉/芽中黃酮測(cè)定

將1.3.1中提取的樣品，吸取0.5 mL，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)量，參考閆亞美等的方法進(jìn)行總黃酮含量的測(cè)定[11]。

1.3.3 葉茶及枸杞葉/芽中多酚測(cè)定

將1.3.1中提取的樣品，吸取1 mL以沒食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)量，參考閆亞美等的方法進(jìn)行總多酚含量的測(cè)定[11]。

1.3.4 氨基酸的測(cè)定

參考周志陽等[12]的氨基酸測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理及分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行方差分析（analysis of variance，ANOVA），采用 Ducan法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，采用因子分析進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA），所有試驗(yàn)均重復(fù) 3次。

2 結(jié)果及分析

2.1 不同來源的枸杞葉及其葉/芽茶黃酮含量分析

枸杞葉茶及枸杞葉中黃酮含量分析見圖1。

圖1 枸杞葉茶及枸杞葉中黃酮含量Fig.1 The contents of flavonoids in leaves tea and leaves from wolfberry

由圖1可知，9個(gè)樣品中，各類葉茶及枸杞葉中黃酮含量大小依次為 6、5、4、9、3、7、8、2、1 號(hào)。其中，黑果枸杞芽茶的黃酮含量顯著高于其它枸杞品種來源的芽/葉。

3個(gè)枸杞芽茶樣中，黃酮含量分別為1.18%、8.23%和6.49%，各樣品之間黃酮含量存在顯著差異。其中，黑果枸杞芽茶顯著高于其它兩個(gè)公司產(chǎn)的枸杞芽茶。3個(gè)不同葉茶含量分別為2.13%、4.91%和6.88%，三者存在顯著差異，但含量介于2%～7%之間，幅度小于芽茶中黃酮含量的幅度（1%～8%），但同一品種的枸杞葉在不同產(chǎn)區(qū)種植并加工后的黃酮含量存在差異。3個(gè)枸杞葉，包括嫩枝扦插苗的黃酮含量分別為7.59%、4.79%和3.15%。其中，黑果枸杞葉中的黃酮顯著低于寧杞1號(hào)和7號(hào)的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。

2.2 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶多酚含量分析

枸杞葉茶及枸杞葉中多酚含量分析見圖2。

圖2 枸杞葉茶及枸杞葉中多酚含量Fig.2 The contents of polyphenols in leaves tea and leaves from wolfberry

由圖2可知，9個(gè)樣品中，各類葉茶及枸杞葉中多酚含量大小依次為 6、5、2、4、1、7、3、8、9 號(hào)。黑果枸杞芽茶的多酚含量顯著高于其它枸杞品種來源的芽/葉或枸杞葉。多酚是茶葉中的主要功效成分，具有多種保健作用[13-14]，由此可見，黑果枸杞芽茶具有較高的利用價(jià)值。

3個(gè)枸杞芽茶樣，多酚含量分別為10.37%、14.73%和3.57%，各樣品之間多酚含量存在顯著差異。其中，黑果枸杞芽茶顯著高于其它3個(gè)公司產(chǎn)的枸杞芽茶（1號(hào)～4號(hào)、9號(hào)樣本）。3個(gè)不同葉茶含量分別為12.61%、8.47%和12.52%，三者存在顯著差異，但含量介于8.47%～12.61%之間，幅度小于芽茶中多酚含量的幅度（3%～14%）。3個(gè)枸杞葉，包括嫩枝扦插苗的多酚含量分別為13.5%、9.66%和8.16%。其中，黑果枸杞葉中的黃酮顯著低于寧杞1號(hào)和7號(hào)的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。

9個(gè)樣品中，各樣品黃酮和多酚除個(gè)別樣品外，黃酮含量和多酚含量樣本間均存在顯著差異。該結(jié)果揭示，生產(chǎn)工藝、品種、栽培條件等可能均影響枸杞葉茶的黃酮和多酚的含量；且除黑果枸杞芽茶外，寧杞1號(hào)和寧杞7號(hào)的嫩枝扦插苗也可作為良好的富含酚類物質(zhì)的枸杞葉茶加工原料。除9號(hào)樣品多酚含量小于黃酮含量外，其它樣品的多酚含量均高于黃酮含量。該結(jié)果表明，多數(shù)枸杞葉茶除黃酮外，還富含有其它類物質(zhì)的酚類化合物，其組成和結(jié)構(gòu)及其樣品之間的差異性有待于進(jìn)一步研究探討。

2.3 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶氨基酸含量分析

2.3.1 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶氨基酸含量的分析

不同來源枸杞葉及其葉/芽茶的氨基酸含量如表2所示。

表2 不同枸杞葉及葉茶中氨基酸含量（n=3）Table 2 The contents of amino acids in leaves and leaves tea from wolfberry（n=3） %

不同枸杞葉及其葉/芽茶中均檢測(cè)到17種氨基酸，其中，包括7種必需氨基酸，蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸，以及10種非必需氨基酸，天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、組氨酸、精氨酸。9種樣品中均沒有檢測(cè)到色氨酸。其中，含量最高的必需氨基酸為亮氨酸，含量最高的非必需氨基酸為天冬氨酸和谷氨酸，這與周志陽等[12]的研究結(jié)果較為一致。除茶氨酸外，谷氨酸和天冬氨酸是重要的鮮味氨基酸[15-16]，枸杞芽/葉富含谷氨酸和天冬氨酸賦予了其作為茶葉的良好原料的滋味源。

2.3.2 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶氨基酸含量的主成分分析

對(duì)不同枸杞葉及其葉/芽茶的17種氨基酸進(jìn)行主成分分析，可以觀察到組間樣本的總體分布趨勢(shì)，得分圖和載荷圖如圖3和圖4所示。

圖3 不同來源枸杞葉及葉茶氨基酸含量的載荷圖Fig.3 Loading diagram of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea

圖4 不同來源枸杞葉及葉茶氨基酸含量的得分圖Fig.4 Score chart of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea

第一主成分對(duì)總變異的貢獻(xiàn)率為76.5%，第二主成分對(duì)總變異的貢獻(xiàn)率為11.5%，這兩個(gè)主成分包含了樣本88.0%的信息，能夠充分覆蓋樣本的信息。從圖3可以看出，除天冬氨酸以外，其他16種氨基酸均分布在載荷圖的左側(cè)，說明這16種氨基酸的相關(guān)性較大。圖 4 中，2、3、5、6、9 號(hào)樣品分布在得分圖的左側(cè)，1、4、7、8 號(hào)樣品分布在得分圖的右側(cè)。表明，2、3、5、6、9號(hào)樣品的的氨基酸含量高于1、4、7、8號(hào)樣品。表明，樣本中的氨基酸含量差異較大。比較而言，2和3號(hào)來自同一家種植生產(chǎn)廠家，表明枸杞品種因素對(duì)氨基酸的含量具有影響；較黑果枸杞芽而言，成齡黑果枸杞樹葉氨基酸含量較低，不利于茶葉加工；此外，寧杞1號(hào)氨基酸含量較優(yōu)于寧杞7號(hào)，可見，品種差異對(duì)枸杞葉茶加工中的氨基酸指標(biāo)貢獻(xiàn)較大，進(jìn)而影響其茶的滋味品質(zhì)。

3 結(jié)論

黑果枸杞芽茶多酚和黃酮含量顯著高于其它各樣本，并富含較高的氨基酸。除個(gè)別樣品外，黃酮和多酚黃酮含量和多酚含量樣本間均存在顯著差異，且多酚含量均高于黃酮含量。不同品種和栽培條件下的枸杞葉及葉茶的黃酮、多酚、氨基酸含量與組成差異較大。此外，除黑果枸杞芽茶外，寧杞1號(hào)和寧杞7號(hào)的嫩枝扦插苗也可作為良好的富含酚類物質(zhì)的資源加以開發(fā)利用。